比较6种油茶花、叶和籽的多酚含量及其抗氧化活性

陈佩云　湛晔　周安宁　唐淑芬

摘 要：本文采用超声辅助有机溶剂提取法提取6种不同品种的油茶花、叶和籽的多酚。结果表明，油茶籽多酚含量高于其他组织，油茶籽多酚含量最高的品种为衡阳红花大果（36.03±2.19）mg·g-1 DW;油茶花多酚含量最高的品种为衡阳红花大果（21.36±1.01）mg·g-1 DW。利用ORAC法对各品种油茶花、叶和籽的多酚提取液进行检测，其中最高为衡阳红花大果油茶种子ORAC值（851.21±9.45）μmol TE·g-1 DW。油茶花、叶和籽多酚与ORAC值存在较好的线性关系（R2>0.80）。

关键词：油茶;多酚;氧自由基吸收能力

Abstract：In this paper， ultrasonic assisted organic solvent extraction was used to extract polyphenols from six different varieties of Camellia oleifera， including flowers， leaves and seeds. The content of polyphenols in Camellia oleifera seeds was higher than that in other tissues. The highest polyphenol content of Camellia oleifera seeds was （36.03±2.19） mg·g-1 DW; the highest polyphenol content of Camellia oleifera seeds was （21.36±1.01）mg·g-1 DW. The highest ORAC value of Camellia oleifera seeds was （851.21±9.54）μ mol TE·g-1 DW. There was a good linear relationship between ORAC and polyphenols of Camellia oleifera （R2>0.80）.

Key words：Camellia oleifera; Polyphenol; ORAC

中图分类号：TS229

油茶（Camellia oleifera Abel.）是世界四大木本油料之一，与油棕、油橄榄和椰子并称为世界四大木本食用油料植物[1]。油茶生长在中国南方亚热带地区的高山及丘陵地带，是中国特有的一种纯天然高级油料[2]，主要集中在浙江、江西、河南、湖南、广西。此外，在越南、泰国、马来西亚和日本等国也有少量栽培[3]。

目前，我国对油茶的开发利用主要集中在油茶籽、油茶饼粕、茶籽壳等方面[4]，而对花、叶的加工利用较少。油茶籽含油30%以上，供食用及润发、调药，可制蜡烛和肥皂，也可作机油的代用品[5];茶籽粕中含有茶皂素、茶籽多糖、茶籽蛋白等，它们都是化工、轻工、食品、饲料工业产品等的原料[6];茶籽壳还可制成糠醛、活性炭等[7];茶树的灰洗头可杀死虱子包括虫卵[8]。油茶花作为油茶树的生殖器官，集中了油茶中的营养物质，富含蛋白质、氨基酸、还原糖、多糖、多酚、黄酮、花青素和维生素等生物活性成分[9]。油茶叶中富含多酚、黄酮、多糖、三萜皂苷和甾体等物质，其提取液具有降血糖、抗凝血、抗血栓形成等功效[10-11]。而丰富的油茶花、叶资源几乎只用于焚烧堆肥，遭到了极大的浪费，若能有效利用油茶花、叶中的活性成分，可以提高油茶的经济价值。油茶花、叶和籽中的主要抗氧化活性物质是多酚等成分，溶液萃取法是目前国内应用最为广泛的油茶饼粕提取方法之一[12]。而ORAC法是国际上检测抗氧化活性的权威方法之一[13]。研究油茶花、叶和籽中的天然抗氧化物，对油茶资源的再利用具有深远意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 原料和試剂

油茶的花、叶、种子，分别摘自江西、安徽、湖南衡阳3个产地，安徽和江西产地均属于市售，衡阳油茶叶由湖南大三湘油茶资源有限公司油茶实验基地提供。

甲醇、丙酮、无水乙醇：分析纯，天津试剂公司;荧光素钠盐、没食子酸、ABAP（2，2-偶氮二异丁基脒二盐酸盐）、Trolox标准品：Sigma公司;福林酚：分析纯，安徽博美生物制剂有限公司;96孔黑色酶标板：康宁公司;碳酸钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾：分析纯，广东省化学试剂工程技术研究开发中心。

1.1.2 仪器

DK-S24电子恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司生产;JY92-IIN超声细胞破碎仪，宁波新芝生物科技股份有限公司生产;2000型可见分光光度计，尤尼可（上海）仪器有限公司生产;FLUOstar酶标仪，美国Omega公司生产。

1.2 实验方法

1.2.1 样品处理

将经人工挑选的无病虫害的不同品种油茶花、叶和种子除去多余枝条后，冲洗3次，于50℃干燥箱中烘至恒重，制粉，过60目筛。

1.2.2 标准曲线绘制

配制0.1 mg·mL-1的没食子酸标准母液，分别吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL和0.5 mL母液于6个10 mL容量瓶中，加入1 mL福林酚显色剂和2 mL15%的碳酸钠溶液，定容;室温下反应2 h后测A760，绘制标准曲线[13]。

