CAPZA 1在非小细胞肺癌中的表达及临床价值

陈小华，李伟

宜宾市第二人民医院病理科，四川宜宾644000

目前，肺癌是全球肿瘤致死的首要原因，发病率和病死率均较高，是威胁人类健康的重要疾病，已成为全球的公共健康问题。肺癌的种类繁多，包括小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌等多种病理类型，其中，非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的发病率约占肺癌发病总数的80%，是肺癌的主要病理类型[1]。随着医学技术的飞速发展，虽然以手术为主的综合治疗取得了很好的疗效，但是，NSCLC患者的5年生存率仍不足20%，处于较低水平[2]。因此，如何有效地预测NSCLC患者的生存情况一直是临床工作关注的重点之一。CAPZ是一种肌动蛋白结合蛋白，可结合于肌动蛋白丝的正极，与肌动蛋白丝的动态装配和细胞运动状态有关。CAPZ由α和β两个亚基组成，CAPZA1是CAPZ的α1亚基[3]。有研究显示，CAPZA1在肝癌、胃癌、食管癌等多种类型肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要的作用，且肿瘤病理分级与患者的预后密切相关[3-5]，但是，目前仍缺乏关于CAPZA1在NSCLC中的预测作用的相关研究。因此，本研究探讨了CAPZA1在NSCLC的表达情况及其对NSCLC患者预后的预测作用，旨在为临床治疗NSCLC提供参考，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2013年1月至2014年1月于宜宾市第二人民医院接受手术治疗的NSCLC患者。纳入标准：①经细胞学或组织病理学确诊为NSCLC[6-7]；②有可供检测的肿瘤组织标本；③临床资料完整。排除标准：①既往接受过放疗、化疗和生物细胞免疫治疗；②存在意识或精神障碍；③合并心、肝、肾等器官功能不全；④合并血液系统、免疫系统等其他系统疾病。根据纳入和排除标准，本研究共纳入52例NSCLC患者，其中，男37例，女15例；年龄46～75岁，平均年龄（63.1±11.4）岁；肿瘤直径（0.8～11.8）cm，平均肿瘤直径（6.3±2.9）cm；TNM分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期14例，Ⅲ期18例，Ⅳ期12例；发生淋巴结转移34例，未发生淋巴结转移18例；发生脉管侵犯21例，未发生脉管侵犯31例。收集52例NSCLC患者的NSCLC组织标本及其癌旁正常组织（距离肿瘤组织2 cm以上）标本41例。

1.2 免疫组织化学染色方法

所有病理标本均于术中取材，标本获得后立即置于4%中性甲醛液中固定，经石蜡包埋，蜡块切片后，筛选出肿瘤细胞成分＞80%的切片进行检测。环保脱蜡液（购于中国博士得生物科技有限公司）脱蜡，高温修复抗原，3%H2O2处理10 min，10%山羊血清室温封闭1 h；Ki-67抗体（购于美国Proteintech公司）、兔CAPZA1多克隆抗体（购于美国Proteintech公司）4℃孵育过夜。采用抗鼠/兔通用型免疫组织化学检测试剂盒（购于美国Proteintech公司）检测Ki-67、CAPZA1抗体的结合情况并显色，苏木素复染2 min后进行脱水处理，中性树脂封片。Ki-67染色结果由两位病理科医师根据NSCLC阳性细胞所占百分比进行判定：＜50%判定为Ki-67指数低，≥50%判定为Ki-67指数高；Ki-67指数越高代表肿瘤细胞增殖越活跃。CAPZA1染色结果由两位病理科医师根据NSCLC阳性细胞所占百分比进行判定：1%～24%为弱阳性（+），25%～49%为阳性（++），50%～74%为中等阳性（+++），75%～100%为强阳性（+++++）；将“+”的免疫组织化学结果定义为CAPZA1低表达，将“++～+++++”的免疫组织化学结果定义为CAPZA1高表达。

1.3 观察指标及随访

观察CAPZA1在NSCLC组织和癌旁正常组织中的表达情况，分析CAPZA1表达情况与NSCLC患者临床特征的关系。术后均对患者进行了随访，随访方式为门诊配合电话随访，随访时间为1～48个月，以死亡、肿瘤复发为随访终点。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验或秩和检验。采用Kaplan-Meier法绘制CAPZA1高、低表达患者的生存曲线，采用Log-rank法比较CAPZA1高、低表达患者的生存情况。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织中CAPZA 1表达情况的比较

