RA患者免疫功能失衡与疾病活动情况的关系研究

孟庆防

类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一组以炎性滑膜炎为临床表现的自身免疫性疾病，本病多发于双手、腕、膝以及足等关节处[1]。RA患者症状以体重下降、易疲、关节畸形以及功能受限等为主，部分患者还将出现心脏、呼吸系统、神经系统以及肾脏受累等，严重影响患者生存质量[2-3]。临床尚未就RA 病机达成一致，但多数研究认为T细胞免疫应答失衡是本病的重要影响因素[4-5]。最新研究表明[6]，T细胞因子异常表达与RA患者疾病进展时期相关，不同疾病阶段患者T细胞应答模式可能存在一定变化。为探究RA患者免疫功能失衡与患者疾病活动程度间的关系，本文选取90例RA患者进行如下研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年6月至2018年6月本院类风湿免疫科确诊的RA患者90例（RA组）、健康体检志愿者60例作为对照组。RA组，男26例、女64例，年龄46～79岁，平均（62.2±10.6）岁，病程（10.7±3.2）年，患者体质量指数（Body Mass Index，BMI）（23.4±2.1）kg/m2；关节压痛数目（18.4±7.1）个，DAS28（Disease Activity Score 28）评分＞5.1 分的有39例、DAS28 评分≤5.1 分的有51例。对照组，男18例、女42例，年龄41～79岁，平均（60.8±11.3）岁，患者（BMI 23.2±2.5）kg/m2。两组研究对象年龄、性别、BMI 比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

纳入标准：①RA患者的诊断标准参考2010年ACR（American College of Rheumatology）、EULAR（The European League Against Rheumatism）组织修订的诊断标准[7]，患者具有典型的关节肿胀、疼痛、畸形、晨僵等；②患者年龄范围19～79岁；③入组前3个月患者未接受任何相关药物治疗；④对照组为健康体检志愿者；⑤本研究符合《赫尔辛基伦理学宣言》[8]中临床研究相关规定。排除标准：①骨肿瘤疾病、骨结核；②合并心肝肾疾病；③伴有精神及认知功能障碍；④伴有病毒感染、全身感染性疾病；⑤其他类型的免疫系统疾病；⑥近3个月具有糖皮质激素、免疫抑制剂应用史。

1.2 方法

收集两组患者外周静脉血各4 mL，选用盐城市凯特实验仪器有限公司生产的KS50R 台式高速冷冻离心机进行4 500 r/min，10cm 半径离心12 min，收集上清选用上海睿钰生物科技有限公司生产的Countstar Rigel 智能荧光流式细胞仪检测两组患者Th17 细胞、调节性T细胞（Regulatory cells，Treg）表达水平；选用魏氏法检测患者ESR（Erythrocyte sedimentation rate）水平；选用ELISA 法检测IFN-γ（Interferon-γ）、IL-4（Interleukin-4）及CRP（C-reactive protein）表达水平，相关试剂盒由上海抚生实业有限公司提供，操作根据相应说明书进行。

记录RA组患者关节疼痛数目，并选用类风湿关节炎病情评价（DAS28 评分）系统对患者进行评价。分析Th17 细胞、Treg、IFN-γ、IL-4与患者关节疼痛数目、类风湿关节炎病情评价（DAS28 评分）的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 软件进行数据分析，计量数数据用（）表示，两组间分析采用独立样本t检验相关性分析采用Pearson 线性相关分析法；以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组的免疫相关指标比较

RA组患者的Th17 细胞、血清IFN-γ 均高于对照组（P＜0.05），RA组患者的Treg 细胞低于对照组（P＜0.05）；（表1）。

表1 RA组和对照组的免疫相关指标比较（±s）Table1 Comparison of immune related indexes between RA group and control group（±s）

表1 RA组和对照组的免疫相关指标比较（±s）Table1 Comparison of immune related indexes between RA group and control group（±s）

组别RA组对照组t 值P 值n 90 60 Th17 细胞（%）1.68±0.54 0.61±0.27 14.200 0.000 Treg 细胞（%）2.17±0.67 3.21±0.82-8.507 0.000 IFN-γ（pg/mL）24.28±6.33 7.52±2.11 19.771 0.000 IL-4（pg/mL）141.7±17.4 144.0±22.0-0.713 0.477

2.2 两组血清CRP、ESR水平比较

RA组患者的血清CRP、ESR水平均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 不同疾病活动程度的RA组患者免疫功能指标比较

DAS28 评分＞5.1 分RA患者的Th17 细胞、血清IFN-γ 均高于≤5.1 分的患者（P＜0.05），DAS28评分＞5.1 分RA患者的Treg 细胞低于≤5.1 分的患者（P＜0.05）。见表3。

