胃癌组织中BRCA 1蛋白表达、血清TAP水平变化与铂类化疗效果的关系分析

蒋丽琳，肖南平，蒋欢

广元市第一人民医院消化内科，四川广元628000

胃癌是临床消化科常见疾病，大部分患者就诊时已处于晚期，单独手术治疗无法达到根治效果，综合治疗是提高胃癌治疗效果的关键。临床发现，术后辅助化疗可以有效减少胃癌患者的复发率，提高生存率[1]。奥沙利铂+替吉奥是胃癌辅助化疗的常用方案，作用靶点为DNA，通过与细胞DNA相结合形成链间DNA加合物，阻碍DNA复制过程，诱发细胞凋亡，缓解临床症状[2]。文献指出，乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene 1，BRCA1）、肿瘤异常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）是化疗药物所致细胞DNA损伤的修复基因，与肿瘤细胞的耐药具有密切联系，在胃癌疾病发展过程中具有指导意义[3-4]。本研究分析了108例晚期胃癌患者的BRCA1、TAP表达与化疗疗效及预后的关系，为胃癌患者的个体化治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1月至2015年6月于广元市第一人民医院诊治的胃癌患者。纳入标准：①临床诊断符合人民卫生出版社《外科学》第8版中的胃癌诊断标准[6]；②年龄为19～79岁；③接受手术治疗；④术后接受化疗；⑤经超声胃镜、病理检查证实为胃癌；⑥TNM分期为Ⅳ期；⑦生存时间＞3个月；⑧体力状况（performance status，PS）评分[5]≤2分；⑨临床资料完整。排除标准：①合并其他部位恶性肿瘤；②无可测量的实体病灶。根据纳入、排除标准，共纳入108例胃癌患者。其中，男59例，女49例；年龄为36～79岁，平均年龄为（58.4±5.0）岁；平均体重指数为（22.7±2.9）kg/m2；肿瘤分化程度：高分化26例，中分化50例，低分化32例；病理类型：乳头状腺癌32例，管状腺癌40例，黏液腺癌33例，印戒细胞癌3例。

1.2 治疗及疗效判定

所有患者均于术后第1天静脉滴注奥沙利铂130 mg/m22 h，3周重复1次；口服替吉奥，每次20 mg，每天2次，共28天。参照世界卫生组织（WHO）实体瘤评价标准[7]评估患者的疗效。完全缓解（complete response，CR）：病灶完全消失，维持1个月；部分缓解（partial response，PR）：病灶最大直径及最大垂直直径的乘积缩小≥50%，维持1个月；疾病稳定（stable disease，SD）：病灶最大直径及最大垂直直径的乘积缩小＜50%，或增加＜25%，维持1个月；疾病进展（progressive disease，PD）：出现新病灶或病灶最大直径及最大垂直直径的乘积增加≥25%，维持1个月。缓解率=（CR+PR）例数/组内总例数×100%。

1.3 观察指标及检测方法

1.3.1 BRCA 1术后采用免疫组织化学法检测了BRCA1蛋白表达。胃癌病灶组织经4%甲醛固定、脱水、石蜡包埋，常规切成厚度为4 μm的切片；脱蜡、水化、抗原修复，使用3%H2O2室温孵育；采用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）进行冲洗，滴入 1∶100稀释的鼠抗人BRCA1单克隆抗体，室温下培育，PBS冲洗，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，苏木素对比染色；梯度乙醇脱水，二甲苯透明，采用中性树脂封片，在显微镜下进行镜检。选择PBS代替一抗作为空白对照。BRCA1蛋白阳性表达结果判定：着色主要定位于细胞核，呈淡黄色、黄色、棕色。

1.3.2 TAP所有患者均于化疗前后检测了血清TAP水平。采集无名指末梢血25µl，并制作成2张血涂片，晾干后于每张涂片上滴入3滴TAP试剂，形成6个液斑，平放涂片；干燥后，经TAP检测系统图像分析仪检测凝聚颗粒。TAP聚合物面积检测：TAP水平正常时，无明显凝聚物，TAP聚合物面积为0～121µm2。

1.4 随访

随访1年，主要通过患者到医院门诊接受相关检查及电话的方式对患者的治疗情况、生存情况进行调查登记。

1.5 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件分析数据。计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用两独立样本t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；生存分析采用Kaplan-Meier法，生存时间比较采用Log-rank法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 疗效统计

化疗后疗效评价：CR占0.93%（1/108），PR占51.85%（56/108），SD占17.59%（19/108），PD占29.63%（32/108）。

2.2 BRCA 1蛋白表达情况及血清TAP水平变化

108例患者中BRCA1蛋白阳性表达29例，阴性表达79例。化疗前，108例患者的平均TAP聚合物面积为（88.4±20.0）µm2；与化疗前比较，108例患者中化疗后血清TAP水平升高30例，占27.78%，平均TAP聚合物面积为（104.7±16.3）µm2；与化疗前比较，TAP水平降低78例，占72.22%，平均TAP聚合物面积为（52.1±10.6）µm2。

