白鲜皮饮片标准汤剂质量评价体系构建

李军山 聂丽建 冀艳花 李雪利 常云凤 李振江

摘 要：为了提高白鲜皮配方颗粒的质量标准，采用15批白鲜皮饮片标准汤剂，建立了质量评价体系。

第1次加入10倍的水、浸泡30 min、煎煮20 min，第2次加入8倍的水、煎煮15 min，以标准化工艺制备标准汤剂，采用HPLC法测定黄柏酮和梣酮的含量及指纹图谱。结果显示：15批白鲜皮标准汤剂中黄柏酮的转移率为25.08%～44.08%，平均转移率为34.79%，标准偏差为5.37%；梣酮转移率为22.63%～32.86%，平均转移率为27.94%，标准偏差为3.56%；出膏率为20.56%～34.42%，平均出膏率为29.05%，标准偏差为3.33%。采用中药指纹图谱相似度评价系统进行指纹图谱测定，得到共有峰10 个，指认出白鲜碱、黄柏酮、梣酮3个峰。由此可知，白鲜皮饮片标准汤剂的制备工艺规范，样品质量稳定，指纹图谱相似度大于0.92，可用于白鲜皮配方颗粒的质量控制，并为白鲜皮饮片标准汤剂的应用和其他根茎类饮片的研究提供参考。

关键词：中药药剂学；白鲜皮饮片；标准汤剂；黄柏酮；梣酮；出膏率；指纹图谱

中图分类号：R284 文献标志码：A

文章编号：1008-1534（2018）05-0370-07

白鲜皮，出自《药性论》，载于《神农本草经》，列为中品[1]，为芸香科植物白鲜（Dictamnus dasycarpus Turcz.） 的干燥根皮[2]，主产于辽宁、河北、山东，江苏、山西、内蒙古、吉林、黑龙江等地亦产，以辽宁的质量为上佳。相关调查报告显示，在白鲜皮品种的各产区产量中，黑龙江占比为31.7%，辽宁占比为25.0%，吉林占比为15.0%，内蒙古占比为15.0%，其他产区产量占比为13.3%。

目前关于白鲜皮标准汤剂的质量控制方法尚无统一标准，且相关报道也较少。本研究参照《中药配方颗粒管理办法》（征求意见稿）和《中药配方颗粒质量控制与标准制定要求》（征求意见稿）的相关要求，将采集的5个产地的白鲜皮15批药材制成饮片，通过标准汤剂的制备，对有效成分含量、转移率、出膏率范围进行考察，并进行了指纹图谱研究，以期提高白鮮皮配方颗粒的质量标准，为白鲜皮饮片标准汤剂的应用和其他根茎类饮片的研究提供参考。

1 仪器与药品

1.1 仪器

Shunliu-12N冷冻干燥机，南京顺流仪器有限公司提供；DHG-9140A热风循环鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司、太仓精宏仪器设备有限公司提供；LC-20AT高效液相色谱仪，岛津仪器设备有限公司提供；Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱。

1.2 试药

梣酮标准品（批号：111700-201603）、黄柏酮标准品（批号：111923-201604）、白鲜碱标准品（批号：111828-201604），均购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.3 样品

采集了5个产地的15批白鲜皮药材，按2015年版《中华人民共和国药典》规定将白鲜皮药材制成饮片，15批白鲜皮饮片信息见表1。

2 方法与结果

2.1 白鲜皮饮片标准汤剂制备

称取白鲜皮饮片100 g，加水煎煮2次。第1次加水1 000 mL、浸泡30 min、煎煮20 min（沸腾后开始计时），第2次加水800 mL、煎煮15 min（沸腾后开始计时），合并煎液，用0.075 mm（200目）筛网趁热过滤，将滤液迅速冷却，用旋转蒸发器（65 ℃，-0.09 MPa）浓缩至适合冻干的流浸膏，用冷冻干燥机干燥，得到标准汤剂干燥粉末[3-7]。

2.2 白鲜皮饮片及标准汤剂中黄柏酮及梣酮含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（二者体积比为60︰40）为流动相，检测波长为236 nm，理论板数以梣酮峰计算应不低于3 500。

2.2.2 对照品溶液的制备

分别取黄柏酮、梣酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1.0 mL各含黄柏酮0.09 mg、梣酮0.06 mg的混合溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备

