呼吸道合胞病毒核酸分型检测性能验证

俞敏

摘 要：呼吸道合胞病毒核酸分型检测已经成为患儿诊断、治疗及预后情况的重要检测手段。在文章中，将采用实验分析的方法，对呼吸道合胞病毒核酸分型检测性能进行评估，希望能为指导临床工作提供一定的支持。

关键词：呼吸道合胞病毒;核酸分型检测;性能验证

呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus Pneumonia，RSV）是儿童呼吸道感染的主要病原体，可引起间质性肺炎及毛细支气管炎。患儿发病后临床常表现为轻度的中耳炎或者上呼吸道感染，随着病情的发展，可演变为下呼吸道感染等，严重的会危及患儿生命，因此需要寻找一种能够有效诊断呼吸道合胞病毒的方法，保证患儿能够得到及时的诊断和治疗。

1    性能验证实验

1.1  实验材料选择

以某医院于2018年4月份提供的咽拭子样本为研究对象，样本在经过免疫荧光法抗原分型检测后，发现抗原检测为阳性的样本数为20份，抗原检测为阴性的样本数为20份，其中呼吸道合胞病毒感染患者在经过抗病毒治疗有效后，检测结果为阴性的患者无病毒感染症状。

1.2  实验方法

1.2.1  符合率验证

向咽拭子标本中添加500 μL生理盐水进行涡旋洗脱，相关试剂为上海之江生物科技有限公司生产的全自动核酸提取仪及其配套试剂盒，按照操作说明书进行操作。使用RSV分型核酸检测试剂盒以及荧光定量聚合酶链反应仪测量核酸，其中的基本操作程序均按照说明书进行。

从患者的咽拭子中提取核酸，检测核酸AB分型以及阴阳分型的情况，记录检测结果;扩增产物送至生物医药科技有关公司做高通量测量。测量结果与美国国立生物技术信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）标准序列进行对比，根据对比结果判断是否满足呼吸道合胞病毒分型标准。在得到测量试剂盒的测试结果与测序结果后，判断精准度，记录测量结果的符合率。在本次研究中，以测序结果为正确结果，当结果显示分型以及测试结果分型符合率大于等于90%时就可以认为合格[1]。

1.2.2  验证精密度

选择一份呼吸道合胞病毒A型与B型的阳性标准进行混合，在稀释到CT值呈弱阳性之后，配置一份呼吸道合胞病毒A型与B型核酸检测结果为阴性的样本，每次测量4次，连续测量5天后共获得20次结果，若结果为阳性则记录CT值，检测结果阴性与阳性的符合率超过90%，且阳性标本中批内与批间CT值的CV值≤5%的情况下判定为合格。

2    实验结果研究

2.1  符合率检验

在本次研究中，发现20份阳性样本的标本分型结果与测序结果的分型是相同的，其中包括A型分型结果13例，B型分型结果7例，与测试结果相比，符合率达到100%，明显超过了90%的准确度标准，证明本次验证结果顺利通过。

2.2  精密度验证结果

在本次实验中，精密度的实验结果如表1所示。

从表1的相关数据可以发现，从第1天到第5天的验证结果均小于5%，因此认为验证结果是通过的。

3    研究结果分析

呼吸道合胞病毒是引起儿童急性呼吸系统疾病的主要病原体，每年有超过3 000万5岁以下的儿童感染呼吸道合胞病毒，近几年该病症的发病率呈逐年升高的趋势，已经严重影响了儿童的身体健康。又因为呼吸道合胞病毒感染的早期临床症状不明显，所以易出现漏诊和误诊等情况，实验室检查是诊断呼吸道合胞病毒的主要方法。

病毒是儿童社区获得性肺炎（Community Acquired Pneumonia，CAP）的主要病原体，也是儿童社区获得性肺炎病原学区别于成人的主要特征，而呼吸道合胞病毒则是引起儿童CAP的首位病毒，发病率较高。在该病症的早期诊断中，通过呼吸道标本病毒抗原快速检测是临床诊断呼吸道合胞病毒的常见方法，文章选择医疗机构提供的呼吸道合胞病毒抗原测试咽拭子，并将其作为早期诊断的重要依据。呼吸道标本的病毒抗原快速检测，已经成为医疗机构早期诊断病毒感染的主要方法，而病毒检测作为临床诊断的金标准，受资金、设备以及技术等因素影响而无法大面积推广，从现有技术发展来看，成熟的呼吸道合胞病毒检查方法包括免疫荧光法、酶免疫法等，能够有效检测患儿呼吸道分泌物中的病毒特异性抗原，具有设备要求低、简单快速的优点[2]。但是实际上标本的来源、质量以及采集等都是影响检测结果的重要因素，在检验过程中就可能出现结果不准确的情况。而分子生物学方法已经成为检测呼吸道分泌物病毒特异性基因片段的有效方法。文章利用上海之江生物科技有限公司生产的全自动核酸提取仪及其配套试剂盒，详细研究了呼吸道合胞病毒核酸分型检测方法的应用效果，结果发现，该核酸检测方法具有准确率高（准确率达到100%）等优点，并且精密度验证结果显示，不同分型结果5天内CV均小于5%，说明精密度高，满足呼吸道合胞病毒临床诊断需求。结合文章的研究结果可以发现，该方法具有特异度高、灵敏度高的优点，在临床上具有满意的应用效果，是一种科学有效的诊断方法。

4    结语

在呼吸道合胞病毒核酸分型检测性能中，利用上海之江生物科技有限公司生产的全自动核酸提取仪及其配套试剂盒，通过检测某医院提供的研究样本，研究了呼吸道合胞病毒核酸分型检测方法的准确度和精密度，证明该方法满足临床分子生物学的检验要求，可以为临床诊断、治疗及预后判断提供必要的依据，提高了疾病的检出率，为保证患儿的预后奠定了基础，因此值得进一步推广。

[参考文献]

[1]姜梨梨，王瑞芳，周海群，等.亳州地区2846例儿童急性呼吸道感染病原IgM抗体检测结果分析[J].重庆医学，2017（25）：3569-3570.

[2]于娟，李紅，饶华祥，等.流感高发季节150例流感病毒核酸阴性的流感样病例鼻咽分泌物呼吸道病毒检测分析[J].山东医药，2018（31）：40-43.