表2 两组的血清CRP、ESR水平比较（±s）Table2 Comparison of serum CRP and ESR levels between the two groups（±s）

表2 两组的血清CRP、ESR水平比较（±s）Table2 Comparison of serum CRP and ESR levels between the two groups（±s）

组别RA组对照组t 值P 值n 90 60 CRP（mg/L）21.51±8.40 3.77±1.04 16.258 0.000 ESR（mm/h）43.88±7.19 16.50±3.12 27.781 0.000

表3 不同疾病活动程度的RA组患者免疫功能指标比较[n，（±s）]Table3 Comparison of immune function indexes of RA group with different disease activity[n，（±s）]

表3 不同疾病活动程度的RA组患者免疫功能指标比较[n，（±s）]Table3 Comparison of immune function indexes of RA group with different disease activity[n，（±s）]

DAS28评分＞5.1 分≤5.1 分t 值P 值n 39 51 Th17 细胞（%）2.11±0.51 1.40±0.44 7.079 0.000 Treg 细胞（%）1.81±0.62 2.40±0.66-4.313 0.000 IFN-γ（pg/mL）27.54±6.10 22.10±5.94 4.255 0.000 IL-4（pg/mL）145.0±16.2 138.1±16.8 1.961 0.053

2.4 RA组患者免疫功能指标与DAS28 评分、压痛关节数目的相关性

RA患者的Th17 细胞、血清IFN-γ与DAS28评分、压痛关节数目呈显著正相关（P＜0.05），RA患者的Treg 细胞与DAS28 评分、压痛关节数目呈显著负相关（P＜0.05）；见表4。

表4 RA组患者免疫功能指标与DAS28 评分、压痛关节数目的相关性Table4 Correlation between immune function index and DAS28 score,number of tenderness joints in RA group

3 讨论

Th17 细胞属于T细胞亚群家族，对机体防御及人自身免疫性疾病具有重要意义[9]。Th17 作为T细胞诱导的炎症反应的早期启动子，可通过促前炎因子释放来放大机体炎症反应[10]。Th17 还可向多种炎性细胞因子转化，并参与自身免疫性疾病的发生、发展；而Treg 细胞则可抑制自身反应T细胞表达，并维持机体免疫平衡[11]。本组研究结果提示Th17/Treg 失衡是RA 重要病理基础。Th17/Treg 平衡主要受IL-2、IL-17、TGF-β 等细胞因子及CC 趋化因子受体4、维甲酸相关孤儿核受体γt 等转录因子调控，这些细胞因子或许是RA 靶向治疗的新方向。

DAS28 评分是临床常用的RA 病情评估体系，主要包含压痛关节数、肿胀关节数、红细胞沉降率以及近7 d 患者RA 病情活动自评分4个项目，并以此计算患者DAS28 得分，得分越高提示患者RA病情越严重[12]。进一步的研究发现，RA患者的Th17 细胞与DAS28 评分、压痛关节数目呈显著正相关，RA患者的Treg 细胞与DAS28 评分、压痛关节数目呈显著负相关，这佐证了前述结论。其原因可能为：①RA患者活动期及病情影响所致，活动期患者Th17 高表达，Treg 低表达，而非活动期患者Th17 表达上升，同时Treg 增高，甚至与健康人群相似[13-14]；②治疗因素，活动期RA患者服药药物种类及剂量可能增大，某些药物将加剧患者Th17/Treg 失衡状况；③样本及检测误差影响。

IFN-γ 淋巴细胞来源的一种糖蛋白，可促巨噬细胞合成一氧化氮合酶，并引发氧化反应。IFN-γ还具有抗病毒以及免疫调节功能[15]。CRP 则是人应急相蛋白的一种，可通过与细胞表面的Fc7 受体相互作用来影响免疫细胞分泌，并以此联通人天然免疫系统及获得性免疫系统，最终介导机体炎症反应。ESR 增大与急性细菌性炎症、风湿热、慢性肾炎等疾病密切相关。患者疾病严重程度及活动期与IFN-γ表达水平密切相关，临床或可将IFN-γ 纳为RA 疾病严重程度及活动期评估指标。

由于基础条件不足，本组研究取样数量有限，研究广泛适用性可能还存在一定不足，这有待我们下一步的大数据研究。

综上所述，RA患者T细胞及免疫学因子失衡可能与患者疾病活动程度、病情严重程度有关。Th17/Treg、IFN-γ 等指标或可RA患者活动程度及病情严重程度评估指标。