不同产地当归身与当归尾阿魏酸含量比较研究

巢蕾 曹雨诞 严辉 陈佩东

[摘要] 目的 比较不同产地的当归身与当归尾中阿魏酸的含量。 方法 應用高效液相色谱法测定阿魏酸含量。以Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，应用乙腈和0.085%磷酸（17∶83）洗脱，检测波长为316 nm，流速设定为1.0 mL/min，柱温为35℃，进样量为20 μL。 结果 阿魏酸在19.52～31.20 μg/mL（r = 0.9999）范围内呈良好的线性关系，阿魏酸的平均回收率为99.70%，RSD为2.40%。 结论 建立的含量测定方法简便，重现性好，云南鹤庆县样品比其他产地样品含量高，当归尾中阿魏酸含量高于当归身。

[关键词] 当归身;当归尾;含量;阿魏酸

[中图分类号] R284.1          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）09（c）-0120-03

A comparative study of ferulic acid content in taproot and rootlet of Radix Angelicae Sinensis from different regions

CHAO Lei1   CAO Yudan2   YAN Hui2   CHEN Peidong2

1.Department of Pharmacy， Jiangsu Province Hospital of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing   210029， China; 2.College of Pharmacy， Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing   210046， China

[Abstract] Objective To compare the content of ferulic acid in taproot and rootlet of Radix Angelicae Sinensis from different regions. Methods The content of ferulic acid was measured by high performance liquid chromatography. Kromasil C18 column （250 mm×4.6 mm， 5 μm） was used in this study. The mobile phase was acetonitrile and 0.085% phosphoric acid （17∶83）， the detection wavelength was set at 316 nm， the flow rate was set at 1.0 mL/min， the column temperature was 35℃， and the sample size was 20 μL. Results The ferulic acid showed a good linear relationship in the range of 19.52-31.20 μg/mL （r = 0.9999）， and the average recovery was 99.70%， RSD was 2.40%. Conclusion The method is simple and reproducible. The content of ferulic acid sample from Heqing County of Yunnan Province is higher than those in other regions， and the content in the rootlet of Radix Angelicae Sinensis is higher than that in taproot of the plant.

[Key words] Taproot of Radix Angelicae Sinensis; Rrootlet of Radix Angelicae Sinensis; Content; Ferulic acid

当归为伞形科植物Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根，始载于《神农本草经》。当归药性甘、辛、温，具有补血调经、活血止痛的功效，主治月经不调等血虚诸症[1-3]。当归是重要的药物，中医有“归字头，草字尾”之说，称当归为药王，归肝、心、脾及胃经[4]。现代研究表明，当归及其药对或复方具有缓解免疫抑制剂所致的骨髓抑制[5]、抗缺氧、保护缺血脑细胞、促进缺血区神经功能恢复、降低缺血性脑损伤[6]的作用，对血虚及原发性痛经模型小鼠体征及相关指标均有较显著的改善作用[7]。通过抑制核因子p65、磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α和丝裂原活化蛋白激酶等环节起到平喘等作用[8]。当归的主要化学成分为有机酸、香豆素、挥发油及多糖类[9-11]。历代医家将当归分为当归头、当归身、当归尾、全当归等不同部位入药[12]。有研究表明，在当归的不同部位中，阿魏酸含量存在差异[13]。为进一步研究当归不同药用部位中化学成分的差异，笔者对不同产地的当归身及当归尾中阿魏酸的含量进行了测定，以期为中医临床应用提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

美国Waters公司2695高效液相色谱仪;上海精密科学仪器有限公司FA1104N型电子分析天平（万分之一）;Kromasil C18色谱柱，规格：250 mm×4.6 mm，5 μm。

1.2 试药

当归采购自甘肃岷县十里乡十三里铺（161001）、西寨镇雪地河村（170724）、甘肃定西渭源县祁家庙镇（151126）和云南省鹤庆县东甸村（181102）。经南京中医药大学严辉副教授鉴定，测试用饮片为伞形科植物当归Angelica sinensis（Oliv.）Diels。阿魏酸对照品购自成都曼斯特生物科技有限公司（批号：MUST-15082904、MUST-15091605）。流动相乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

当归干燥后，抢水洗净，润软，切薄片或段，低温干燥。分拣当归的主干为当归身，枝干为当归尾。当归身与当归尾分别进行粉碎，过3号筛。

2 方法与结果

2.1 供试品及对照品溶液制备方法

精密称取阿魏酸对照品适量，置于棕色量瓶中，用70%甲醇溶液制成12 μg/mL的溶液，即得对照品溶液。取本品粉末约0.2 g，过3号筛，精密称定后置于具塞锥形瓶中，精密加入70%的甲醇20 mL，密塞后称定重量。回流加热30 min，放冷后再称定重量，以70%甲醇补足减失的重量，静置后取上清液，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2 当归身与当归尾中阿魏酸的含量测定

