老年类风湿关节炎患者血清CXCL-9及CXCL-10表达及临床意义

韩叶光 符生苗 符克英 王茹 张培

(海南省人民医院中心实验室，海南 海口 570311)

类风湿关节炎(RA)是一种以对称性多关节受累的滑膜炎和关节破坏为主要特征的自身免疫性疾病，是造成人类丧失劳动力和致残的重要原因之一〔1〕。近年研究发现，CXC趋化因子配体(CXCL)-9及CXCL-10在自身免疫性疾病中异常表达，通过固有免疫和获得性免疫过程参与自身免疫性疾病的发生发展，有望作为自身免疫性疾病的生物学标志物〔2,3〕。本研究通过检测老年RA患者血清CXCL-9及CXCL-10表达水平，分析其与RA活动度的相关性，旨在为RA的早期诊断及早期治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年1月至2018年3月海南省人民医院收治的老年RA患者108例，男36例，女72例，年龄60～83〔平均(68.50±9.26)〕岁。RA诊断参考1987年美国风湿病学会(ACR)修订的RA诊断标准和分类标准。另选取同期在院体检健康者50例作为对照组，男18例，女32例，年龄60～78〔平均(67.25±8.40)〕岁。选取的研究对象均排除合并其他自身免疫性疾病、感染、恶性肿瘤和重要器官系统疾病。本研究获得医院伦理委员会批准及患者知情同意。

1.2 研究方法 按照患者28个关节疾病活动性评分(DAS28)来区分RA活动度，DAS28<5.0分为低活动，DAS28≥5.0分为高活动，108例老年RA患者中低活动组41例，高活动组67例。采用Sharp评分法评估患者骨侵蚀和骨破坏的程度，Sharp评分越高表明结构性改变越严重。108例RA患者中非骨侵蚀组48例，骨侵蚀组60例。

1.3 观察指标 所有研究对象于清晨空腹抽取静脉血5 ml置于未加抗凝剂的离心管中，3 500 r/min，离心10 min分离血清于EP管，-70℃低温冰箱保存待测。类风湿因子(RF)及抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测，试剂盒由上海科新生物技术股份有限公司提供。CXCL-9及CXCL-10采用CXCL-9及CXCL-10鼠抗人单克隆抗体ELISA检测试剂盒(R&D Systems，美国)检测血清CXCL-9及CXCL-10含量。严格按照试剂盒说明书及操作步骤进行。

1.4 统计学方法 采用SPSS21.0软件进行t及χ2检验。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析各实验室指标对RA的诊断价值，曲线下面积(AUC)比较采用Z检验。相关性分析采用Pearson相关分析。

2 结 果

2.1 RA组和对照组临床一般资料比较 RA组与对照组性别、年龄、体重指数(BMI)、收缩压、舒张压、家族史、糖尿病史、高血压史、饮酒史及吸烟史等情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2 RA组和对照组血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平比较 RA组血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表1 RA组和对照组临床一般资料比较

表2 RA组和对照组血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平比较

2.3 高活动组和低活动组血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平比较 高活动组血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平均明显高于低活动组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表3。

表3 高活动组和低活动组血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平比较

2.4 骨侵蚀组和非骨侵蚀组血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平比较 骨侵蚀组血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平均明显高于非骨侵蚀组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表4。

表4 骨侵蚀组和非骨侵蚀组血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平比较

2.5 CXCL-9、CXCL-10、RF、抗CCP抗体及四项联合诊断RA的价值 CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体诊断RA的临界值分别为104.36 pg/ml、25.40 pg/ml、9.53 IU/ml、54.80 RU/ml。四项联合诊断RA的AUC(95%CI)为0.920(0.862～0.975)明显高于单项CXCL-9〔0.796(0.730～0.863)〕、CXCL-10〔0.828(0.771～0.884)〕、RF〔0.770(0.710～0.832)〕及抗CCP抗体〔0.752(0.690～0.814)〕，差异有统计学意义(Z=5.824、5.207、6.253、6.610，P<0.05)，其敏感度和特异度为93.0%和86.4%。见表5。

2.6 CXCL-9及CXCL-10与RF、抗CCP抗体及DAS28评分的相关性 Pearson相关分析显示，RA患者血清CXCL-9与RF、抗CCP抗体及DAS28评分呈显著正相关(r=0.546、0.458、0.362，均P<0.01)，CXCL-10与RF、抗CCP抗体及DAS28评分呈显著正相关(r=0.638、0.517、0.435，均P<0.01)。

