美国伪狂犬病监测计划（1.01版）—病例定义、数据来源及监测流程

文│美国农业部动物卫生检验局兽医处

动物卫生流行病学中心国家监测小组

译校│刘林青 张倩 张淼洁（中国动物疫病预防控制中心）

《美国伪狂犬病监测计划（1.01版）》由美国农业部于2008年4月公开发布，该监测计划的主要目标是在美国商品猪群中快速检测出猪伪狂犬病（PRV）的感染与传播、证明美国商品猪群中的PRV无疫以及监控PRV传入风险，并对监测流程、数据分析以及监测系统评估等内容进行了详细阐述。《美国伪狂犬病监测计划（1.01版）》的概述部分见本刊2018年16期。其病例定义、数据来源和每种监测流程的采样方法如下。

主要服务于目标1的监测流程：快速检测

以下列举的监测流程都包含了猪群概述、病例定义、数据来源以及采样方法，主要的监测流程包括：疑似PRV病例的报告、调查、诊断；诊断实验室内送检病猪组织的抗原检测；诊断实验室内送检病料的血清学检测；高风险猪群的血清学检测；与野生猪群接触猪群的血清学检测与自愿报告。

A 疑似PRV病例的报告、调查、诊断。这个监测流程是依赖于执业兽医、生产者和直接观察猪群的人群将疑似PRV的病例报告给AVIC、国家兽医或者他们指派的人员。

（1）猪群概述。适合抽样的猪群包括美国境内的所有猪群。

（2）病例定义与诊断。PRV的诊断必须与猪群历史、临床症状、样品诊断相结合。以下临床症状可能在PRV感染猪群中出现：哺乳仔猪的死亡率达100%，并且伴有中枢神经系统紊乱症状或者PRV引起的明显病变；PRV引起的母猪呼吸系统与繁殖系统障碍；带毒断奶仔猪除呼吸系统病变外常伴有中枢神经系统紊乱或死亡率逐渐升高。

病例的诊断以AVIC与国家兽医授权的区域流行病学家的建议为准。详细的病例定义在PRV项目标准中列出。

（3）数据来源。所有关注美国境内各地区猪群情况的生产者、执业兽医师、实验室人员都有义务上报包括PRV在内的必须上报疫病的疑似病例，行政人员在调查上报病例的同时必须报告以下信息：分布地区，疫情上报时间，猪群的临床症状（包括体温），猪群史（包括疫苗接种情况），染疫动物数量与当地畜群数量，向相关实验室送检的组织或病料诊断检测结果。

从这些病料中获得的数据必须登记进入动物卫生监测管理项目（AHSM）的相关数据库中，上报到AVCI或者州立兽医部门的阴性与阳性病例也都必须记录到数据库。

（4）采样方法。疑似病例应主动上报到AVCI与州立兽医部门，他们主要负责病料的采集以及疫情的管理，在这种监测流程中每年至少需要30个样品，附录1提供了在此流程中病料采集的成本与相对价值。

B 诊断实验室内送检病猪组织的抗原检测。

（1）猪群概述。2006年NAHMS的研究表明69.1%养猪地区需要兽医服务，监测流程包括所有向诊断实验室提交组织病料进行疫病诊断的养猪场，符合监测条件的组织、疫病症状将在下面做详细叙述。

（2）病例定义。所有向NAHLN合作兽医诊断室提供的病料必须符合以下标准方可进行PRV检测：育肥猪或母猪表现明显呼吸系统症状，病料至少包含扁桃体和（或）脑组织的病例，出现流产症状的母猪。

爱荷华州和明尼苏达州兽医诊断室有大量的送检病料，必须满足以上标准才会进行PRV的检测。另外，这些组织要做免疫荧光抗体检测或者在PRV参考实验室进行后续的PCR检测，至少需要具有以下条件中的一条特性：育肥猪或待产猪出现明显的呼吸症状，流产与繁殖障碍，未确诊的中枢系统紊乱，病理学家希望送检的未知病例。

