外泌体含量与脑胶质瘤级别、预后的相关性研究*

徐文华 梁锐 万希晨 方富 刘卫兵 唐尤佳

脑胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，其侵袭性高、复发率、死亡率高，预后差是其疾病特点。早发现、早诊断在治疗过程中的重要性尤为凸显，外泌体是一种由细胞分泌，大小为40～100 nm 的小囊泡，其内含有生物活性物质，其在脑许多肿瘤的发生发展过程中扮演着重要的角色[1-2]。目前国内外关于外泌体对脑胶质瘤影响的文献报道仍较少，外泌体在脑胶质瘤疾病的发生演变过程中扮演着怎样的角色，其含量变化同脑胶质瘤的演变过程有怎样的影响，都有待进一步研究。本研究通过分析外泌体与胶质瘤级别、预后的相关性，旨在为临床上脑胶质瘤患者的恶性程度及预后评估提供有意义的指导，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017 年10 月-2019 年4 月本院60 例有明确病理诊断的脑胶质瘤患者的临床资料进行回顾性分析。纳入标准：符合中国中枢神经系统胶质瘤诊断与治疗指南（2015）脑胶质瘤诊断标准[3]；有明确病理诊断确诊；具有住院治疗、干预等完整记录。排除标准：合并其他恶性肿瘤；合并脑部血管疾病；合并精神疾病。根据术后病理诊断分级将其分为低级别胶质瘤组与高级别胶质瘤组，各30 例。本研究已经医院伦理委员会批准。

1.2 方法 采集两组脑胶质瘤组织标本，通过超速离心实现外泌体的提取分离。将纯化出的外泌体进行定量分析，比较两组外泌体含量。随访1 年，观察两组死亡率、致残率。以生活自理量表（ADL）为残疾判定标准，共14 项，每项1～4 分，评分≥22 分判定为残疾；采用Spearson 秩相关分析外泌体含量与脑胶质瘤级别、预后的相关性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 20.0 软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（）表示，比较采用t 检验；计数资料以率（%）表示，比较采用χ2检验。外泌体含量与脑胶质瘤级别、预后的相关性用Spearson 秩相关分析。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 两组性别、年龄及病程比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组外泌体含量比较 低级别胶质瘤组外泌体含量为（156.32±5.93）mg/L，低于高级别胶质瘤组的（182.14±4.69）mg/L，差异有统计学意义（t=18.705，P＜0.001）。

2.3 两组预后情况比较 低级别胶质瘤组死亡率与致残率均低于高级别胶质瘤组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组死亡率与致残率比较 例（%）

2.4 外泌体含量与胶质瘤级别、预后的相关性 外泌体含量与胶质瘤级别呈正相关性，而与预后呈负相关性（P＜0.05），见表3。

3 讨论

肿瘤细胞分泌的外泌体不仅可通过肿瘤细胞表面抗原诱导机体产生抗肿瘤免疫反应，还可通过诱导机体产生免疫耐受、免疫抑制、转移促瘤生长的蛋白及核酸等方面，促进肿瘤发生、发展；目前多集中在生物标记、药物载体研究，具标本易得、检测方便、伤害较小、变化较早等特点[4-5]。赵莉娟等[6]发布了黑色素瘤细胞可分泌携带有αυ 因子受体的外泌体，该外泌体可诱导活化巨噬细胞，通过检测iRGD 因子的表达，揭示了可利用外泌体特异性对恶性肿瘤细胞起到靶向治疗作用。近年大量研究表示，在脑胶质瘤发生发展中，外泌体起到一定程度的促进作用。徐峰等[7]在研究脑胶质瘤细胞时发现，从肿瘤细胞上清液中分离出的特异蛋白质及遗传物质，通过被邻近正常细胞摄取并表达促血管新生蛋白，达到促进肿瘤生长、侵袭及免疫逃逸的目的，说明在脑胶质瘤生长过程中，外泌体可增强肿瘤营养摄取能力、提升肿瘤浸润范围。肿瘤细胞外泌体通过其特异性内含物诱导肿瘤细胞的迁移，例如，乳腺癌细胞分泌的外泌体内含蛋白HSP90α，可活化细胞外蛋白酶；另外外泌体也含有HER 配体分子等生物学特性，进而刺激周围细胞转化为相近性质，有利于促进肿瘤细胞转移[8-9]。以上可说明，在脑胶质瘤发生发展中外泌体起到重要促进作用。