2.3 不同BRCA 1蛋白表达、化疗后TAP水平变化患者的疗效比较

BRCA1蛋白阳性表达患者的缓解率为34.48%（10/29），低于阴性表达患者的59.49%（47/79），差异有统计学意义（χ2=6.492，P＜0.05）（表1）。与化疗前比较，化疗后血清TAP水平升高患者的缓解率为10.00%（3/30），明显低于TAP水平下降患者的69.23%（54/78），差异有统计学意义（χ2=30.499，P＜0.01）（表2）。

2.4 不同BRCA 1蛋白表达、化疗后血清TAP水平变化患者的预后比较

随访1年，BRCA1蛋白阳性表达患者失访0例，阴性表达患者失访3例；TAP水平升高患者失访0例，TAP水平降低患者失访3例。BRCA1蛋白阳性表达患者的1年累积生存率为20.7%，低于阴性表达患者的43.0%，差异有统计学意义（χ2=4.543，P＜0.05）；BRCA1蛋白阳性表达患者的中位生存时间短于BRCA1蛋白阴性表达的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）（图1）。与化疗前比较，化疗后血清TAP水平升高的患者1年累积生存率为16.7%，明显低于TAP水平降低患者的44.9%，差异有统计学意义（χ2=7.391，P＜0.01）；与化疗前比较，化疗后血清TAP水平升高患者的中位生存时间短于TAP水平降低的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）（图2）。

表1 不同BRCA 1蛋白表达患者的疗效

表2 化疗后不同血清TAP水平变化患者的疗效

3 讨论

图1 BRCA 1蛋白阳性表达（n=29）与BRCA 1蛋白阴性表达（n=79）患者的 1年生存曲线

胃癌作为临床常见的恶性肿瘤，其发病机制尚未明确，可能与抑癌基因失活相关。随着肿瘤分子生物学的研究，学者认为基因的变化在胃癌的发生发展过程中发挥重要的作用，同时基因表达与胃癌的发病率、化疗药物敏感性、术后生存率密切相关[8]。

BRCA1是一个重要的抑癌基因，位于人染色体17a21，是由1863个氨基酸组成的蛋白质，在细胞周期DNA损伤修复过程中发挥重要的作用[9]。当BRCA1基因突变时会导致肿瘤细胞对DNA断裂的化疗药物的敏感性增加，与铂类的耐药相关[10]。本研究108例晚期胃癌患者中BRCA1蛋白阳性表达29例，阴性表达79例；BRCA1蛋白阳性着色主要定位胃癌细胞的细胞核，呈淡黄色、黄色、棕色表达，提示BRCA1蛋白检测在胃癌患者的筛查中可能具有重要的意义。

TAP是癌基因与抑癌基因突变后所表达的产物，是肿瘤细胞在新陈代谢过程中产生的异常蛋白与钙组蛋白，在异常增生的肿瘤细胞中具有较高的表达水平[11]。当胃组织发生病理改变时，肿瘤细胞分泌大量的异常糖链糖蛋白，与钙组蛋白相结合形成TAP，使TAP水平升高，因此，TAP可作为胃癌肿瘤增殖的特征[12]。化疗的效果并不完全表现在肿瘤体积缩小，一般情况下影像学改变的时间晚于肿瘤活性改变。BRCA1、TAP作为敏感的肿瘤标志物，其表达水平在影像学出现变化前即可出现相关改变，可更好地为恶性肿瘤疗效的判断提供依据[13-14]。本研究发现，化疗后BRCA1蛋白阳性表达患者的缓解率低于阴性表达患者（P＜0.05）；与化疗前比较，血清TAP水平升高患者的缓解率明显低于TAP水平下降的患者（P＜0.01）。BRCA1、TAP是近年来发现的新型肿瘤特异性检测指标，与化疗药物的敏感性有一定的联系，能够更好地反映胃癌肿瘤细胞的数量及患者的病情，值得临床应用。

文献指出，临床可根据肿瘤标志物的表达状况判断化疗效果，病灶被控制时肿瘤标志物的表达水平降低，反之，则应尽快采取治疗措施，避免延误病情[15]。为进一步明确胃癌组织中BRCA1、TAP在化疗预后评估中的作用，本研究随访观察两组患者化疗后的生存率与生存时间，结果显示，BRCA1蛋白阳性表达患者的1年累积生存率低于阴性表达患者（P＜0.05）；与化疗前比较，化疗后血清TAP水平升高患者的1年累积生存率明显低于TAP水平降低的患者（P＜0.01）；BRCA1蛋白阳性表达患者的中位生存时间短于阴性表达患者（P＜0.05）；与化疗前比较，化疗后血清TAP水平升高患者的中位生存时间短于TAP水平降低的患者（P＜0.05），这提示BRCA1、TAP可作为胃癌辅助化疗预后判断的指标；检测BRCA1、TAP水平，有利于胃癌患者化疗方案的选择，进而改善患者预后。

关于肿瘤标志物对胃癌诊断的报道较多，但对化疗效果评价的报道较少。本研究的创新性在于通过分析BRCA1表达及TAP水平变化与疗效及预后的关系，以具体的研究数据证实BRCA1、TAP在胃癌患者疗效及预后评估中的作用，不仅有助于胃癌的早期诊断，还对化疗疗效评估均具有重要的指导意义。但因本研究样本量有限，结论客观性不足，仍需多样本、多中心的研究，得出准确结论。

综上所述，晚期胃癌患者的BACR1蛋白阳性表达情况及血清TAP水平与患者的疗效及预后有关。