52例NSCLC患者的NSCLC组织中，CAPZA1高表达者20例（38.5%），低表达者32例（61.5%）；41例癌旁正常组织中，CAPZA1高表达者27例（65.9%），低表达者14例（34.1%）。在NSCLC组织中，CAPZA1低表达的比例明显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义（χ2=6.881，P＜0.01）。

2.2 不同临床特征NSCLC患者CAPZA 1表达情况的比较

不同年龄、性别、吸烟史、肿瘤直径、病理类型NSCLC患者NSCLC组织中CAPZA1表达情况比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。不同TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况、脉管侵犯情况、Ki-67指数的NSCLC患者NSCLC组织中CAPZA1的表达情况比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

2.3 CAPZA 1表达情况与NSCLC患者预后的关系

表1 不同临床特征NSCLC患者NSCLC组织中CAPZA 1的表达情况

CAPZA1低表达患者的中位生存时间为22个月（95%CI：10.183～33.817），CAPZA1高表达患者的中位生存时间为31个月（95%CI：22.806～39.194）。Log-rank检验结果显示，CAPZA1高表达NSCLC患者的生存情况优于CAPZA1低表达NSCLC患者，差异有统计学意义（χ2=3.978，P＜0.05）。（图1）

3 讨论

图1 CAPZA 1高表达（n=20）和低表达（n=32）NSCLC患者的生存曲线

近年来，与NSCLC细胞的侵袭和转移有关的蛋白逐渐被发现，其对预测预后和评估肿瘤病理分级的重要意义逐渐被认可，因此，与NSCLC病理分级和预后预测有关的蛋白是近年来NSCLC研究领域的热点[1-2]。研究表明，CAPZ是肌动蛋白结合蛋白，由α和β两个亚基组成，最初是从棘阿米巴虫和牛脑组织中分离得到。既往对CAPZ的研究主要集中在肌动蛋白丝与心肌肥厚的关系方面，认为CAPZ与心肌肥厚有关[3]。近年来，CAPZ在肿瘤中的作用逐渐受到学者的重视。研究表明，CAPZ可作为肝细胞癌和食管鳞癌的诊断标志物[4-5]。本研究结果显示，在NSCLC组织中，CAPZA1低表达的比例明显高于癌旁正常组织（P＜0.01），表明在NSCLC组织中，CAPZA1的表达水平较低。

NSCLC的TNM分期和分化程度与其恶性程度和疾病的进展密切相关，对于预测NSCLC的预后具有重要的价值，同时能够为治疗方案的选择提供参考[6-7]。本研究表明，不同TNM分期、肿瘤分化程度NSCLC患者NSCLC组织中CAPZA1的表达情况比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示CAPZA1可能与NSCLC的恶性程度及相关生物学行为有关。本研究证实，CAPZA1低表达的NSCLC患者更有可能发生淋巴结转移与脉管侵犯，推测其原因可能是CAPZA1参与了NSCLC的恶性转化和侵袭过程。另外，在Ki-67指数高的NSCLC患者中，CAPZA1低表达的比例大于Ki-67指数低的NSCLC患者（P＜0.05），提示CAPZA1可能对NSCLC细胞的增殖具有影响。但是，不同肿瘤直径NSCLC患者的CAPZA1表达情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05），这可能是由于影响肿瘤直径的因素较多，而不是仅仅与肿瘤细胞的增殖能力有关。因此，CAPZA1对NSCLC细胞增殖的影响仍有待进一步探讨。由此可以推测，CAPZA1表达水平可能对判断NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴结转移、脉管侵犯、Ki-67指数等具有一定的参考价值。但是，目前CAPZA1参与影响NSCLC病理特征的具体机制尚不明确。既往在关于肝癌的研究中发现，CAPZA1可通过调控细胞骨架蛋白的表达调控肝癌细胞的上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），进而影响肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭[3,8]。但是，CAPZA1在NSCLC中的作用的相关研究仍较缺乏，CAPZA1是否通过相同的机制调控NSCLC的发生、发展仍有待进一步深入探讨。另外，本研究发现，CAPZA1高表达NSCLC患者的生存情况优于CAPZA1低表达NSCLC患者，差异有统计学意义（P＜0.05），表明CAPZA1的表达与患者的预后有关。其可能的机制是CAPZA1参与调控NSCLC细胞的分化程度、淋巴结转移、脉管侵犯和Ki-67指数，这亦提示，CAPZA1可以作为临床预测NSCLC患者预后的重要指标。

综上所述，在NSCLC组织中，CAPZA1的表达水平较低，且其表达可能与NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴结转移、脉管侵犯和Ki-67指数有关，参与NSCLC的发生、发展，并通过生存曲线推测其对NSCLC诊治及预后评估具有一定的参考价值。