（3）数据来源。采集到合适病料的NALHN实验室将通过NAHLN的电子通信系统收集和报告相关信息与抗原检测结果，信息将传递到ASHM内的PRV数据库，数据的收集将包括所有（阴性与阳性）的检测样品，样品信息包括：地理信息（地理学位置），病料收集送检与检测的日期，实施检测的原因，猪群出现的临床症状，包括疫苗接种情况在内的猪群史，感染动物与地方所有畜群的数量，送检的组织或样品，诊断结果。

（4）采样方法。表1列出了来自美国30个州和诊断实验室的历史数据（符合病例定义），在表内未出现的州也有可能提供病料。

表1 美国猪病诊断实验室提交样品的历史数据

这种通过相关权重法构建的样品检测是一种快速的检测方法，利用这个流程能够分析美国全国境内大约8600份符合条件的病例。根据附录1，我们预计仅仅这个流程就能为监测目标提供100%的快速检测结果，虽然在一个全面的监测系统中仅靠一种监测流程并不是明智的选择。

附录1提供了这个样品检测流程的统计学、数学以及流行病学等方面的判断标准，将会在一年后对这种新建立的监测流程所计划的样品数量在快速检测中对国家标准做出的贡献进行评估。

C 诊断实验室内送检病料的血清学诊断。

（1）猪群概述。该监测流程包括送检血清的养猪地区，送到实验室内进行包括PRV在内的疫病诊断与常规监测的血清样品。

（2）病例定义。具有呼吸系统、繁殖系统或者有其他PRV感染时相似症状的送检血清就能够检测。需要检测猪群其他各种疫病抗体的血清样品也可以用来检测，我们将随机挑选血清来进行PRV监测。

（3）数据来源。数据来自于PRV监测挑选的血清样品的分析，接受猪血清学监测的NAHLM实验室会从送检样品随机挑选一部分进行PRV分析，然后通过NAHLM的电子传输系统公布样品信息与检测结果，相关信息则上传到AHSM项目的疫病数据库，上传的数据包括所有的检测样品（阳性与阴性）。样品信息包括：地理信息（位置），收集、送检与检测日期，诊断结果，样品筛选的原因。

（4）采样方法。从每一批的样品中随机挑选最多5份样品进行PRV的血清学分析，假如送检血清的样品少于5份的话，所有的血清样品都要检测。

附录1提到这种监测流程的目标是为快速检测检测8000份案例，每次检测至少5份样品，所以将要分析40000份样品。

很多实验室每年要接受数千份的血清样品，所有送到NAHLN实验室的血清都要进行分析，以保证地方代表性，为达到每年8000案例的目标，所有实验室需按照分配的样品量进行代表性的检测。

D 高风险猪群的血清检测。

（1）猪群概述。这个监测流程由高风险的商品猪群（可能与野生猪群接触）组成，还包括可能在州际流动的猪群。

（2）病例定义。高风险猪群就是那些生活在野猪活动的范围内，并且在这些地方的管理导致猪群能够接触野生猪群而感染PRV。在这个监测流程中，以下的猪群与地区可视为高风险：一是坐落于野生猪群附近的高风险区，并且具有与外部接触通道的猪群/场址，指由国家、联邦或者管理人员划分根据项目划定的野生猪群生活范围10英里（1英里≈1.6千米）以内。二是猪群/场址的位置在野猪寻找配偶的10英里范围之内。三是猪群/场址的附近有动物迁徙的历史。

这些猪群都可以采样，AVIC、国家兽医或者他们的委派者有责任在所在州内将猪群进行分类，执业兽医的检查或者在同一生产体系下的跨州移动活动将有助于识别那些在各州边境活动的高风险猪群。

