HPLC法测定清咽利喉合剂中黄芩苷的含量

邓绍友 吕艳 李玲瑞 杜瑶 赵永岗 袁建平

【摘 要】 目的：建立HPLC法测定清咽利喉合剂中黄芩苷含量的方法。方法：采用十八烷基键合硅胶为固定相;乙腈-0.1%磷酸（32∶68）为流动相;流速1.0mL/min;检测波长326nm，柱温30℃。结果：黄芩苷在0.05785～0.8677μg范围内呈良好线性（r=0.99977）;平均回收率为99.9%，RSD为0.62%。结论：本法快速准确，杂质分离完全，重现性好，可用于清咽利喉合剂中黄芩苷的含量测定。

【关键词】 HPLC;清咽利喉合剂;黄芩苷

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2019）17-0028-03

Abstract：ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of baicalin in Qingyan Lihou Mixture.Methods The octadecyl bonded silica gel was used as the stationary phase; acetonitrile： 0.1% phosphoric acid （32∶68） was used as the mobile phase; the flow rate was 1.0 mL/min; the detection wavelength was 326 nm， and the column temperature was 30℃.Results Baicalin showed good linearity in the range of 0.05785～0.8677μg （r=0.99977）; the average recovery was 99.9%， and the RSD was 0.62%.Conclusion This method is fast and accurate， complete separation of impurities and good reproducibility. It can be used to determine the content of baicalin in Qingyan Lihou Mixture.

Key words：HPLC; Qingyan Lihou Mixture; Baicalin

清咽利喉合剂是曲靖市第一人民医院研制的院内制剂。由黄芩、金荞麦、玄参、麦冬等组成，具有养阴、清咽、清热解毒的功效，临床用于咽喉肿痛、急性扁桃体炎、咽颊炎、上呼吸道感染等症。其中黄芩为制剂中的君药，有着悠久的应用历史，始载于《神农本草经》，为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效[1]。《本草正》中记载：“枯者清上焦之火，消痰利气，定喘咳……，解瘟疫，清咽，疗肺萎……”，临床上主要用于肺热咳嗽、痈肿疮毒，咽喉肿痛等症。黄芩苷是从黄芩中提取分离出来的一种黄酮类化合物，已证明有广泛的药理活性，具有消炎、解热、抗病毒、抗菌等作用[1-2]。2015版《中国药典》将黄芩苷作为黄芩的质量控制指标[3]。结合《中国药典》和文献[4-8]，通过对清咽利喉合剂中君药黄芩的有效成分黄芩苷进行含量测定，从而达到对该药的质量控制。实验采用高效液相色谱法测定清咽利喉合剂中黄芩苷含量，操作简单，准确性高，为有效控制清咽利喉合剂质量提供可靠且简便易行的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1260高效液相色谱仪（包括高压四元泵、DAD检测器、柱温箱、自动进样器、工作站）;超声波清洗器（上海声源超声波清洗器设备有限公司）;ME104万分之一电子分析天平、ME55十万分之一电子分析天平。

1.2 材料 黄芩苷对照品（批号：110715-201318，中国食品药品检定研究院，含量為93.3%）;清咽利喉合剂（批号：20190127-1、20190326-2、2019012-2，曲靖市第一人民医院制剂室），甲醇（分析纯，批号：127848，赛默飞世尔科技有限公司），乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品 1.55mg，精密称定，置25mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成浓度为0.05785mg/mL 对照品溶液，备用。

2.1.2 供试品溶液的制备 精密量取清咽利喉合剂2.0mL，置50mL 量瓶中，加50%乙醇35mL，超声处理30min，放冷至室温，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取此液5.0mL，置25mL 量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液经0.45μm滤膜，即得供试品溶液。

2.1.3 阴性样品溶液的制备 按清咽利喉合剂的处方比例，分别称取除黄芩以外的其他药材，依照清咽利喉合剂工艺制备不含黄芩的阴性样品，并按“2.1.2”项下制备阴性样品溶液。

2.2 色谱条件 ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸（32∶68），检测波长为326nm，流速1.0mL /min，柱温30℃。