1）白鲜皮饮片供试品溶液

取本品粗粉（过4号筛）1.0 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇25 mL，称定质量，超声（250 W，40 kHz）60 min，取出放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2）白鲜皮饮片标准汤剂供试品溶液

精密量取浓缩至适宜程度的白鲜皮浓缩液5.0 mL，置于20 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得[8-15]。

2.2.4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液2.0，6.0，10.0，12.0，16.0，20.0 μL，注入液相色谱仪，以黄柏酮、梣酮的进样量（X）为横坐标，测定的峰面积（Y）为纵坐标，分别绘制标准曲线。由实验结果可知：黄柏酮在0.238 0～2.380 0 μg范围内线性关系良好，回归方程为Y=16 122X+4 568，r=0.999 8；梣酮在0.129 0～1.290 0 μg范围内线性关系良好，回归方程为Y=223 583X- 5 204，r=0.999 9。

2.2.5 精密度试验

按“2.2.3”项下方法制备同一批标准汤剂供试品溶液，连续进样6次，测得黄柏酮、梣酮精密度的RSD值分别为0.28%和0.36%，均小于2%，说明仪器的精密度良好。

2.2.6 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，12，18 h时测定黄柏酮、梣酮含量，计算黄柏酮、梣酮色谱峰的相对峰面积（relative peak area，RPA）及相对保留时间（relative retention time，RRT）。结果显示，RPA的RSD值分别为0.52%和0.77%，RRT的RSD值分别为0.19%和0.22%，说明供试品溶液在18 h内稳定性良好。

2.2.7 重复性试验

取同批标准汤剂干燥粉末样品6份，按2.3项色谱条件测定，计算黄柏酮、梣酮色谱峰的RPA及RRT。结果显示，RPA的RSD值分别为1.30%和1.56%，RRT的RSD值分别为0.23%和0.15%，表明该方法的重复性良好。

2.2.8 加样回收试验

取同一批已知含量的标准汤剂干燥粉末样品6份，每份约0.3 g，分别按样品含量的80%，100%和120%加入黄柏酮、梣酮对照品，按供试品溶液制备方法制备，依照上述色谱条件进行测定，计算其加样回收率，结果见表2。

2.2.9 饮片及标准汤剂含量测定

按照2.2项所述方法，测定15批饮片及标准汤剂白鲜皮中的黄柏酮、梣酮含量，结果见表3。

2.3 出膏率及梣酮、黄柏酮含量转移率

根据实际冻干得到膏粉量，计算各批标准汤剂的出膏率；根据膏粉和饮片中黄柏酮、梣酮含量，计算各批标准汤剂中黄柏酮、梣酮含量的转移率，见表4。

结果显示：15 批白鲜皮标准汤剂的出膏率为20.56%～34.42%，平均出膏率为29.05%，标准偏差为3.34%；梣酮转移率为22.63%～32.86%，平均转移率为27.94%，标准偏差为3.56%；黄柏酮转移率为25.08%～44.08%，平均转移率为34.79%，标准偏差为5.37%。

3 白鲜皮标准汤剂指纹图谱测定

3.1 色谱条件

色谱柱为日本GL Science公司InertSustain C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-水为流动相，进行梯度洗脱，洗脱梯度条件见表5，检测波长为228 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃；进样量为10 μL。

3.2 对照品溶液的制备

分别取黄柏酮、梣酮、白鲜碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1.0 mL含黄柏酮0.10 mg、梣酮0.06 mg、白鲜碱0.10 mg的混合溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备

取冻干粉1.0 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇25 mL，称定质量，超声（250 W，40 kHz）30 min，取出后放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤（过0.45 μm膜），取续滤液，即得[16-20]。色谱图见图1。

3.4 方法学考察

3.4.1 精密度考察

按“3.3”项方法制备同一批供试品溶液，连续进样6次，以黄柏酮为参比峰，计算其他主要色谱峰的RRT及RPA。结果显示，RRT的RSD值为0.59%，RPA的RSD值为1.80%，相似度为1.00，说明仪器的精密度良好。

3.4.2 稳定性考察

取同一供试品溶液，按3.1项色谱条件，分别在0，2，4，6，10，12 h时测定，记录色谱图，以黄柏酮为参比峰，计算其他各共有峰的RRT及RPA。结果显示，RRT的RSD值为0.35%，RPA的RSD值为2.8%，相似度>0.99，说明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

