急性冠脉综合征病人血清miR-204、miR-9表达水平及临床意义

邢 磊，焦颖华

急性冠脉综合征是一种以冠状动脉粥样硬化斑块破裂继而引起完全性或非完全性血栓为特点的综合征，包括不稳定型心绞痛、急性ST段抬高型心肌梗死、急性非ST段抬高型心肌梗死，常见于老年人，危险因素包括年龄、血脂、血压、吸烟等，以胸痛为主要临床表现，其中冠状动脉造影为诊断的金标准，主要治疗方法包括经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention，PCI)、溶栓等[1]。相关研究表明，急性冠脉综合征病人死亡率高，发病年龄趋于年轻化，因此，早期诊断急性冠脉综合征具有重要的临床意义[2]。随着医疗技术的不断发展，分子诊断技术在临床中的应用越来越广泛。miR-204是miRNA家族中的一员，有研究显示，miR-204通过调控细胞凋亡等机制发挥保护心肌的作用[3]，避免心肌细胞损伤[4]。另有研究表明，miR-9与冠状动脉粥样硬化性疾病的发生密切相关[5]。但miR-204和miR-9与急性冠脉综合征的发生发展是否相关，尚缺乏充分证据。本研究通过测定miR-204与miR-9相对表达量，探讨miR-204和miR-9在急性冠脉综合征病人血清的表达及临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月—2018年12月因胸痛于我院心内科就诊的急性冠脉综合征病人63例作为观察组，年龄40～65岁。纳入标准：于心内科行冠状动脉造影明确诊断为急性冠脉综合征；向病人说明研究目的及相关风险后，签署知情同意书，本研究通过医院伦理委员会审查。排除标准：伴有肝肾功能障碍、恶性肿瘤、凝血功能障碍、感染性疾病、免疫系统疾病等；先天性心血管系统疾病、心源性休克、严重性心力衰竭等；血压≥180/110 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，未按时服用降压药。同时选取同期于我院体检的70名健康者作为对照组，年龄和性别与观察组匹配。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 抽取所有研究对象空腹静脉血10 mL，采集完毕后将标本送至实验室，三酰甘油L-20型高速离心机进行离心，以10 000 r/min，离心结束后取上清液于低温下保存，温度-80～-70 ℃。

1.2.2 miR-204、miR-9相对表达量测定 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)测定所有研究对象miR-204与miR-9相对表达量，具体操作：提取5 μL的RNA、1 μL反转录酶及2 μL引物，miR-204与miR-9的TaqMan引物及TaqMan反转录酶均由康为世纪公司生产，将混合好的反应体系置于美国ABI公司生产的9700 PCR 扩增仪进行扩增，反应条件：16 ℃15 min，42 ℃ 10 min，85 ℃ 3 min，再提取2.5 μL反应产物与引物混合，通过实验数据显示，记录miR-204和miR-9相对表达量[6]。

1.3 观察指标 记录并比较两组研究对象临床资料，包括年龄、性别、是否吸烟、有无高血压、收缩压、舒张压、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖；测定两组研究对象血清miR-204和miR-9相对表达量，并分析观察组血清miR-204和miR-9相关性及诊断急性冠脉综合征的临床价值。

1.4 统计学处理 采用SPSS 21.0统计软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验；计数资料采用χ2检验；采用Pearson方法分析相关性，采用受试者工作特征曲线(ROC)分析检验诊断价值。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组临床资料比较 观察组总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)；观察组高密度脂蛋白胆固醇低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。详见表1。

表1 两组临床资料比较

2.2 两组血清miR-204和miR-9相对表达量比较 观察组血清miR-204和miR-9相对表达量低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)。详见表2。

表2 两组血清miR-204和miR-9相对表达量比较(x±s)

2.3 急性冠脉综合征病人血清miR-204与miR-9的相关性分析 结果显示：急性冠脉综合征病人血清miR-204与miR-9呈正相关(r=0.483，P<0.05)。详见图1。

图1 急性冠脉综合征病人血清miR-204与miR-9相关性分析的散点图

2.4 miR-204和miR-9预测急性冠脉综合征的ROC曲线 miR-204的ROC曲线下面积(AUC)为0.749，取最佳临界值时特异度为65.7%，灵敏度为74.6%；miR-9的AUC为0.751，取最佳临界值时特异度为60.0%，灵敏度为82.5%，二者对急性冠脉综合征具有一定的诊断价值。二者联合检测的AUC为0.818，取最佳临界值时特异度为69.6%，灵敏度为90.5%，联合预测急性冠脉综合征的临床价值、特异度及灵敏度均优于单一指标检测。详见图2、表3、表4。

图2 miR-204和miR-9预测急性冠脉综合征的ROC曲线图

表3 miR-204、miR-9和联合检测的临床价值

表4 miR-204、miR-9和联合检测的特异度和灵敏度

3 讨 论

急性冠脉综合征是一种心内科常见疾病，起病急，常威胁病人生命，临床主要的治疗方法为手术，通过改善心肌缺血状态从而缓解病情[7-8]。因此，急性冠脉综合征的早期诊治尤为重要。miRNA是真核生物体内不编码的短序列RNA，性质稳定，对温度、pH等环境改变不敏感[9-10]。miRNA家族种类丰富，对疾病发生发展具有重要作用，同时对疾病诊断具有临床意义[11]。有研究表明，miRNA参与心肌细胞凋亡与重构的过程，而miR-204和miR-9是miRNA中两种重要的成员[12]。相关研究表明，miR-204通过调控心肌细胞自噬功能，参与心肌细胞缺氧后保护机制，避免心肌细胞受到损伤，而miR-9与心血管系统功能密切相关[13-14]。有研究表明，miR-9可抑制脂肪酰辅酶A表达，从而参与调节胆固醇，而胆固醇是冠状动脉粥样硬化的重要危险因素；miR-9通过激活磷酸腺苷蛋白激酶途径促进血管生成[15-16]。因此，本研究通过测定血清miR-204和miR-9相对表达量探讨miR-204和miR-9在急性冠脉综合征病人诊断中的临床意义。

本研究结果显示，观察组总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)；观察组高密度脂蛋白胆固醇低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。两组年龄、性别、是否吸烟、有无高血压、收缩压、舒张压、空腹血糖比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组血清miR-204和miR-9相对表达量低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。miR-204和miR-9相对表达量降低，减弱了心肌保护能力，血管生成能力降低，心肌易受到损伤，从而引起急性冠脉综合征[17-18]。急性冠脉综合征病人血清miR-204与miR-9呈正相关(r=0.483，P<0.05)；急性冠脉综合征病人miR-204和miR-9相对表达量均降低，且二者呈正相关，表明二者同时作用于急性冠脉综合征的发生[19]。miR-204的AUC为0.749，取最佳临界值时特异度为65.7%，灵敏度为74.6%；miR-9的AUC为0.751，取最佳临界值时特异度为60.0%，灵敏度为82.5%，二者预测急性冠脉综合征具有一定的诊断价值；二者联合检测的AUC为0.818，取最佳临界值时特异度为69.6%，灵敏度为90.5%，联合预测急性冠脉综合征的临床价值、特异度及灵敏度均优于单一项目检测。临床早期测定血清miR-204和miR-9相对表达量，可预测急性冠脉综合征发生，进行早期治疗，降低病死率[20]。

综上所述，通过测定病人血清miR-204和miR-9的相对表达量，从而早期诊断急性冠脉综合征，对急性冠脉综合征的诊治具有重要意义，后期研究进一步探讨其在急性冠脉综合征的诊断价值，具有较好的应用前景。