2.3 线性关系考察 按“2.2”色谱条件分别进样1、3、5、7、10、15μL进行测定，以黄芩苷的进样质量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线，得到黄芩苷的回归方程为Y=1808.8865*Amt+14.1250，相关系数为0.99970。

2.4 精密度 精密吸取清咽利喉合剂（批号：20181214-1）供试品溶液10μL，按“2.2”色谱条件下连续进样6次，记录色谱峰的峰面积，结果峰面积的RSD%为0.12%，表明仪器的精密度良好。

2.5 专属性 将阴性样品溶液按 “2.2”项下色谱条件进行分析，结果见图1，在与样品主峰保留时间处未出现相应的色谱峰。

2.6 稳定性试验 精密量取清咽利喉合剂（批号：20181214-1）5.00mL，置50mL 量瓶中，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，室温放置，分别于0、2、4、8、12、24h进行测定，记录黄芩苷色谱峰的面积，结果峰面积的RSD为0.35%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.7 重复性试验 精密量取清咽利喉合剂（批号：20181214-1）5.00mL，置50mL 量瓶中，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，平行操作6份，按“2.2”色谱条件测定，测定黄芩苷的峰面积，计算黄芩苷的平均含量为2.663mg/mL， RSD为0.49%，表明该方法重复性良好。

2.8 回收率试验 精密量取清咽利喉合剂（批号：20190127-1）1.0mL，置50mL 量瓶中，共6份，分成三组，每组分别依次精密加入黄芩苷0.05785mg/mL 的对照品溶液1.0、2.0、3.0mL，照“2.2”项下方法制备供试品溶液，滤过，取续滤液，经0.4μm滤膜滤过即得。按“2.3”色谱条件，精密吸取6份供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定，记录黄芩苷峰面积，按外标法计算黄芩苷的含量，并计算回收率。平均回收率为99.9%，RSD为0.62%，回收率良好，符合分析方法的要求。回收率结果见表1。

2.9 样品含量测定 精密量取3批清咽利喉合剂（批号：20181214-1、20181207-1、20190110-1）5.00mL，置50mL 量瓶中，每批次平行操作2份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”色谱条件测定，外标法计算各供试品溶液中黄芩苷的含量。结果见表2。

3 讨论

3.1 色谱条件的选择 参照《中国药典》2015年版中黄芩含量测定，甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸为流动相，检测波长为326nm，流速1.0mL /min，柱温30℃，结果表明，以乙腈-0.1%磷酸为流动相的供试品色谱峰分离度较好，达到基线分离。

3.2 提取溶剂和提取方法 分别考察了超声提取法和回流提取法两种提取方法及不同提取溶剂（甲醇、乙醇、50%乙醇、70%乙醇），结果表明，超声提取效率较水浴加热回流高，其中提取效率50%乙醇>甲醇>70%乙醇>乙醇。因此采用50%乙醇作为提取溶剂，超声处理的方法，该操作方法简单易行，且主峰和杂质峰分离较好。

3.3 提取时间的考察 精密量取清咽利喉合剂2.00mL，3份，置50mL 量瓶中，加入35mL 50%乙醇，分别超声处理20、30、40min，结果表明，该样品中黄芩苷的含量经超声处理30min可提取完全。

綜上所述，实验采用高效液相色谱法测定清咽利喉合剂中黄芩苷的含量，操作简单，精密度高，稳定性好，可以作为本制剂的监控指标，更好的控制该制剂的质量。

参考文献

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[2]王雅芳，李婷，唐正海，等.中药黄芩的化学成分及药理研究进展[J].中华中医药学刊，2015，33（1）：206-211.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：301.

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[5]吴永芹，冯凯，周慧，等.HPLC法同时测定葛根芩连片中葛根素和黄芩苷的含量[J].中国药事，2012，26（3）：282-282.

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[8]刘春憬.正交优化黄芩苷的提取工艺[J].农产品加工，2015（1）：22-24.

（收稿日期：2019-06-18 编辑：刘 斌）