（3）数据来源。这种采样流程的数据来源包括血清学样品，以及国家/地方管理人员挑选的合适于PRV监测的猪群信息。NSU、NCAHP的工作人员以及流行病学专家将会帮助政府在合适猪群的数量和采样目标的基础之上建立采样标准。收集的样品数据将由联邦政府合作项目员工将所要求的电子信息上传到ASHM项目数据库，这些信息包括：场址信息（地理位置），日期，检测原因。

血清样品的试管壁将根据APHIS的送检标准打上条形码，以便NAHLN的仪器能够读取与分类，接受猪血清样品的NAHLN的实验室将通过NAHLN的电子信件系统将所有的检测结果（每个样品结果，包括阳性与阴性）上报，这些信息将以电子信息的形式传达到AHSM的PRV数据库。

（4）采样方法。AVIC、国家兽医或者其委派者可授权到农场进行高风险猪群甄别的检测，挑选出来检测的猪群必须具有代表性，来源要避免主观臆断，在高风险地区对合适猪群采样的频率可根据设施的类型来划定，具有生物安全防护地区的采样频率比未采取防护的地区要低，表2显示了采样频率。

对每个独立猪群使用95/10的统计法来决定采集血清样品的数量。95/10的采样是指当猪群内有10%的血清阳性时，有95%可能在猪群内检测到阳性。猪群采样数量如下：少于100头检测25头，100～200头检测27头，201～999头检测28头，1000头以上检测29头。

如果交易市场和公猪/母猪屠宰场与识别的高风险场点更匹配，并能按照95/10原则进行采样，那么则可放弃基于农场的采样流程。

我们已经确定使用这种采样流程的数学和统计学分析，根据附录1，可分为三部分：有跨州移动猪的高风险区域猪群，在野猪狩猎俱乐部附近的养殖场，有野生猪群县的户外猪群的检测。

为了实现快速检测发现感染，假定每年检测高风险区域跨州移动的1000个猪群、狩猎区10英里以内的75个猪群以及坐落于高风险区的500个户外生产点，详细信息见附录2。

表2 采样频率

E 与野生猪群接触猪群的报告与血清学检测。

（1）猪群概述。适合这种监测的猪群包括位于野生猪群活动区的高风险猪群，这种监测方式建立在自愿上报野生猪群侵入到家养猪群的基础上。

（2）病例定义。关注自己猪群周围的野生猪群情况并且将情况上报到相关机构的生产者都可以参与监测。当猪群划定为暴露组时就可以进行检测，暴露组分为：直接的物理接触，例如与野生公猪接触的繁殖期母猪；可以看到明显的与野生猪群接触的痕迹，比如活动轨迹。

（3）数据来源。数据的主要来源包括符合概述中描述的暴露猪群的血清和（或）抗原的分析以及相关的信息。

（4）采样方法。AVIC、国家兽医与其委派者决定上报的野生猪群是否采样，以及最合适的采样时间和方法。如果猪群符合检测的标准，我们会在接触事件发生后的30～60天内在猪场进行95/10水平的采样，如果猪群内出现相关的临床症状，立刻进行病理学和抗原学的检测。

这个调查中获得的数据将会录入AHSM项目组疫病数据库的事件管理模块中，为了显示调查过程的进展和维护报告暴露事件的历史记录，上报给AVIC或国家兽医的合格和不合格的案例都必须输入到数据库中。

样品采集的信息由联邦政府合作项目的负责人管理，并上传到AHSM的PRV数据库中，这些数据包括：场点信息（地理位置），暴露、样品采集以及样品检测的日期，样品筛选的原因，暴露的等级（地区、警戒线、性传播等）。

这个监测流程内接收送检样的NAHLN实验室必须将检测的结果通过NAHLN的电子通信系统上报结果，并将信息传达到AHSM的PRV数据库。

尽管这是病例检测中一个重要的环节，仅依靠可视的证据和自愿上报的话，这种采样流程对快速检测没有太大的作用，因为快速检测中，这个流程仅能达到最终目标的2%。如附录1所述，每年检测30个猪群，每个猪群花费300美元。

