不同Hp分型消化性溃疡患者血清IL-32、IL-33水平变化及意义 ???

涂宏飞 李莉 费素娟

【摘要】目的 探讨不同Hp分型消化性溃疡（PU）患者血清IL-32、IL-33水平的变化及意义。方法 选取PU患者52例作为观察组，慢性浅表性胃炎的患者54例作为对照组，蛋白免疫印迹法检测2组Hp感染情况，ELISA定量检测其血清IL-32、IL-33水平。比较各组Hp感染率及血清IL-32、IL-33水平。结果 PU组Hp阳性率（80.8%）高于对照组（63.0%），P < 0.05;PU组Ⅰ型Hp比例（61.9%）稍高于对照组（55.9%），但差异无统计学意义（P > 0.05）。PU组血清IL-32水平为（95.29±17.79） pg/ml、IL-33水平为（72.42±16.19）pg/ml，均高于对照组的（84.10±15.17）pg/ml、（66.24±13.97）pg/ml，差异均有统计学意义（P均< 0.05）。不同Hp分型PU患者血清IL-32、IL-33水平比较差异均有统计学意义（P均< 0.001），其中Ⅰ型Hp感染组血清IL-32、IL-33水平均高于Ⅱ型Hp组及Hp阴性组，Ⅱ型Hp组血清IL-33水平高于Hp阴性组，差异均有统计学意义（P均< 0.05）。不同类型PU患者血清IL-32、IL-33水平比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）。结论 PU患者血清IL-32、IL-33水平升高，其中Ⅰ型Hp感染PU患者升高更为明显。

【关键词】幽门螺杆菌;消化性溃疡;毒力因子;白介素-32;白介素-33

【Abstract】Objective To investigate the changes and significance of serum IL-32 and IL-33 levels in peptic ulcer （PU） patients with different types of Helicobacter pylori （Hp）.  Methods Fifty-two patients with PU were selected in the observation group and 54 patients with chronic superficial gastritis in the control group. The Hp infection was detected by Western blot. The serum levels of IL-32 and IL-33 were quantitatively measured by ELISA. The infection rate of Hp and the serum levels of IL-32 and IL-33 were statistically compared between two groups. Results The positive rate of Hp in the observation group was 80.8%， significantly higher than 63.0% in the control group （P < 0.05）. The infection rate of typeⅠ Hp in the observation group was 61.9%， slightly higher than 55.9% in the control group （P > 0.05）. The serum levels of IL-32 and IL-33 in the observation group were （95.29±17.79）pg/ml and （72.42±16.19）pg/ml significantly higher compared with （84.10±15.17）pg/ml and （66.24±13.97）pg/ml in the control group （both P < 0.05）. The serum levels of IL-32 and IL-33 significantly differed in PU patients with different types of Hp （both P < 0.001. The serum levels of IL-32 and IL-33 in type Ⅰ Hp infection group were significantly higher than those in type Ⅱ Hp infection group and negative Hp group （all P < 0.05）. The serum levels of IL-32 and IL-33 did not significantly differ among patients with different types of PU （both P > 0.05）.  Conclusion The serum levels of IL-32 and IL-33 are increased in PU patients increased， especially in PU patients with type Ⅰ Hp infection.

【Key words】Helicobacter pylori;Peptic ulcer;Virulence factor;Interleukin-32;Interleukin-33

幽门螺杆菌（Hp）是人类感染率最高的细菌之一，大多数Hp感染者没有任何临床症状，但是长期感染Hp可能会引起胃肠道病变，包括慢性胃炎、消化性溃疡（PU）、胃黏膜相关淋巴組织淋巴瘤（MALT）和胃癌等[1-3]。Hp产生的毒力因子在其致病过程中起着至关重要的作用，其中细胞毒素相关蛋白A（CagA）和空泡细胞毒素（VacA）已被证明是胃黏膜萎缩、肠上皮化生及炎症反应的“元凶”[4-5]。IL-32和IL-33是新近发现的炎症因子，在多种免疫性疾病和慢性炎症性疾病中发挥着重要的生物学作用[6-7]。然而，Hp相关PU与IL-32、IL-33之间的关系目前尚无报道，因此本研究就不同Hp分型PU患者血清IL-32、IL-33水平变化及意义展开研究。

对象与方法

一、研究对象

选取2018年10月至2019年7月于徐州医科大学附属医院住院治疗的PU患者52例作为观察组，其中男33例、女19例，年龄（52.92 ±14.85）岁;同时收集同期行胃肠镜检查诊断为慢性浅表性胃炎的患者54例作为对照组，其中男26例、女28例，年龄（54.61±11.71）岁。排除标准：①合并有免疫系统疾病以及其他恶性肿瘤等疾病的患者;②严重的心、肝、肾功能不全的患者;③处于炎症状态或合并其他感染性疾病的患者;④既往曾行Hp根除治疗的患者。本研究经徐州医科大学附属医院伦理委员会审查通过，所有研究对象对本研究知情同意。2组性别、年龄比较差异均无统计学意义（P均> 0.05），具有可比性。

