毛细管气相色谱法测定西瓜霜润喉片中薄荷脑的含量

操江飞，简国凤，朱培杰

（肇庆学院 环境与化学工程学院，广东 肇庆　526061）

西瓜霜润喉片是由西瓜霜、火硝、冰片、薄荷素油、薄荷脑等成分加工而成的中药片剂，是口喉中轻症状的主要用药，对重症具有一定的辅助治疗作用.西瓜霜润喉片具有清热、解毒、消肿止痛、清音润喉等作用，长期服用会产生一系列的不良反应,长期口含西瓜霜片的患者会对药物形成精神依赖，停药后会出现打哈欠、抑郁、厌食、呼吸加快、气喘加重等症状.因此对西瓜霜润喉片中成分含量进行检测，提高药片的质量非常重要.

该中药片剂执行标准收载于《中国药典》2010年版一部，目前尚未建立薄荷脑含量测定方法[1]，参考相关文献[2-8]，通过设计L9（34）正交试验考察了溶剂种类、溶剂用量及超声时间3个因素对西瓜霜润喉片中薄荷脑提取含量的影响，利用毛细管柱气相色谱法测定西瓜霜润喉片中薄荷脑含量，方法简单，为准确测定西瓜霜润喉片中薄荷脑含量提供方法.

1　实验部分

1.1　实验仪器

AG135电子天平（梅特勒-托利多科学仪器北京有限公司）；SK3310LHC超声清洗机（上海科导超声仪器有限公司）；GC-2010PLUS气相色谱仪（岛津集团）.

1.2　实验材料及试剂

西瓜霜润喉片（批号1211007、1209019、1209009，桂林三金药业股份有限公司）；无水乙醇（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；环己烷（分析纯，广东光华科技股份有限公司）；乙酸乙酯（分析纯，广东光华科技股份有限公司）；萘(化学纯，广州新港化工厂)；薄荷脑（中国药品生物制品检定所）.

1.3　薄荷脑提取工艺优化

采用L9（34）正交试验考察溶剂种类、溶剂用量及超声时间3个因素对西瓜霜润喉片中薄荷脑提取含量的影响.提取操作如下：取同批号的样品10片，研细，准确称取2.0 g，加入适量（5.0、10.0、15.0mL）提取溶剂（无水乙醇、乙酸乙酯、环己烷），进行超声处理（10、20、30 min），冷却至室温，再精密称定，用相应溶剂补足减失的重量.

1.4　色谱分析条件

色谱分析条件为：色谱柱为HP-INNOWAX(0.25 mm×30 m×0.25 μm)石英毛细管柱；以萘为内标物；进样口温度为165.0°C，检测器温度为195°C，柱温135.0°C；载气为高纯氮气（纯度＞99.999%），流速为1.29mL/min；进样量1µL；采用分流进样，分流比为5.0.

1.5　标准储备液的配置

准确称量内标物萘、标准品薄荷脑，用无水乙醇超声溶解，配制成标准储备液.配制标准储备液的浓度分别为：内标物萘溶液2.0 mg/mL，薄荷脑标准品溶液A4.0 mg/mL，薄荷脑标准品溶液B 2.0 mg/mL.

1.6　加标标准品的配置

准确吸取薄荷脑标准品溶液B 2.0 mL于20 mL的容量瓶中，加入2.0 mL内标溶液，用无水乙醇定容并摇匀，作为加标标准品溶液.

1.7　供试品溶液的配置

取同批号样品10片，研细，准确称量2.0 g，精密加入10.0mL无水乙醇，精密称定，超声处理20 min，冷却至室温.再精密称定，用无水乙醇补足减失的重量，过滤后取滤液4.00 mL置于10 mL的容量瓶中，加入1.00 mL内标物萘溶液，用无水乙醇定容至刻度，并摇匀.

2　结果与讨论

2.1　薄荷脑提取最佳工艺优化

提取溶剂的种类、用量以及超声时间，均会在不同程度上影响薄荷脑的提取效率.文献报道的薄荷脑提取溶剂主要是乙醇、乙酸乙酯和环己烷.本研究采用L9（34）正交试验考察溶剂种类、溶剂用量及超声时间3个因素对西瓜霜润喉片中薄荷脑的提取含量的影响，试验设计及结果分析见表1.

表1　正交试验设计及结果分析

由表1可见，在试验1条件下，从相同质量西瓜霜润喉片中提取薄荷脑的质量最多；由极差分析得知，各因素的影响次序为：溶剂种类＞溶剂用量＞超声时间.薄荷脑是一种饱和的环状醇，分子极性比较大，根据相似相溶的原理，薄荷脑更易溶于极性比较大的无水乙醇中.此外，薄荷脑的提取效率随着溶剂用量或超声时间的增加没有明显提高.西瓜霜润喉片中薄荷脑的提取最佳工艺条件为：溶剂为无水乙醇，溶剂用量为10.0mL，超声处理时间为20min.

2.2　系统适应性试验

取适量内标物萘溶液（无水乙醇稀释），加标标准品溶液，供试品溶液，按“1.4”所述的色谱条件进行测定，考察其系统的适应性，结果如图1所示.由图1可知：无水乙醇、内标物萘对样品中薄荷脑测定没有产生干扰，样品中薄荷脑峰与其它成分及内标物萘的峰完全分离，内标物萘的保留时间约为7.30 min，薄荷脑的保留时间约为4.96 min.