主要服务于目标2的监测流程：证明无疫

目标2的目的是证明美国商品猪PRV无疫，主要监测的基础是公/猪和育肥猪的屠宰监测。

F 屠宰场公/母猪的血清学检测。

（1）猪群概述。监测的猪群包括商业化养猪项目规定的并且在特定的联邦指定屠宰场屠宰的母猪，为保证足够的地理分布密度，也会挑选其他的屠宰场。由商品母猪和一些高风险母猪的检测共同组成。

（2）病例定义。在认定的屠宰场内宰杀的代表性的血清样品将使用NAHLN许可的血清学试验和诊断仪器来检测。由产业发起的，通过NSU指导的采样方案中所识别的场点开展的高风险群目标采样或许已发展为自愿项目的认定标准。

（3）数据来源。包括血清样品的信息（收集和送检的日期）、屠宰场的识别以及猪项目的识别号码。项目相关人员将指导方法的开发以及为屠宰样品的信息管理寻找资金支持，包括挑选样品的地域信息。电子硬件和软件系统将由CADIA的应用信息管理单位升级以保证采集的标注条形码的样品符合NSU提出的项目目标。

从这个流程中获得标有条形码猪样品的NAHLN实验室将通过NAHLN的电子通信系统公布所有的动物检测结果（包括阴性与阳性结果），这些信息将上传到AHSM的PRV数据库。要求的样品信息包括：场点信息（地理位置），收集送检及检测的日期，检测结果（通过NAHLN的电子通信系统）。

（4）采样方法。根据FSIS的动物处置报告系统截至2007年的数据，美国全国有659个联邦指定猪屠宰场，表3列出了宰杀商品猪、公猪、母猪的屠宰场数量：

表3 猪的屠宰场

在宰杀母猪的382个屠宰场中，其中有32个也宰杀商品猪，这些屠宰场仅2007年就宰杀了3306962只母猪。有25个屠宰场主要宰杀母猪，宰杀3125074头或者母猪总数占94.5%，我们有针对性地在这25个屠宰场内采集了至少90%的母猪样品，还有许多屠宰场也都是当前商品猪（公/母猪）长期监测的采样点。

电子动物疫病报告系统的数据将会更新母猪屠宰场清单，动物疫病报告电子系统是美国农业部食品安全监督服务（FSIS）的一个数据库。挑选的猪场根据屠宰母猪的数量分为3到4级，在一些大型的工厂则会适当地降低采样频率，以防止采样过于频繁，小型工厂适当提高采样的频率。按照现在的标准，未来5年中，采样量将从790000降到5000～6000，我们将建立一个过渡期，以满足当前MSS的参与者所要求的经济条件和样品量，过渡期也考虑到监测项目的标准和PRV监测数据库不断发生变化的情况。

附录1提到监测流程的相对权重、监测目标和优化，屠宰的公/母猪的监测列为第8条，根据加权法，这个流程的采样数量比证明无疫所需要的样品数量多80倍，但至今仅完成了目标的12%。使用附录1所描述的方法来看，证明在商品猪群内的PRV无疫仅需要5000份样品。

在州际贸易中自愿采用地方政策使用的精选动物的标签必须考虑到有目的性的检测PRV感染的高风险区，以及商品母猪群采样的代表性，NSU和NCAHP强烈希望生产的参与者在接下来的两年内自愿参与到识别项目中，识别系统的建立将有助于风险和随机监测时样品的采集，以及动物血清样品的检测。

G 屠宰场商品猪的肉汁检测。

（1）猪群概述。监测群体包括联邦政府挑选的屠宰场里屠宰的商品猪。送到食品安全监督机构所监测的猪代表了商品猪，这是因为这些屠宰场生产的商品是合法的州际/国际贸易的商品。

（2）病例定义。在选定的屠宰场内选择的具有代表性的商品猪的肉汁样品需要使用标准的肉汁检测试验进行检测。另外，屠宰场如果能自愿接受猪群区域识别编号（大多是可见编号，主要是印记）将有助于高风险猪群的定向采样，证明无疫的代表猪群的选择，或在NSU州抽样方案下的猪群中选择（目标1——快速检测D部分）。