表5 CXCL-9、CXCL-10、RF、抗CCP抗体及四项联合诊断RA的价值

3 讨 论

RA呈全球分布，全世界的发病率平均为1%，在我国的发病率为0.2%～0.5%〔4〕，约一半的患者在2年内可发生关节破坏，大多数患者出现不同程度的功能受损和关节畸形，致使RA患者的生活质量严重降低，给社会和家庭带来沉重的负担〔5〕。RA的具体发病机制目前尚未明确，多数学者认为，基因及环境因素、细菌和病毒感染及机体自身的免疫系统功能紊乱与RA的发生有关。CXCL-9属于趋化因子CXC亚家族，其通过与效应细胞上特异性受体CXCR3的结合，活化各类白细胞并趋化至病灶处，在机体的免疫防御中发挥作用。有研究表明，CXCL-9通过与相应受体相互作用调节免疫细胞的迁移，在炎症性疾病的发病过程中起着关键性作用〔6〕。CXCL-10是α趋化因子家族的一员，对于T细胞的发育、迁移、黏附起着重要作用，还能够活化单核细胞及自然杀伤细胞，参与多种自身免疫疾病的发生发展过程〔7〕。RF是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，是临床上常用来作为RA早期诊断和预后判断的检测指标〔8〕。抗CCP抗体以IgG型抗体为主，70% RA患者血清中可检测到抗CCP抗体，同时抗CCP抗体阳性也可以用来预测RA骨关节的破坏程度〔9〕。

本研究结果显示，血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平在RA患者中异常高表达，其可能通过调控促炎细胞因子的分泌，参与RA的发生发展。在RA发病过程中，机体在损伤因子刺激下，大量分泌趋化因子CXCL-9及CXCL-10，使效应性T淋巴细胞大量定向迁移，从而参与了与RA的病情发展〔10〕。本研究结果显示CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平与RA的活动度和骨侵蚀程度相关，可能参与RA的发生发展。Kuan等〔11〕研究发现，血清CXCL-9及CXCL-10水平变化与RA疾病活动性密切相关，可作为RA判断病情及疾病活动的敏感生物标志物。Pandya等〔12〕研究表明，CXCL-10与RA活动度呈正相关，可作为RA严重程度恶和预测关节损害的生物学指标。张琼等〔13〕研究认为，RF表达水平与RA病情进展相关，RF表达水平越高提示患者的预后越差。另有研究显示，RF及抗CCP抗体阳性是RA患者发生骨破坏的可能危险因素，RF及抗CCP抗体水平越高及其与RA密切相关的共同表位越多，关节损害就越严重〔14〕。DAS28评分是评估RA患者疾病活动度的有效指标〔15〕。本研究结果说明CXCL-9、CXCL-10与RF、抗CCP抗体共同参与了老年RA的病理过程，CXCL-9、CXCL-10水平升高可能导致病情活动，促进疾病发展，从而加重关节滑膜局部微环境炎症作用。安乐美等〔16〕研究也显示，趋化因子与RA患者的DAS28评分呈正相关，可作为评价RA疾病活动度的指标。四项联合诊断RA的AUC明显高于单项，其敏感度和特异度最好。李传利等〔17〕研究表明，趋化因子可作为RA诊断、病情判断及疾病活动的生物学指标，与RF及抗CCP抗体联合检测更有助于老年RA的诊断。张园等〔18〕研究证实，单一的自身抗体检测容易造成临床上对RA的误诊或者是漏诊，故一般需要结合多项联合检测以确诊老年RA。本研究发现，单独检测其中一项对RA的诊断均有一定的局限，四项联合检测有助于提高老年RA诊断的准确性。

综上所述，血清CXCL-9及CXCL-10在老年RA患者中异常高表达，且与老年RA活动度和骨侵蚀程度相关，其与RF及抗CCP抗体四项联合检测有助于提高老年RA诊断的敏感度和特异度。将CXCL-9及CXCL-10作为治疗靶点进行阻断，可能会减轻老年RA的炎性反应及减缓病情进展，但老年RA具体的发病机制尚未明确，未来还需要更多实验研究来证实CXCL-9及CXCL-10在老年RA发病中具体的作用。