表3 外泌体含量与胶质瘤级别、预后的Spearson秩相关分析

脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤之一，其发生率占所有颅内肿瘤的35.2%～60.1%（平均44.69%），5 年生存率仅为20%～30%[10]。目前脑恶性肿瘤在临床上分类众多，包括少突胶质细胞瘤、少突星形胶质细胞瘤、星形胶质细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤等[11]。外泌体是一种有膜小囊泡，直径40～100 nm，其内含有脂质、蛋白质、mRNA、miRNA 等生物活性物质，通过与靶细胞受体结合或水平传递生物活性物质可发挥生物学功能[12]。可由多种细胞分泌，如T 细胞、B 细胞、树突细胞、肥大细胞、内皮细胞、成纤维细胞及肿瘤细胞等[13]。目前，外泌体在人类的脑脊液、外周血、尿液、羊水、唾液、腹水、关节液等均可被检测到[14-15]。由于外泌体的特殊结构和功能，其具有潜在的应用价值，一方面不仅可作为生物学标志物，在疾病诊断、治疗及预后预测中起着重要作用，另一方面也可以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗[16-17]。外泌体作为一种全新的细胞间信息传递物质，在机体免疫监测、炎症反应及肿瘤的发生发展等生理和病理过程中，外泌体都发挥着十分重要的功能[18]。以传统手术为主，辅以放化疗仍是目前脑胶质瘤的最重要的治疗模式，肿瘤早期诊断往往症状不明显，容易漏诊，但由于胶质瘤多为浸润型生长的特点，很容易复发，患者预后差，复发率、死亡率高，且疗效不理想[19]。外泌体在中枢神经系统疾病，特别是脑胶质瘤发生、发展、侵袭、转移及免疫逃逸中起着重要作用[20]。因考虑脑胶质瘤发生发展与外泌体促进作用相关，探索外泌体同脑胶质瘤的关系是有前景的诊断和治疗方向，本研究尝试将外泌体含量与脑胶质瘤级别、预后行相关性分析。

本研究结果显示，低级别胶质瘤组外泌体含量为（156.32±5.93）mg/L，低于高级别胶质瘤组的（182.14±4.69）mg/L（P＜0.05）。说明不同级别脑胶质瘤患者的确存在外泌体分泌含量差异，考虑原因为，肿瘤发生发展过程中，外泌体为保证肿瘤组织内养分吸收充足，需增加分泌量以加强肿瘤内部新生血管建设，进而提升外泌体含量；特别在对恶性肿瘤患者放疗化疗治疗期间，肿瘤细胞可利用外泌体介导药物排出，以降低肿瘤细胞内药物浓度，或肿瘤细胞通过分泌外泌体以中和胞外蛋白以抵抗肿瘤药物作用能力，或者受外泌体影响，钟敏细胞抗药敏感性增加，特别对于级别较高肿瘤而言，因其肿瘤细胞较多，外泌体分泌能力相对增加，可以证实，不同级别脑胶质瘤细胞的确存在外泌体分泌量不同情况[21]。低级别胶质瘤组死亡率6.67%与致死率3.33%均低于高级别胶质瘤组26.67%、20.00%（P＜0.05）。说明不同级别脑胶质瘤患者的确存在预后差异，考虑原因为，低级别脑胶质瘤患者肿瘤细胞浸润、侵袭、转移范围较小，治疗方法简单；高级别脑胶质瘤肿瘤细胞转移、侵袭明显，可加重患者神经功能损伤，严重影响其生理功能。高卫勤等[22]研究表示，不同级别脑胶质瘤患者围术期会出现显著免疫水平差异，即高级别脑胶质瘤患者术后细胞免疫指标较低级别差，且颅内感染发生率较低级别高。杨建凯等[23]研究报道小胶质细胞外泌体分泌量化增加可能为增加细胞炎症反应、增加患者感染风险、影响患者预后重要因素，可能为增加脑胶质瘤患者死亡风险重要因素。本研究结果显示外泌体含量与脑胶质瘤级别、预后的具有一定的相关性，外泌体含量越高脑胶质瘤级别越高，预后越差，考虑原因为肿瘤数量多，外泌体分泌量增加，血浆外泌体miRNAs 含量随之增加，肿瘤细胞转移、增殖能力增强。说明在脑胶质瘤患者预后判断中，可通过检测外泌体含量判断患者预后。马力等[24]研究报道外泌体中miR-150 级miR-29a 可作为放化疗治疗剂量相关循环生物标志物，其含量的高低对预测患者预后、评价临床疗效具积极意义，与本研究观点一致。

综上所述，不同级别脑胶质瘤患者的确存在外泌体分泌量差异，外泌体含量增加可判断患者预后不良。外泌体可用于脑胶质瘤级别、预后判断依据，对于胶质瘤患者的治疗具有一定的指导意义。