二、研究方法

1.电子胃镜及病理学检查

采用Olympus公司电子胃镜检查，并经病理学检查确诊为PU、慢性浅表性胃炎。

2.标本采集与储存

使用5 ml K2 EDTA抗凝采血管采集各组患者空腹静脉血4 ml，使用离心机以3000 r/min离心血液15 min，分离血清，将血清置于-80℃冰箱保存备用。

3. Hp及其分型检测

将血清标本取出，置于恒温箱内复温至37℃，采用蛋白免疫印迹法对患者血清Hp抗体（UreA、UreB、CagA、VacA）进行定性检测。根据血清Hp抗体可将Hp分为Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型Hp是产细胞毒素的菌株，即CagA（+）和（或）VacA（+），Ure（+）;Ⅱ型Hp仅产生Ure而不产生毒素;CagA、VacA及Ure均阴性即为Hp阴性。Hp抗体分型检测试剂盒来自深圳伯劳特生物制品有限公司，检测由经验丰富的实验人员严格按照说明书进行操作。

4.血清IL-32、IL-33濃度检测

将血清标本取出，置于恒温箱内复温至37℃，ELISA定量检测各组患者血清IL-32、IL-33水平。人IL ELISA试剂盒由上海将来实业股份有限公司提供。所有操作均严格按照试剂盒的说明书进行。

三、统计学处理

应用SPSS 22.0进行统计分析，正态分布的计量资料以表示，2组间比较采用独立样本t检验;多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验;计数资料以率或构成比表示，组间比较采用χ2检验。P < 0.05为差异有统计学意义。

结果

一、PU组和对照组Hp阳性率比较

PU组Hp阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）;PU组Ⅰ型Hp比例稍高于对照组，但差异无统计学意义，见表1。

二、PU组和对照组IL-32、IL-33水平比较

PU组血清IL-32、IL-33水平均高于对照组，差异均有统计学意义（P均< 0.05），见表2。

三、不同Hp分型PU患者血清IL-32、IL-33水平比较

不同Hp分型PU患者血清IL-32、IL-33水平比较差异均有统计学意义（P均< 0.001），其中Ⅰ型HP感染组血清IL-32、IL-33水平均高于Ⅱ型Hp组及Hp阴性组，差异均有统计学意义（P均< 0.05），Ⅱ型Hp组血清IL-32与Hp阴性组比较差异无统计学意义（P > 0.05），Ⅱ型Hp组血清IL-33水平高于Hp阴性组（P < 0.05），见表3。

四、不同类型PU患者血清IL-32、IL-33水平

不同类型PU患者血清IL-32、IL-33水平比较差异均无统计学意义（P均> 0.05），见表4。

讨论   PU在世界范围内具有较高发病率，Hp是导致其发病的主要因素之一[8]。Hp的定植、黏附以及毒力因子可损伤胃肠黏膜，促进胃泌素及生长抑素的分泌，导致PU的发生[9]。我国Hp总体感染率高达50% ～ 80%，临床研究证实CagA阳性Hp菌株的感染与更高级别的胃黏膜炎症以及严重的萎缩性胃炎有关，并被认为在胃癌的发生中起重要作用[10]。因此，Ⅰ型Hp可导致胃黏膜组织炎症反应，更容易诱导PU的发生发展。本研究中，PU组Hp感染率显著高于对照组，差异有统计学意义，与既往研究结论一致;而PU组Ⅰ型Hp比例虽稍高于对照组，但差异无统计学意义。

大量的研究表明，炎症免疫反应是Hp感染黏膜损伤的重要病理生理机制，Hp感染可诱导宿主细胞及体液免疫应答的激活，导致局部及全身的炎症反应。IL-32是最近发现的新型促炎因子，主要由自然杀伤（NK）细胞、单核细胞、上皮细胞和T淋巴细胞分泌，与慢性鼻窦炎、HCV、HBV等多种感染性疾病相关，而IL-32与PU的关系尚无报道[11-12]。本研究中，PU组血清IL-32水平较对照组高，提示IL-32可能在PU的发病过程中起到一定的促进作用。国内外研究证实，CagA可激活NF-κB和MAPK信号传导途径，从而促进IL-32的合成和分泌，血清IL-32水平升高又可正反馈性诱导TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β等炎症因子释放，从而加重局部炎症反应[13]。本研究中，Ⅰ型Hp感染PU患者血清IL-32水平明显高于Ⅱ型Hp组及Hp阴性组，进一步证实CagA是引起IL-32浓度升高的原因之一。

