补血催乳口服液提取工艺优选

姜芳宁 刘光斌

酒钢医院，甘肃 嘉峪关735100

补血催乳口服液主治气血两亏，产后无乳或少乳症。由黄芪、当归、丹参、漏芦、路路通等组成，其中黄芪、丹参配伍可以补气补血，加上路路通、漏芦通经下乳，全方具有气血双补、温经通乳的作用。由于黄芪、丹参占全方57.69%，所以分别选取黄芪甲苷、丹参酮ⅡA含量为本口服液提取工艺的评价指标，以制备的料液比、煎煮时间及次数为影响因素，用L9（34）正交试验优选各因素，筛选出最佳的制备工艺。

1 仪器与试药

Agilent 1260 Series型高效液相色谱仪为美国的安捷伦公司生产，电子分析天平AUW220D为日本的岛津公司生产，超声清洗仪（KMH1-1100U型）。

黄芪甲苷（110781-201717）、丹参酮ⅡA（110766-201520）来自中国食品药品检定研究院。甲醇、乙腈用液相色谱试剂，其余试剂用分析纯，水用超纯水。

2 方法与结果

2.1 丹参酮ⅡA含量测定［1-2］

2.1.1 色谱条件。Agilent Extend C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；检测波长为270nm；流动相：甲醇-水（75∶25），柱温35℃；流速为1.0mL/min；进样10μL。丹参酮ⅡA的理论塔板数5000以上。

2.1.2 溶液的制备。制备丹参酮ⅡA对照液：精密称定供含量测定用2.27mg丹参酮ⅡA，以甲醇溶解配制成9.08μg/mL丹参酮ⅡA对照液。

供试品液的制备：精吸正交试验得到的补血催乳口服液2mL置于25mL量瓶中，添甲醇至定容，超声15min，放冷再添甲醇至25mL，摇匀滤过可得。

2.1.3 测定方法。取对照品液与供试品液各10μL，测得各自峰面积用外标两点法计算而得含量。见图1。

2.2 黄芪甲苷含量测定［3］

2.2.1 色谱条件。Agilent Extend C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；柱温30℃；流动相：乙腈-水（36∶64）；流速1.0mL/min；ELSD检测器为Alltech Model 3300；氮气流速1.7L/min；漂移管温度90℃，进样10μL。黄芪甲苷的理论塔板数3000以上。

2.2.2 溶液的制备。制备对照品液：精密称定供含量测定用5.357mg黄芪甲苷，用甲醇溶解制成黄芪甲苷储备液0.5357mg/mL。抽取1mL添甲醇至5mL，则得含0.1071mg/mL黄芪甲苷对照液。

图1 丹参酮ⅡA含量测定HPLC色谱图

供试品液的制备［4-5］：精吸补血催乳口服液（正交试验制得）10mL，以每次20mL正丁醇（水饱和）提4次，将正丁醇提取液合并，以20mL氨试液洗2次，回收正丁醇液并蒸干，用5mL水溶解残渣，用内径1.5cm、柱高12cm大孔吸附树脂柱（D101型），以50mL纯水洗脱弃掉水液，加30mL乙醇（40%）洗脱并弃掉洗脱液，加80mL乙醇（70%）洗脱，留取洗脱液蒸干，以甲醇溶解到5mL量瓶并定容可得。

2.2.3 测定方法。取对照品液、供试品液各10μL，测得各自峰面积用外标两点法计算而得含量。见图2。

图2 黄芪甲苷含量测定HPLC色谱图

表1 因素水平表

2.3 提取工艺试验

2.3.1 正交试验与分析。结合实际生产和预试验结果，以L9（34）正交试验对影响补血催乳口服液提取效果的料液比（A）、提取时间（B）、提取次数（C）进行优选，以黄芪甲苷与丹参酮ⅡA含量为指标评价。按照补血催乳方药材的组成比，赋予黄芪甲苷、丹参酮ⅡA含量的权重系数分别为0.6、0.4，计算公式为：综合评分=黄芪甲苷含量指标／最大指标×0.60×100+丹参酮ⅡA含量指标／最大指标×0.40×100。由方差分析结果及直观分析综合得知，补血催乳口服液提取工艺对丹参酮ⅡA含量的影响主次顺序为A＞C＞B，各因素对其影响无统计学的差异（P＞0.05）；对黄芪甲苷影响顺序是C＞A＞B，料液比及提取次数的影响有统计学的差异（P＞0.05）。经综合评价，各因素对综合得分影响排序C＞B＞A，提取时间和提取次数的影响有统计学的差异（均为P<0.05），料液比对其影响无统计学的差异（P＞0.05），综合节约资源，确定最佳条件是A1B3C2，即料液比1∶8，提取2次，每次2h。因素水平表（表1），正交试验结果（表2），方差分析（表3）。

表2 水提工艺优选正交试验结果表

表3 方差分析表

表4 水提取工艺验证结果表（mg/mL）

2.3.2 工艺验证试验。按处方比例称各饮片，以上述最佳工艺提取，做验证试验，试验结果见表4。筛选得到的工艺条件A1B3C2即料液比1∶8，提取2次，每次2h，确定为补血催乳口服液最佳水提工艺。

3 讨论

根据相关文献查询，结合该方各药的理化性质，且为了尽量保留传统汤剂有效成分，补血催乳口服液采用水提法提取。以黄芪甲苷、丹参酮ⅡA提取量为考察指标，二者含量用HPLC法测定，以L9（34）正交试验对影响补血催乳口服液提取效果的料液比（A）、提取时间（B）、提取次数（C）进行正交试验，优选而得的工艺为：料液比1∶8，提取2次，每次2h。经验证优选的提取工艺稳定、合理、可行。