离子色谱法测定注射用盐酸大观霉素中氯离子含量

段春建 王立萍 王青晓

盐酸大观霉素是氨基环醇类广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和阴性菌均有抗菌作用。大观霉素可以形成硫酸盐或盐酸盐，20世纪70年代发现其盐酸盐在较小的溶剂体积中更易溶解，且肌肉注射吸收更好，因此目前药用的是盐酸大观霉素。

盐酸大观霉素制剂仅有注射用盐酸大观霉素，规格为2g，为无菌原料直接分装。《中国药典》2015年版（Chp 2015）二部收载原料及其制剂，美国药典（USP 40）和日本药典（JP 17）收载原料和注射剂，英国药典2017（BP 2017）和欧洲药典（EP 9.0）只收载原料。

注射用盐酸大观霉素临床上用附带的苯甲醇注射液配制成混悬液，进行臀部肌肉注射。大观霉素与盐酸形成盐酸大观霉素，成盐的不完全会影响其溶解和吸收，进而影响其有效性。本研究建立了离子色谱法测定注射用盐酸大观霉素中氯离子的含量，进而确定其成盐比例。

一、仪器与试药

Dionex ICS-5000离子色谱仪（美国Thermo公司），抑制型电导检测器（阴离子抑制器ASRS300 4 mm）（美国Thermo公司）；Dionex Chromeleon色谱工作站；Sartorius BP211D电子天平（Sartorius公司）；Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司）。

0.1024 mol/L盐酸滴定液（河南省食品药品检验所），硫酸滴定液（河南省食品药品检验所），溴化钾、硝酸钾、亚硝酸钠、草酸铵、氟化钠，均为分析纯试剂。

29批注射用盐酸大观霉素来源于2016年国家评价性抽验样品，涉及生产企业4个，分别以数字1～4表示。

二、实验方法

1.色谱条件

色谱柱为Dionex IonPac AS11-HC色谱柱（250mm×4mm，5μm），预柱为Dionex IonPac AS11-HC色谱柱（50mm×4mm，5μm）。 以 15mmol/L的氢氧化钾溶液为淋洗液，等度洗脱，流速1.5mL/min；柱温30℃，进样量20μL，抑制电流为58mA，自循环模式。

图1 混合离子溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图

表1 回收率试验结果表

2.溶液制备

对照品溶液：精密量取1.0 mL盐酸滴定液至25 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，制成含盐酸约0.15 mg/mL的溶液。

供试品溶液：精密称取注射用盐酸大观霉素约10 mg，置10 mL容量瓶中，用水稀释至刻度。

分别取对照品溶液、供试品溶液按上述色谱条件进样检测，记录色谱图，按外标法以峰面积计算样品中氯离子含量（以HCl计）。

三、结果讨论

1.专属性试验

取空白溶剂20 μL进样并记录色谱图。结果空白溶剂对测定无干扰。

分别取溴化钾、硝酸钾、亚硝酸钠、草酸铵、氟化钠、盐酸滴定液、硫酸滴定液各适量，配制成各约0.15mg/mL的混合溶液，按色谱条件测定。结果各离子均可与氯离子较好分离，该法专属性良好。见图1～2。

2.线性关系

精密量取盐酸滴定液适量，加水稀释为盐酸浓度为0.36mg/mL、0.29 mg/mL、0.15mg/mL、72.62μg/mL、36.31μg/mL、18.16μg/mL、7.26μg/mL、3.63μg/mL的对照品溶液，分别进样20μL，记录色谱图，以氯离子峰面积A为纵坐标，盐酸浓度C（μg/mL）为横坐标进行线性回归，得线性回归方程A=584.94C-223.59（r=0.999）。结果表明，盐酸浓度在3.63～363.11μg/mL范围内与氯离子峰面积的线性关系良好。

3.精密度与重复性试验

取含量测定对照品溶液连续进样6次，氯离子峰面积的RSD为0.2%。结果表明该方法精密度良好。

取同一批次供试品（批号160301），平行配制6份供试品溶液，分别进样20μL，记录色谱图。计算盐酸含量的RSD为0.4%，表明样品的重复性良好。

4.检测限与定量限

逐级稀释对照品溶液，以信噪比（S/N）3∶1计，氯离子（以HCl计）的检测限为2.5ng；以信噪比（S/N）10∶1计，氯离子（以HCl计）的定量限为5.4ng。

5.稳定性试验

取供试品（批号160301），配制供试品溶液，分别于0h、1h、2h、4h、8h、12h和24h进样20μL，记录色谱图，以氯离子峰面积为指标考察溶液稳定性。氯离子峰面积的RSD为0.2%，表明供试品溶液24h内稳定性良好。

6.回收率试验

按样品加标回收法测定准确度。称取供试品（批号160301）约12.5mg，置25mL容量瓶中，精密加入盐酸滴定液0.4mL、0.5mL、0.6mL，用水稀释至刻度。每个浓度的溶液配制各三份，分别进样20μL，按外标法计算回收率，结果平均回收率为100.5% （n=9），RSD为0.9% （n=9），见表1。

7.样品测定

对4家企业29批次注射用盐酸大观霉素样品进行氯离子含量测定（以HCl计），平均含量为14.8%。

四、结论

盐酸大观霉素为二盐酸盐五水合物，分子式为C14H24N2O72HCl·5H2O，结晶水的理论含量为18.2%，氯离子（以HCl计）的理论含量为14.7%。本研究测定29批次样品中氯离子的平均含量为14.8%，与理论值相符。早期大观霉素晶体是硫酸盐形式，20世纪70年代发现其盐酸盐在较小的溶剂体积中更易溶解，且肌肉注射吸收更好。本品为棒状晶体结构，成盐比例稳定，也利于本品的质量稳定。通过本实验的研究，可以有效控制注射用盐酸大观霉素中盐酸的含量，并确定其成盐比例