口腔念珠菌感染患者口内菌株的检出情况和药敏性观察

徐 力

（辽宁省盘锦市大洼区人民医院 口腔科，辽宁 盘锦 124200）

口腔念珠菌感染为条件致病性真菌，患者可能是伴发临床体征的口腔念珠菌病，也可能是不伴有临床症状的健康带菌者[1]。近些年因为开展了越来越多的器官移植治疗，同时广谱抗生素及其他各类药物应用的不断增加，使得临床出现更多口腔念珠菌感染病例[2]。本研究具体分析口腔念珠菌感染患者口内菌株的分布情况，同时分析其药敏结果，以期为临床用药提供相应指导。

1 资料与方法

1.1 一般资料：回顾性分析2017年1月至2018年1月本院口腔念珠菌感染患者70例，男21例，女49例，平均年龄19～76（59.28±5.36）岁，将这70例患者视作观察组。另外选取50例健康者作为对照组，包括男17例，女33例，平均年龄20～76（60.07±5.53）岁。对照组患者均除外伴有口腔黏膜病、龋病、牙周病，患者均没有抗生素、抗真菌药物、免疫抑制剂、激素长时间持续使用史。两组各项基本资料比较无显著性差异（P＞0.05）。

1.2 方法：于病损位置利用无菌棉签沾湿氯化钠溶液后进行标本采集，通过显微镜对菌丝、孢子进行观察，在SDA上种好标本，进行持续2 d时间的培养。然后在念珠菌显色培养基上完成菌种的转种，持续给予2 d时间的培养，分析培养结果。将念珠菌菌种通过SDA设置37 ℃的温度进行持续24 h的培养，进行2次活化，保证其为指数生长期的后期。利用氯化钠溶液5 mL溶合菌落（直径超过1 mm）进行混悬液的制作，借助血细胞计数板调节浓度为（1～5）×106CFU/mL。通过RPMI 1640 液体培养基完成稀释处理（1000倍）。体外药敏试验通过微量液体稀释法进行，通过二甲基亚砜溶液将制霉菌素、伊曲康唑、特比萘芬溶解，制为1600、1600、12800 μg/mL溶度的贮存液，通过双蒸水将氟康唑溶解，制为贮存液（浓度1280 μg/mL），置于-20 ℃冰箱中保存等待使用。室温环境下溶化贮存液，借助RPMI1640液体培养基完成稀释。进行药敏试验时，将氟康唑、特比萘芬起始质量浓度保持为64 μg/mL，然后完成倍比稀释，使终质量浓度保持为0.5～64 μg/mL。进行单用药敏试验时控制伊曲康唑、制霉菌素终质量浓度为0.03～16 μg/mL，氟康唑、特比萘芬在0.5～256 μg/mL。

最后进行药敏反应板的制备，并将其置入37 ℃电热恒温培养箱中实施持续2 d时间的湿盒孵，确定ATCC 6258以及90028 标准株作为本研究的质控菌株，进行持续48 h的培养，对照阴性空白对照孔、生长阳性对照孔。

1.3 试验评价。①视觉判定法：念珠菌菌种判定依据菌鉴定培养基上菌落的颜色进行，如果为蓝灰色或者铁蓝色，则为热带念珠菌菌落；如果为紫色，则为光滑念珠菌菌落；白色念珠菌菌落颜色是绿色或者翠绿色；其他念珠菌菌落是白色。②最低抑菌浓度（MIC）：特比萘芬的MIC是培养基清亮相应的最低药物浓度，制霉菌素的MIC是生长完全抑制相应的最低药物浓度；伊曲康唑、氟康唑的MIC是生长抑制80%或以上（对照生长对照孔）相应的最低药物浓度。MIC有效标准为M27-A2范围内。有效率计算方法是剂量依赖菌株数所占敏感菌株数的比重。

1.4 统计学方法：借助SPSS16.0软件分析研究结果，[n（%）]表示计数资料，χ2检验，P＜0.05则存在统计学差异。

2 结 果

2.1 口内菌株检出情况：观察组和对照组120份标本中有70株被检出假丝酵母菌，检出率58.33%，观察组70份中假丝酵母菌有52份，占74.29%，对照组检出18份，占25.71%，检出率差异明显，P＜0.05。两组详细菌株检出情况见表1，白色念珠菌的检出率最高，P＜0.05。

表1 两组患者口内菌株具体类型检出情况比较[n（%）]

2.2 药敏结果：制霉菌素的敏感度有效性最高，特比萘芬最低，P＜0.05，伊曲康唑、氟康唑的敏感度有效率差异不明显，P＞0.05，见表2。

表2 4种药物对口腔念珠菌的作用分析[n（%）]

2.3 药物MIC值：经测定，特比萘芬联合氟康哇使用的MIC值在0.125～8.000，氟康哇联合特比萘芬在0.125～16.000，特比萘芬单用在1～128，氟康哇单用在0.15～64.00。

3 讨 论

白色念珠菌是出现率最高的一类真菌感染致病菌，本研究观察组白色念珠菌占比61.54%，与结论相符。但是近些年随着研究不断深入，逐步发现了非白色念珠菌在治疗口腔念珠菌病中的良好效果。念珠菌属于机体共生菌的一种，为正常菌群，多出现在胃肠道以及口腔，如果机体菌群出现失调表现，免疫功能降低会进展为条件致病菌，形成念珠菌病，甚至可能加重原发疾病，导致死亡[3]。

制霉菌素是广泛应用的一类抗真菌药，能够部分结合菌膜上的固醇，将其通透性改变，对菌体起到破坏作用，从而实现有效治疗[4]。本研究药敏结果也显示制霉菌素的敏感度有效性为100%，和结论具有一致性。特比奈芬为丙胺类中的一种抗真菌药物，研究显示浅部白色念珠菌感染经特比奈芬治疗的有效率仅为56%～70%，本研究药敏实验结果的有效性为57.14%，与结论一致。研究发现氟康唑与伊曲康唑间有交叉不敏感，或者存在耐药情况，主要是由于均为三唑类药物，在作用机制上存在交叉耐药表现[5]。同时氟康唑、特比萘芬联合应用后MIC值均明显低于单用结果，单独应用时菌株从不敏感转变成敏感，表明特比萘芬、氟康唑联合应用能够使白色念珠菌不敏感性菌株的生成得到延缓，使治疗获得更佳的效果[6]。

综上所述，白色念珠菌是主要口腔念珠菌种，针对耐药菌株的治疗，可以选择特比萘芬、氟康唑联合应用，能够获得更高的疗效。