1.2.3 总多酚含量的测定

移取0.5 mL稀释后的多酚提取液于10 mL容量瓶中，记录稀释因子，加入1 mL福林酚显色剂和2 mL的15%碳酸钠溶液，定容，室温下反应2 h，测A760，据标准曲线计算没食子酸含量[14]。

1.2.4 油茶花、叶和种子多酚的提取

以70%乙醇作为溶剂，5 g样品，料液比1∶15，60 ℃超声萃取0.5 h，重复3次合并滤液，定容待测。

1.2.5 ORAC值测定

移取20 μL样品、空白、Trolox标准物质溶液，将40 μL PBS加入一个微型板孔中，在酶标仪内37 ℃下孵育10 min;各孔加入200 μL荧光素溶液37 ℃下孵育20 min;加入 20 μL ABAP溶液（除了加入40 μL PBS的孔）启动反应后迅速测量。酶标仪的测定条件为：激发波长485 nm，发射波长535 nm，每周期前振荡时间8 s、振荡宽度4 mm，测试周期35个[15-17]。

1.2.6 没食子酸的当量标准曲线

配制0.1mg·mL-1没食子酸标准母液，稀释制成2、4、6、8 μg·mL-1和10 μg·mL-1的没食子酸标准溶液。用方法1.2.5检测，制成标准曲线。

2 结果与分析

2.1 油茶多酚粗提物的总酚含量测定

根据实验方法1.2.2，测得标准曲线公式为y=1.144 5x

-0.169 7，R2=0.997 4。由标准曲线方程和1.2.3得出各样品总酚含量结果如表1所示，其中衡阳红花大果油茶籽多酚含量最高（36.03±2.19）mg·g-1 DW。油茶的3种不同器官组织花、叶和籽的多酚含量依次是油茶籽>油茶花>油茶叶;油茶花中，红花品种的多酚含量明显高于白花品种。衡阳地区采集的样品的总酚含量比安徽和江西地区高，可能是运输过程造成的成分损失。有研究表明，油茶品种的多酚含量与生长海拔成正比，且红花大果品种是油茶中的优良品种，富含各类天然功能成分[18]。

2.2 油茶多酚粗提物的抗氧化活性分析

2.2.1 油茶多酚粗提物的ORAC值分析

氧自由基吸收能力（Oxygen radical absorbance capacity，ORAC）又被称为抗氧化能力指数，是近年来国际上普遍使用的测定抗氧化能力新标准，ORAC值与其抗氧化能力成正相关[17]。

Trolox标准曲线和荧光衰减图，如图1、图2所示。Trolox的浓度与net AUC呈很好的线性关系。所有样品的稳定性试验的变异系数为都符合美国农业部许可的ORAC分析结果误差的变异系数≤15%要求。ORAC值的单位为μmol Trolox当量/g样品。

由图3所示，测得的结果在（34.24±1.33）～（851.21±9.45）μmol TE·g-1，样品总酚含量与ORAC值的相关系数R2>0.80，具有较强的线性关系，说明多酚是油茶的主要抗氧化活性成分，但依然存在少量其他抗氧化活性物质。其中油茶叶多酚与ORAC值之间线性关系最强（R2=0.87），其次是油茶籽（R2=0.86）、油茶花（R2=0.80）。

2.2.2 油茶多酚粗提物样品的抗氧化活性的评价

通过Trolox标准曲线和1.2.6，可以得到一条没食子酸与Trolox当量曲线y=43.648x+12.95，R2=0.9932。图4为各样品多酚含量与当量的对比图，衡阳产的白花小果油茶籽和红花大果油茶籽多酚浓度比没食子酸标准品的当量浓度较高，说明样品的抗氧化活性比没食子酸标准品的抗氧化活性更强，分别高4.45%和1.07%。以乙醇为溶剂提取油茶花、叶和籽多酚的同时，茶皂素、茶多糖以及蛋白等物质也同样析出，导致样品的当量浓度高于没食子酸标准品的浓度。其他多数样品均比没食子酸标准品当量浓度相近，浓度相差1.06%～48.36%，这是因为油茶花、叶和籽多酚提取物中不仅含有没食子酸，还有儿茶素、槲皮素等，而不同的多酚物质其抗氧化活性能力不同。

3 结论

本研究主要对6个品种的油茶花、叶和籽的多酚含量及抗氧化活性进行了分析对比。其中油茶籽多酚含量>油茶花>油茶叶;油茶花中红花多酚含量高于白花;油茶籽多酚含量最高的品种为衡阳紅花大果（36.03±2.19）mg·g-1DW;油茶花多酚含量最高的品种为衡阳红花大果（21.36±1.01）mg·g-1DW;油茶叶多酚含量最高品种为衡阳白花小果（4.62±0.28）mg·g-1

DW。样品的抗氧化活性与没食子酸标准品相近在1.06%～48.36%，甚至衡阳产白花小果油茶籽和红花大果油茶籽抗氧化活性更强，分别高4.45%和1.07%。没食子酸丙酯是常用的食用油抗氧化剂，而相同浓度油茶花、叶和籽的抗氧化活性与没食子酸相近甚至较高，说明其在天然油脂抗氧化剂的开发利用上具有很高的研究价值。

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