黄芩苷对糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠瘦素、炎症因子水平及游离脂肪酸代谢的影响

范景辉 姚慧欣 尹松鹤 赵玉梅

[摘要] 目的 探讨黄芩苷对糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠瘦素、炎症因子水平及游离脂肪酸代谢的影响。 方法 选择健康雄性Wistar大鼠30只作为研究对象。造模成功后，采取随机数字表法分为模型组和黄芩苷组两组，每组15只。模型组不加以治疗干预，黄芩苷组采取黄芩苷进行治疗。饲养12周后处死，检查和比较两组大鼠leptin、FFA、炎症因子水平以及与FFA代谢相关血液指标。 结果 黄芩苷组大鼠leptin和FFA检测结果分别为（1.51±0.34）g/mL和（111.72±9.28）μmol/g，均低于模型组的（2.19±0.30）g/mL和（198.34±20.18）μmol/g。在炎症因子水平检测结果方面，黄芩苷组IL-6、IL-18和TNF-α检测结果分别为（0.25±0.08）ng/mL、（0.35±0.10）ng/mL和（2.58±0.74）ng/mL，均低于模型组的（0.50±0.12） ng/mL、（0.57±0.13）ng/mL和（5.20±1.13）ng/mL。在与FFA代谢相关血液指标检测结果方面，黄芩苷组MALONYL-CoA、ACCa-se和FAS檢测结果分别为（2.34±0.79）mmol/L、（10.17±1.76）mmol/L和（9.79±1.00）mmol/L，均低于模型组的（3.62±0.77）mmol/L、（17.27±2.32）mmol/L和（17.15±1.51）mmol/L。差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 黄芩苷有效提高了糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠的治疗效果。

[关键词] 黄芩苷;糖尿病;非酒精脂肪肝;大鼠;瘦素;炎症因子水平;游离脂肪酸

[中图分类号] R285.5          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2020）16-0032-03

Effects of baicalin on the level of leptin，inflammatory factors and free fatty acid metabolism in the rats with diabetes mellitus complicated with nonalcoholic fatty liver disease

FAN Jinghui1   YAO Huixin2   YIN Songhe3   ZHAO Yumei1

1.Department of Pharmacy， Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical University，Mudanjiang   157000， China;2.Department of Continuing Education， Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical College， Mudanjiang   157000， China; 3.Food and Drug Inspection Center of Mudanjiang City in Heilongjiang Province， Mudanjiang   157000， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of baicalin on the level of leptin， inflammatory factors and free fatty acid（FFA） metabolism in the rats with diabetes mellitus（DM） complicated with nonalcoholic fatty liver disease （NAFLD）. Methods 30 healthy male Wistar rats were selected as the subjects of research. After successful modeling，the rats were divided into the model group and the baicalin group through the random number table method with 15 rats in each group. The model group was received no treatment intervention， while the baicalin group was received baicalin for treatment. After 12 weeks of feeding， the rats in both the two groups were killed， and the level of leptin， FFA， and inflammatory factors as well as blood indexes related to FFA metabolism were examined and compared between the two groups. Results The leptin and FFA detection results in the baicalin group were （1.51±0.34）g/mL and （111.72±9.28） μmol/g respectively， which were lower than the （2.19±0.30）g/mL and （198.34±20.18） μmol/g in the model group. In terms of detection results of the level of inflammatory factors， the detection results of IL-6， IL-18 and TNF-α in the baicalin group were （0.25±0.08）ng/mL， （0.35±0.10）ng/mL and （2.58±0.74） ng/mL respectively， which were lower than the （0.50±0.12） ng/mL，（0.57±0.13） ng/mL and （5.20±1.13） ng/mL in the model group. In terms of detection results of blood indexes related to FFA metabolism， the detection results of MALONYL-CoA，ACCa-se and FAS in the baicalin group were （2.34±0.79）mmol/L，（10.17±1.76）mmol/L and （9.79±1.00） mmol/L respectively， which were respectively lower than the （3.62±0.77） mmol/L，（17.27±2.32） mmol/L and （17.15±1.51） mmol/L in the model group. The differences were statistically significant（P<0.05） in all the above comparisons. Conclusion Baicalin has effectively improved the therapeutic effect on the rats with DM complicated with NAFLD.