3.4.3 重复性考察

取同批标准汤剂干燥粉末样品制备6份，按3.1项色谱条件进行测定，记录色谱图，以黄柏酮为参比峰，计算其他各主要色谱峰的RRT及RPA。结果显示，RRT的RSD值为0.82%，RPA的RSD值为2.50%，相似度为1.00，说明该方法的重复性良好。

3.5 样品检测与分析

取经冻干的15批白鲜皮饮片标准汤剂粉末，选用3.1项方法制备标准汤剂供试品溶液；再选用

3.1项色谱条件进行测定，记录色谱图。将得到的15批供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2012版）中，采用自动匹配法生成共有模式对照图谱，分析各样品之间的共有峰和相似度，确定共有峰。结果显示，15批样品共有10个共有峰，见图2，其中S001—S015为白鲜皮标准汤剂， R为白鲜皮标准汤剂对照指纹图谱。

以黃柏酮色谱峰为参照，计算10个共有色谱峰的相对峰面积及相对保留时间，见表6和表7，指纹图谱相似度均在0.92以上，具体结果见表8。

4 讨 论

4.1 流动相选择

先后考察了乙腈-0.1%的磷酸水溶液、乙腈-水、乙腈-0.05%的磷酸水溶液、甲醇-水不同流动相梯度洗脱条件，综合考虑色谱图的基线、分离度、数目及峰面积，得出以乙腈-0.1%的磷酸水溶液梯度洗脱条件为最优。

4.2 柱温考察

先后考察了25，30，35 ℃共3个柱温条件，结果显示以30 ℃柱温的分离效果最好。

4.3 干燥方式考察

先后采用冷冻干燥、60 ℃真空干燥和100 ℃干燥3种方式。结果显示，黄柏酮含量分别为3.80，3.75，2.98 mg/g，梣酮含量分别为0.95，0.90 0.76 mg/g，与15批标准汤剂对照指纹图谱相比，相似度分别为0.997，0.991和0.899。结果表明：冷冻干燥和60 ℃真空干燥，膏粉含量及指纹图谱的变化不大；100 ℃干燥膏粉含量显著下降，指纹图谱差异很大，有些成分消失，故干燥温度不宜过高。

4.4 加水量考察

先后考察了加水量分别为8/6倍、10/8倍、12/10倍及16/14倍的几种情况。结果显示：出膏率分别为25.23%，28.15%，29.22%及30.11%；黄柏酮转移率分别为24.27%，25.07%，25.71%及25.98%；梣酮转移率分别为26.86%，27.21%，28.11%及28.68%。标准汤剂中梣酮、黄柏酮转移率和出膏率呈增长趋势。

4.5 煎煮时间考察

先后考察了煎煮时间分别为15/10 min，20/15 min，30/20 min及40/30 min的几种情况。结果显示：出膏率分别为27.79%，28.98%，29.62%及30.88%；黄柏酮转移率分别为23.33%，25.56%，26.67%及26.99%；梣酮转移率分别为24.86%，25.26%，26.11%及27.21%。標准汤剂中梣酮、黄柏酮转移率和出膏率呈上升趋势。可见，统一制备方法确有必要。

5 结 语

1）白鲜皮饮片标准汤剂的最佳制备方法如下。称取白鲜皮饮片100 g，第1次加入10倍的水，浸泡30 min，煎煮20 min，过滤；第2次加入8倍的水，煎煮15 min，过滤。合并2次提取液，滤液迅速冷却，用旋转蒸发器浓缩至适合冻干的流浸膏，用冷冻干燥机干燥，即得。结果显示：15批白鲜皮标准汤剂的出膏率为20.56%～34.42%，黄柏酮转移率为25.08%～44.08%，梣酮转移率为22.63%～32.86%；采用中药指纹图谱相似度评价系统进行指纹图谱测定，相似度大于0.92。

2）通过规范制备方法，从根本上保证了研究的规范性、质量标准的一致性和可控性，为配方颗粒的规范生产提供了技术保证，保障临床用药的安全及疗效。

3）中药饮片标准汤剂对于生产配方颗粒具有重要的指导作用，本文建立的白鲜皮饮片标准汤剂的制备工艺，质量稳定，标准可靠，可在实际生产中推广应用。今后还需根据功效的差异及饮片的特质设计不同的煎煮时间，以保障用药安全及临床疗效。

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