2.2.1 色谱条件  采用Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为等度乙腈和0.085%磷酸（17∶83），检测波长为316 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为35℃，进样量为20 μL。

2.2.2 系统适用性试验  分别吸取供试品及对照品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件进行测定。实验结果显示，供试品溶液色谱峰中，与对照品溶液色谱峰相同位置出峰，理论板数以阿魏酸峰计算不低于3000，且分离度较好，表明没有其他组分的干扰。见图1。

2.2.3 线性关系考察  精密称取阿魏酸1.56 mg置于10 mL量瓶中，加入70%甲醇溶液定容，制备成浓度为0.156 mg/mL的母液。分别从母液中精密吸取一定量的阿魏酸溶液稀释成系列浓度。按“2.2.1”项下色谱條件进样分析，每次10 μL，以峰面积为横坐标X，以阿魏酸溶液的浓度为纵坐标Y绘制标准曲线，得到回归方程：Y = 46 795 805.07X-10 354.08，r = 0.9999。结果显示阿魏酸在0.001 95～0.031 20 mg/mL的浓度范围内与峰面积呈现良好的线性关系，阿魏酸检测限为0.074 μg/mL，定量限为0.223 μg/mL。

2.2.4 精密度试验  取同一供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件，连续测定6次，分别计算阿魏酸色谱峰面积，结果RSD为0.98%，提示色谱仪精密度良好。

2.2.5 重复性试验  取同一批样品，按“2.1”项下供试品溶液制备方法，制备供试品溶液。进样，测定6次并计算阿魏酸的峰面积。阿魏酸的含量均值为0.075%，RSD为2.61%，提示此方法重复性好。

2.2.6 稳定性试验  在室温条件下，按“2.2.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、12、24 h时测定样品进样。计算阿魏酸峰面积，结果显示RSD为0.57%，提示阿魏酸在24 h内具有良好的稳定性。

2.2.7 加样回收率试验  精密称取6份已知含量的同一批次当归样品0.1 g，按“2.1”项下供试品溶液制备方法，分别加入对照品溶液，平行制成6份供试品溶液。按“2.2.1”项下色谱条件测定回收率，测定结果见表1。

2.2.8 样品含量测定  精密称取各样品，按上述供试品溶液制备方法制备，然后按“2.2.1”项下色谱条件，对当归身与当归尾饮片中阿魏酸含量进行测定，每批平行测定2次，测定结果见表2。

3 讨论

目前，在当归在临床应用中，有当归、酒当归、土当归及当归炭等饮片，用于治疗各种疾病[14-15]。研究表明，当归身偏于补血，而当归尾偏于活血。在有些省份的中药饮片炮制规范中，当归身与当归尾作为不同的饮片应用于临床[16-17]。现代研究表明，在当归饮片中，当归身与当归尾所含的化学成分有较大差异，从而导致当归饮片不同部位药效的差异[18-19]。研究表明，与当归身相比，当归尾中挥发油类成分含量较高[20]。当归通常生长于海拔1800～2500 m的高寒阴湿环境，主产地为甘肃、宁夏、云南、四川等地，尤以甘肃所产当归药材性状为佳[21]。由于市场对当归的需求增多，除甘肃省以外，湖北、青海以及云南省的当归药材种植面积也在不断扩大。通过对全国各产区样品的指纹图谱及聚类分析发现，岷县当归药材稳定性较好，具有较高的一致性[22]。对采集于多地当归药材进行含量分析的结果表明，云南省所产当归药材中阿魏酸含量较高[23]。当归饮片中所含有的化学成分除阿魏酸外，还有洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、藁本内酯等[24]。对当归身、当归尾饮片的质量评价，还需对更多化学成分及药理活性作进一步研究。通过对当归中9种化学成分的分析表明，岷县麻子川乡的当归药材质量优于其他产地的药材[25]。本研究结果显示，各产地的当归尾和当归身饮片中，当归尾的阿魏酸含量较高;各产地饮片中，云南省鹤庆县的当归饮片阿魏酸含量最高，而甘肃省岷县所采集当归样品中阿魏酸含量也存在差异。本研究结果为临床当归身及当归尾饮片的合理应用，以及不同产地的当归饮片质量控制，提供了科学依据。

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（收稿日期：2020-03-26）