图1　实验色谱图

2.3　重复性试验

取同批号供试品6份，按照“1.7”操作方法配制供试品溶液，并按“1.4”色谱条件进行测定，记录薄荷脑和内标物萘的峰面积，并计算两者比值，结果如表2所示，在该条件下供试品溶液具有良好的重复性.

表2　同批号6份供试品溶液中薄荷脑和萘的峰面积测定结果

2.4　精密度试验

取适量加标标准品溶液，按“1.4”色谱条件进行重复测定6次，记录薄荷脑和内标物萘的峰面积，并计算两者比值，结果如表3所示.表3数据说明本方法具有较好的精密度.

表3　加标标准品溶液重复测定结果

2.5　线性关系考察

精密量取薄荷脑标准品溶液A 0.5、1、2、4、10 mL，分别置于20 mL容量瓶中，然后分别精密加入2.0 mL内标物萘溶液，再用无水乙醇定容至刻度并摇匀.按“1.4”色谱条件进行测定各稀释后薄荷脑标准品溶液，计算薄荷脑与内标物萘峰面积比值，结果如表4所示.并以其两者比值为纵坐标(Y)，以薄荷脑浓度为横坐标(X)，进行线性回归，如图2所示.结果表明，薄荷脑浓度在0.1～2.0 mg/mL范围内具有良好线性关系，回归方程为Y=4.4493X-0.0849，r=0.9999.

表4　线性关系考察结果

图2　线性回归曲线图

2.6　稳定性试验

按“1.7”方法制备供试品溶液，分别在0、1、2、3、4、5、6 h取样测定，结果如表5所示.由表5可知，薄荷脑与内标物萘峰面积之比的RSD%为0.2491%(n=7)，表明供试品溶液在6 h内稳定.

表5　供试品溶液6 h内测定结果

2.7　加标回收试验

准确称取同批号的西瓜霜润喉片2.0 g 9份，分别加入适量薄荷脑标准品，精密加入10.0 mL无水乙醇，精密称定，超声处理20 min，冷却至室温，再精密称定，用无水乙醇补足减失的重量，过滤后取滤液4.00 mL置于10 mL容量瓶中，加入1.00 mL内标溶液，再用无水乙醇定容，并摇匀.按“1.4”色谱条件进行测定，结果如表6所示.由表6可见，加标回收率在97.79%～100.11%之间，相对标准偏差(RSD)为0.8851%，表明该测定方法满足定量分析需要.

表6　加标回收试验结果

2.8　样品含量的测定

取3种不同批号的西瓜霜润喉片各10片，按“1.7”方法制备供试品溶液，按“1.4”色谱条件进行测定，结果如表7所示.结果表明，不同批号的西瓜霜润喉片中薄荷脑的含量有较大差异.

表7　不同批号的西瓜霜润喉片中薄荷脑含量测定结果

2.9　与其他气相色谱法的比较

通过与其他气相色谱法的比较（如表8所示），本研究分析方法同样具有良好的回收率和RSD值，可以准确测定西瓜霜润喉片中薄荷脑的含量.

表8　不同分析方法检测薄荷脑含量

3　结论

通过正交试验考察了溶剂种类、溶剂用量及超声时间等因素对西瓜霜润喉片中薄荷脑提取含量影响，优化结果为：溶剂为无水乙醇，溶剂用量为10mL，超声处理时间为20min，各因素影响次序为：溶剂种类＞溶剂用量＞超声时间.

采用毛细管柱气相色谱法对西瓜霜润喉片中薄荷脑的含量进行测定.结果表明：薄荷脑在线性范围0.1～2.0 mg/mL内表现良好(r=0.9999)；加标回收率为99.01%，相对标准偏差值(RSD%)为0.8851%.本试验方法操作简单，准确，灵敏度高，重现性好，为准确测定西瓜霜润喉片中薄荷脑的含量提供方法.

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社.2010：680.

[2]刘瑞江,张业旺,闻崇炜.正交试验设计和分析方法研究[J].实验技术与管理,2010,27(9)：52-55.

[3]翁雪萍,李惠教,年文炜.气相色谱法测定西瓜霜润喉片中冰片和薄荷脑的含量[J].中药新药与临床药理,2001,12(5)：366-367.

[4]胡艳鹏,云筠筠,韩世伟，等.毛细管气相色谱法测定西瓜霜润喉片中冰片和薄荷脑的含量[J].湖南师范大学学报(医学版),2007,4(3)：27-30.

[5]邹节明,刘江林,伍德久，等.气相色谱法测定桂林西瓜霜中冰片及薄荷脑的含量[J].中草药,1997,28(6)：343-345.

[6]刘宇,程璐.气相色谱法测定檀香通脉胶囊中冰片与薄荷脑含量[J].医药导报,2012,31(4)：497-499.

[7]王梅娟,曹海.气相色谱法测定胃刻宁片中薄荷脑含量[J].中国药业,2013,22(12)：94-95.

[8]刘钰华,梁健钦.气相色谱法测定清火片中薄荷脑的含量[J].广西医学,2010,32(10)：1273-1275.