IL-33是IL-1超家族中的成员，主要来源于上皮细胞，可通过诱导Th2细胞来调节免疫应答[14]。研究证实，在白塞氏病、格雷夫斯病、多发性硬化、巨细胞病毒感染、慢性乙型肝炎等自身免疫性及慢性感染性疾病患者血清中IL-33水平显著升高。IL-33还能促进非小细胞性肺癌、乳腺癌、肾细胞癌和结直肠癌等恶性肿瘤的发展[15]。然而，目前尚未在Hp感染PU患者中评估血清IL-33水平。本研究显示PU患者血清IL-33水平明显高于对照组，且Ⅰ型Hp感染PU患者血清IL-33水平升高更为显著，提示血清IL-33水平升高可能是PU的一个致病因素。

PU是临床常见病，按病变部位可分为胃溃疡、十二指肠溃疡和复合性溃疡。在本研究中，各型PU之间血清IL-32、IL-33水平无明显差异。综上所述，PU患者血清IL-32、IL-33水平升高，其中以Ⅰ型Hp比例升高为著。然而，本研究中PU组Ⅰ型Hp比例与对照组无明显差异，但PU组的血清IL-32、IL-33的水平却显著高于对照组，考虑PU患者本身局部炎症反应较重，且Hp可能存在着CagA、VacA以外的其他途径造成IL-32、IL-33等炎症因子的活化，这需要后续进一步研究证实。由此可见，检测血清IL-32、IL-33水平有望对PU及Hp感染状况的诊断提供参考，并为难治性、复发性PU的免疫治疗提供新思路，但本研究纳入的研究对象较少，有待更大规模的临床研究加以验证。

参 考 文 献

[1] Fallone CA， Moss SF， Malfertheiner P. Reconciliation of recent helicobacter pylori treatment guidelines in a time of increasing resistance to antibiotics. Gastroenterology， 2019， 157（1）：44-53.

[2] Hooi JKY， Lai WY， Ng WK， Suen MMY， Underwood FE， Tanyingoh D， Malfertheiner P， Graham DY， Wong VWS， Wu JCY， Chan FKL， Sung JJY， Kaplan GG， Ng SC. Global prevalence of helicobacter pylori infection： systematic review and meta-analysis. Gastroenterology，2017，153（2）：420-429.

[3] Nejati S， Karkhah A， Darvish H， Validi M， Ebrahimpour S， Nouri HR. Influence of helicobacter pylori virulence factors CagA and VacA on pathogenesis of gastrointestinal disorders. Microb  Pathog，2018，117：43-48.

[4] Chen SY， Zhang RG. Pathogenic mechanisms of the oncoprotein CagA in H pylori-induced gastric cancer. Oncology reports，2016，36（6）：3087-3094.

[5] Hatakeyama M. Helicobacter pylori CagA and gastric cancer： a paradigm for hit-and-run carcinogenesis. Cell Host Microbe，2014，15（3）：306-316.

[6] Zhou Y， Zhu Y. Important role of the IL-32 inflammatory network in the host response against viral infection. Viruses， 2015，7（6）：3116-3129.

[7] Pusceddu I， Dieplinger B， Mueller T. ST2 and the ST2/IL-33 signalling pathway-biochemistry and pathophysiology in animal models and humans. Clin Chim Acta，2019，495：493-500.

[8] Lanas A，Chan FKL. Peptic ulcer disease.Lancet，2017，390（10094）：613-624.

[9] Kavitt RT， Lipowska AM， Anyane-Yeboa A， Gralnek IM. Diagnosis and treatment of peptic ulcer disease. Am J Med，2019，132（4）：447-456.

[10] Amieva M，Peek RM Jr. Pathobiology of helicobacter pylori-induced gastric cancer. Gastroenterology，2016，150（1）：64-78.

[11] Dos Santos JC， Barroso de Figueiredo AM， Teodoro Silva MV， Cirovic B， de Bree LCJ， Damen MSMA， Moorlag SJCFM， Gomes RS， Helsen MM， Oosting M， Keating ST， Schlitzer A， Netea MG， Ribeiro-Dias F， Joosten LAB. β-glucan-induced trained immunity protects against leishmania braziliensis infection： a crucial role for IL-32. Cell Rep，2019，28（10）：2659-2672.

[12] Santinelli L， Statzu M， Pierangeli A， Frasca F， Bressan A， Pinacchio C， Nonne C， Turriziani O， Antonelli G， d'Ettorre G， Scagnolari C. Increased expression of IL-32 correlates with IFN-γ， Th1 and Tc1 in virologically suppressed HIV-1-infected patients. Cytokine，2019，120：273-281.

[13] Sloot YJE， Smit JW， Joosten LAB， Netea-Maier RT. Insights into the role of IL-32 in cancer. Semin Immunol， 2018， 38：24-32.

[14] 劉伟，朱晓勇，金莉萍. IL-33及其受体ST2的研究进展. 现代免疫学，2014，34（5）：425-428.

[15] Aimo A， Migliorini P， Vergaro G， Franzini M， Passino C， Maisel A， Emdin M. The IL-33/ST2 pathway， inflammation and atherosclerosis： trigger and target？ Int J Cardiol，2018，267：188-192.

（收稿日期：2019-11-12）

（本文编辑：杨江瑜）