[Key words] Baicalin; Diabetes mellitus; Nonalcoholic fatty liver disease; Rat; Leptin; Level of inflammatory factors; Free fatty acid

据流行病学统计，在普通人群中，非酒精性脂肪肝的发病率约为5%，而在糖尿病患者中，非酒精性脂肪肝的发病率高达21%～78%，由此可见，在糖尿病患者群体中，非酒精性脂肪肝的发病率较高。由于受到血糖异常情况的影响，严重降低了糖尿病患者的生活质量，当合并非酒精性脂肪肝后，会进一步损伤患者的肝功能，从而增加患者整体的治疗和康复难度[1，2]。而目前受到医学发展的制约，对此类患者的相关医学研究较少，治疗方法较为有限。在此背景下，我院以糖尿病合并非酒精脂肪肝大鼠为研究对象，造模成功后采取黃芩苷对大鼠进行治疗干预。黄芩苷是中药黄芩提取出的一种活性成分，具有良好的抑菌、利尿、抗炎和降胆固醇的作用。近年来，随着医学技术的发展，白庆云[3]证实，黄芩苷还具有良好的保护肝脏效果。以此为出发点，探讨黄芩苷对糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠瘦素、炎症因子水平及游离脂肪酸代谢的影响，为临床治疗工作的开展提供借鉴和参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选择健康雄性Wistar大鼠30只作为研究对象[北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK（京）2015-0001]，6周龄，体重140～160 g，平均（152.23±5.23）g，SPF级。Wistar大鼠均购自北京维通丽华实验动物有限公司。经我院实验动物伦理委员会批准实施。大鼠由牡丹江医学院动物实验中心饲养，室温（22±1）℃，相对湿度50%～70%，按正常昼夜节律调整照明时间。

1.2 方法

1.2.1 试剂和设备  黄芩苷和链脲佐菌素分别购自南京青泽医药科技开发有限公司和美国 Sigma公司，戊巴比妥钠购自成都都格雷西亚化学技术有限公司。瘦素（leptin）和游离脂肪酸（FFA）采用酶联免疫吸附实验法，试剂盒购自北京奇松生物科技有限公司。在炎症因子水平检测方面，白介素-6（IL-6）、白介素-18（IL-18）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）均采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验法，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。在与FFA代谢相关血液指标检测方面[4]，脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACCa-se）和丙二酰辅酶A（MALONYL-CoA）同样采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验法，试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司。以上均采用日本Olympus Au2700全自动生化分析仪检测。

1.2.2 模型诱导  将30只Wistar大鼠均顺应性3 d后，给予高脂饲料喂养。高脂饲料总热量为18.7 Kj/g，其中碳水化合物占30.04%、脂肪占55.37%、蛋白质占14.59%。连续饲养5周后，按每克大鼠体重35 μg的比例，腹腔注射链脲佐菌素。3 d后，检测大鼠空腹血糖数值，若检测结果>11.1 mmol/L，表示造模成功[5-7]。然后采取随机数字表法，将大鼠分为模型组和黄芩苷组。测量大鼠体重，模型组按10 mL/（k·d）比例给予生理盐水灌胃。黄芩苷组给予黄芩苷干预。参照唐彬等[8]对脂肪肝模型大鼠的用药剂量，即按30 mg/（kg·d），将黄芩苷融入与模型组等量的生理盐水中，为大鼠进行灌胃治疗。

1.2.3 标本采集  两组大鼠连续饲养12周后，按每4克大鼠体重3 mL的比例，注射浓度为2%的戊巴比妥钠对大鼠进行麻醉。打开腹腔，从大鼠下腔静脉取血。低温条件下离心处理15 min后，进行相关指标的检测。

1.3 观察指标

观察指标包括leptin和FFA检测结果;炎症因子水平检测结果，包括IL-6、IL-18和TNF-α等;与FFA代谢相关血液指标检测结果，包括MALONYL-CoA、ACCa-se和FAS等。