（3）数据来源。这个监测流程的数据包括样品采集和运送的日期、屠宰场、动物地域识别号码以及符合病例的可进行地域识别的兽体（由屠宰场标注的代表地域信息的文身或尾号）的检测结果。

项目的工作人员不断发展方法和寻求资金，以允许获得所有待宰猪批号的电子信息，自愿参与地域信息识别的待宰猪群的批号必须与其最后生活的区域相关联，注意力将集中在工厂关注的关于机密信息的保护，这常常发生在那些第三方合作的私人企业将猪群所在地的一些敏感信息从屠宰场收集的信息分离出来，一旦这些信息被删除后仅剩地域识别信息，这些信息将被传送到NSU和CADIA用于监测算法的改进，电脑的硬件与软件将由CADIA-AIM进行更新以满足选择性的完成大量数字（印记）的即时识别并确定采样的地域信息，不断更新的硬件、软件系统等将提示采样者所需的胴体是何时到达采集地点的。

国家兽医处雇佣的动物卫生技术人员和/或接触的人员需要采集：可识别批号的样品，放入标有条形码并绑定固定编号的收集带中；采集的日期；运输的日期等。

（4）采样方法。最初是在14个已注册的商品猪屠宰场内采样，这些屠宰场宰杀的猪有50%是商品猪，添加新的屠宰场是为了保证足够的地理覆盖范围，表4列出了目前美国采集肉汁病料的屠宰场和样品数量。

为实现目标2，必须采集5000份肉汁样品。因为样品是用来证明无疫的，所以所有的样品都不可重复，不能有相同日期、相同的批号或地域编码，附录1说明了这种监测流程的弊端以及必须采集5000份样品才会有统计学意义。

表4 美国采集肉汁病料的屠宰场和样品数量

以目标3为目的的监测方法：监控PRV国际或者国内的来源

目标3的目的在于监测商品猪PRV的潜在传染源，其并不包括监测流程，但是包括确定高风险猪群的采样目标以及评估PRV由国外传入境的可能性。目标3由三部分组成：

（1）监测野生猪群，包括美国境内野生猪群的数量与分布以及监测野生猪群内PRV的存在情况。

（2）猪群禁猎区数量和分布的定期总结。

（3）监测国际上PRV的流行情况。

由于目标3支持监测活动但并不包含采样的流程，所以目标3的介绍方式与之前不同，猪群概述、病例定义、数据来源以及采样方法不全部适合目标3中的各个组成部分。

H 监测野生猪群。这部分是将每个州内野生猪群的分布和潜在风险通知到联邦政府的管理人员和州立兽医局。对野生猪群的监测可以细分为两部分：已知的野生猪群的分布情况和已知野生猪群的PRV的流行情况。但是正如之前在“野生猪群”［本刊2018年16期《美国伪狂犬病监测计划（1.01版）——概述》］中提到的，为了评估潜在的PRV暴露风险，我们认为所有的野猪都是PRV阳性。考虑到猪群被当地野生猪群感染的风险，通过采样获得血清学的监测数据往往存在一些不确定因素。

野生猪群的分布以及野生猪群的PRV监测：

（1）猪群概述。包括政府、联邦管理中心、野生动植物保护机构划定的所有野生猪群。野生猪群是指不受限制可自由活动的猪群。

（2）病例定义。我们可以在国家绘制的野生猪群分布图中辨别上报的野猪和群体的规模，发现野生猪群时应上报给州或联邦代理处，可能的话准确划分出其分布的位置。绘制的位置将用来帮助确定高风险猪群的地理位置。

