5种酵母菌的体外抑菌实验

王旗 王祎丹 耿旭浩

实验室或临床实践研究表明，酵母菌对肠道细菌如大肠杆菌、沙门氏菌等引起的肠道感染、腹泻等疾病有保护预防性作用。酵母菌代谢后产物对致病菌的拮抗、竞争排斥作用是产生上述功能的主要因素。酵母菌拮抗作用产生的原因是多方面的： （1）酵母菌产酸，如乙酸、丙酸、乳酸等，酸对有害菌起生长抑制作用。（2）酵母菌产抗生素或细菌素类物质，对有害菌有杀菌作用。本试验从上述观点出发，用牛津杯法对5株酵母菌在体外的抑制菌能力及抑菌作用物质进行研究，为下一步动物实验打下基础。

目前，在动物养殖中抗生素被大量使用，由抗生素残留引发的食品安全问题日益增多，因此，健康养殖已成为保障动物性食品安全的关键。酵母菌是一种常见的适应性很强的兼性厌氧微生物。因其含有丰富的蛋白质、核酸、维生素、微量元素等营养物质，且具有易发酵、增殖成本低等优点，被广泛应用于食品、化工、药物、饲料、环境治理和生物工程等行业。本文前期研究发现，5种常见酵母菌具有一定的抑菌性。对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌抑菌效果显着，为其微生态制剂的开发及应用奠定基础。

材料与方法

材料与试剂

（1）菌种

试验菌种：毕赤克鲁维酵母BP- 18、胶红酵母、隐球酵母AP- 20、克鲁斯假丝酵母M5-13、葡萄有孢汉逊酵母、枯草芽孢杆菌、沙雷氏菌、巨大芽孢杆菌（本实验室保存）

指示菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌（本实验保存）

（2）培養基

营养琼脂培养基 （NA）、LB肉汤培养基 、YPD培养基。

（3）试剂

LB肉汤培养基， 北京路桥技术有限责任公司；YPD培养基，北京路桥技术有限责任公司；蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、氯化钠、葡萄糖， 北京奥博星生物技术有限公司， 以上试剂均为分析纯。

仪器与设备。ZSD- A1160生化培养箱、ZHWY- 2102C恒温摇床、ZHJ H- C1109B型超净工作台， 上海智城分析仪器制造公司； FE20 p H计， 梅特勒-托利多仪器 （上海） 有限公司。

指示平板法

（1）指示平板的制备

试验菌株酵母菌制备：将5种酵母菌接种于YPD培养基中进行活化及传代培养，并利用分光亮度计测定吸亮度以测其菌液量，使其菌液量达到106CFU/m L。

（2）指示菌液的制备

将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 分别接种于LB肉汤中进行活化及传代培养，并利用分光亮度计测定其吸光值使其菌液量达到106CFU/m L。

牛津杯法测定

结果与分析

酵母菌抑菌结果分析

从表结果可以看出，胶红酵母、葡萄有孢汉逊酵母对大肠杆菌具有抑菌能力，且葡萄有孢汉逊酵母对大肠杆菌抑菌能力最强，胶红酵母对大肠杆菌抑菌能力相对较弱，另外三种酵母无明显抑菌性能；胶红酵母、葡萄有孢汉逊酵母对金黄色葡萄球菌具有抑菌能力，且葡萄有孢汉逊酵母对金黄色葡萄球菌抑菌能力强于胶红酵母，克鲁斯假丝酵母M5- 13对金黄色葡萄球菌抑菌能力相对较弱，另外两种酵母无明显抑菌性能。

本实验所选取的5种酵母菌通过体外抑菌实验表明：隐球酵母AP- 20、毕赤克鲁维酵母BP- 18对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌无明显抑制作用，而葡萄有孢汉逊酵母、胶红酵母、克鲁斯假丝酵母M5- 13对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。