1.4 统计学方法

采用SPSS20.0统计学软件处理结果。计量资料以（x±s）表示，多组间比较行单因素方差分析，两两比较行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组leptin和FFA检测结果比较

见表1。黄芩苷组大鼠leptin和FFA检测结果低于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05）。

2.2 两组炎症因子水平检测比较

见表2。黄芩苷组大鼠IL-6、IL-18和TNF-α检测结果低于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05）。

2.3 两组与FFA代谢相关血液指标检测比较

见表3。黄芩苷组大鼠MALONYL-CoA、ACCa-se和FAS检测结果低于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

在糖尿病合并非酒精性脂肪肝的临床治疗研究上，多以西医治疗为主，如利拉鲁肽和吡格列酮等[9]，虽然可改善糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者的相关检测指标，但由于糖尿病非酒精脂肪肝的治疗是一个长期的治疗过程，往往会逐渐增加肝、肾等脏器的工作负担，且有一定的毒副作用，因此，尚无有效的治疗措施和方法[10-12]。近年来，随着我国传统医学的发展，中医应用日益广泛。以黄芩苷为例，黄芩苷是从双子叶唇形科植物黄芩的干燥根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，黄色结晶，加醋酸铅试液发生橘黄色沉淀[13]。其本身就有较强的抑菌、利尿、抗炎和降胆固醇等作用。随着其相关研究的逐步深入，尤其在以大鼠为研究实验对象，经大量的实验研究证实，黄芩苷更多的药用价值被不断的挖掘和发现[14]。

唐彬等[8]应用黄芩苷对高脂-脂肪肝模型大鼠进行干预。治疗干预后，本组大鼠的TNF-α和IL-6等炎症因子水平均明显改善。刘长山等[13]选择2型糖尿病大鼠为对象，造模成功后采取黄芩苷进行治疗。有效降低了大鼠瘦素等指标的检测结果。李红山等[15]通过实验研究证实，黄芩苷对脂肪肝大鼠游离脂肪酸的代谢具有良好的抑制作用，如FFA、AMPK和ACCa-se等指标控制情况较为理想。

黃芩苷作用于大鼠后，对其瘦素、炎症因子和游离脂肪酸等指标均具有良好的改善作用。在检验医学技术高速发展的背景下，越来越多的临床资料证实，瘦素、炎症因子和游离脂肪酸等指标，与非酒精性脂肪肝的发生和发展具有明显的对应关系。如在瘦素方面，正常情况下，瘦素可使甘油三酯存储在脂肪细胞中，具有调整非脂细胞的甘油三酯含量的作用。但当瘦素作用出现障碍时，会影响以上过程，导致甘油三酯在肝脏中不断聚集，从而导致非酒精性脂肪肝的发生;在炎症因子方面，如以IL-6为例，体内生成IL-6增多后，会抑制磷脂酰肌醇、葡萄糖转运蛋白4和胰岛素受体底物的表达，使胰岛素受体后信号转导异常，发生胰岛素抵抗。胰岛素抵抗后，带来的直接结果如甘油三酯聚集和游离脂肪酸增多等，以上均是非酒精性脂肪肝的危险因素;在游离脂肪酸方面，血液中的游离脂肪酸是含C10以下的脂肪酸。游离脂肪酸升高后，超出肝脏细胞的摄取范围，会促使其合成甘油三酯，从而发病。根据刘长山等[13]的研究结果，黄芩苷具有调节大鼠瘦素、炎症因子和游离脂肪酸的作用。因此结合以上实验成果和治疗经验，我院将黄芩苷应用于糖尿病合并非酒精脂肪肝大鼠的实验研究中。试验后发现，与未进行药物干预的模型组大鼠比较，黄芩苷组大鼠瘦素、炎症因子和游离脂肪酸等检验结果均优于后者，与刘长山等[13]的研究结果基本一致，证实了黄芩苷对糖尿病合并非酒精脂肪肝的大鼠具有较为理想的治疗效果。

综上所述，黄芩苷可以有效降低糖尿病合并非酒精脂肪肝的大鼠瘦素、炎症因子和游离脂肪酸的水平。希望进一步加强深入的研究和推广，为黄芩苷的临床应用打下良好基础。

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（收稿日期：2020-02-05）