为确定PRV在野生猪群中的存在状况，由国家和联邦代理处划分的野生猪群将由APHIS的野生动植物服务中心（WS）采样并进行PRV检测，并按照WS、VS以及政府管理人员的协议进行。这个监测项目的主要作用是证明一个地区是否有PRV的感染、PRV的阳性猪群是否在扩散，或者PRV在一个地区的野生猪群中是否消失。

（3）数据来源。所有用来绘制野生猪群分布的地图的数据将由州立兽医局及其合作单位进行收集和保存，并且使用即时绘图系统跟踪和监测野生猪群的动向，链接地址为http://www.uga.edu/scwds/dist_maps.htm。

送检野猪血清和组织病料的监测数据信息包括采集的日期、送检组织或样品的类型、送检猪的大概年龄或成熟程度以及送检猪的来源等，WS的工作人员将采集的样品的数据保存在ASHM的PRV数据库的野生猪群部分。

收到标有条形码的野生猪群样品的NAHLN或其他PRV指定实验室应该通过电子通信系统将结果从NAHLN数据库上传到AHSM数据库，相关的政府、联邦和WS的工作人员可以看到结果。

通过野猪PRV的血清学监测获得的发现或信息将通过绘图来展示已确定的PRV阳性猪群的分布，项目的工作人员将监控AHMS的数据库并给当地政府提供信息。

（4）监控的资源。证明野生猪群中存在PRV的样品由APHIS野生动植物服务中心（WS）提供。由WS采集的用于经典猪瘟（CSF）监测的样品同样也可以进行PRV和布鲁氏菌病的检测。样品量的大小由VS与WS合作后每年每个州样品的多少决定，并且依赖于空闲资金、CSF检测项目和其他机构的帮助。

野生猪群发现后由VS及其合作者（现在为SCWDS）绘制在地图上，联邦和州立机构将野生猪群情况上传到http://www.uga.edu/scwds/dist_maps.htm，可能的话，野生猪群的报告最好是验证过的。

I 猪群禁猎区的数量和分布的日常总结。

（1）猪群概述。符合目标3的猪群包括所有生态保护区猪群和野生猪群。

（2）病例定义。有未知情况的野生猪群的禁猎区是通过直接或间接接触给商品猪群带来疫病的，了解禁猎区的位置有助于联邦政府机构鉴别高风险猪群，这部分监测将协助其他的目标。在狩猎俱乐部周围的高风险猪群将符合目标1的“需进行血清学检测的高风险猪群”监测流程。

（3）数据和监控的资源。收集禁猎区的位置并在地图上标注。相关的数据包括禁猎区是否开放、是否有猪群及其地理位置。州、联邦及每个州内其他的管理机构应当每年将包含在管理计划中的野生/传统猪群的位置等信息作为其认证报告的一部分，这些信息由NSU使用并且绘制在NSU绘制的地图上，或提供给VS的合作者进行标注，汇总的地图将提供给NSU。

如有需要的话，政府有权对之前划分在禁猎区内的猪群进行血清学监测。

J 监控国际疫病情况。通过进口生猪及其产品或其他动物而引入PRV

的风险是很小的，为监控来源于国际的风险，CEAH的问题解决中心（CEI）与OIE以及行业内工厂合作，以保证公众及时掌握那些可能影响美国的疫病情况。CEI负责鉴别和监控那些可能会影响进口猪及其商品的一些变化。如果CEI在进口的猪或其商品中检测到PRV存在的可能性增加时，CEI将通知NSU并调拨适合的人员进行控制，接着将实行国内的PRV监测计划以及评估国内风险增加的情况。

另外，美国农业部国家卫生检验局将与国家动物卫生政策和项目员工、NCIE、OIE以及与美国兽医局国际服务中心交流的其他国家的兽医国际部门共同监控世界的动物健康水平，有关世界动物卫生状况的信息会在这些组织以及美国兽医处的其他部门和动物卫生机构之间进行交流。PRV正是国际之间交流的热点之一，当发现存在风险的国际来源时，NSU及其他管理机构将收到通知，NSU将评估这个风险并根据结果实施相应的国内监测计划。