血清miR-145-5p对脑胶质瘤病人化疗敏感性的影响及其与预后的相关性

贾海波，严肖啸，袁明智，武俊丽，杨 婕

脑胶质瘤是临床常见的原发性颅内恶性肿瘤，恶性程度高、治疗难度大[1]。目前，外科手术多无法完全切除脑胶质瘤，术后常需辅助放疗、化疗清除残余癌细胞[2]。替莫唑胺是临床治疗脑胶质瘤的一线化疗药物，但由于个体差异、耐药性逐渐形成，病人化疗敏感性及预后无法预判[3]。微小RNA(microRNA，miR)属于非编码RNA，通过调控非编码区癌基因或抑癌基因表达参与肿瘤病程进展。有研究发现，miR-145-5p在胰腺癌、乳腺癌等多种肿瘤组织及血清中低表达，具有抗肿瘤作用[4-5]。本研究分析血清miR-145-5p对脑胶质瘤病人化疗敏感性的影响及与病人预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年4月—2017年3月收治的90例脑胶质瘤病人，其中男52例，女38例；年龄45～77(65.28±7.20)岁；Karnofsky活动状态(KPS)评分60～89(74.93±7.55)分；世界卫生组织(World Health Organization，WHO)分级[6]：Ⅱ级29例，Ⅲ级35例，Ⅳ级26例；手术类型：全切除44例，次全切除42例，部分切除4例。所有病人均接受同一医疗团队治疗，本研究获得医院伦理委员会审批。

纳入标准：经病理学检查确诊为脑胶质瘤；KPS评分≥60分；接受外科手术治疗，且术后1个月内接受化疗。排除标准：合并其他部位恶性肿瘤；合并严重肝肾功能障碍；合并严重感染性疾病等。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-145-5p水平检测 采集化疗前空腹静脉血5 mL，Trizol试剂盒(美国Invitrogen公司，货号15596-018)提取总RNA，定量后反转录获得cDNA；产物鉴定后采用SYBR Green法进行RT-qPCR检测，miR-145-5p引物序列，正向引物：5′-ATGTCGTAGTGCTGTACGT-3′，反向引物R：5′-TGTCATGTAGCTGTGATGC-3′；U6引物序列，正向引物：5′-GTAGCTGTAGCTGTGACTC-3′，反向引物：5′-ATGCTGATGCTGAGCTGAC-3′，以U6为管家基因，2-△△CT为miR-145-5p基因的相对表达强度。

1.2.2 治疗方法及疗效评定 术后口服替莫唑胺(江苏天士力帝益药业有限公司生产，国药准字H20060880，规格：每片100 mg，生产批号20140105)150 mg/(m2·d)，连续5 d，以4周为1个治疗周期，病人能耐受情况治疗2～6个周期。疗效评定标准[2]：完全缓解：肿瘤病灶完全消失、体征完全消失，连续观察4周仍有较好的临床疗效；部分缓解：连续观察4周，肿瘤病灶体积缩小≥50%；稳定：连续观察4周，病情无明显变化，肿瘤病灶体积缩小>25%或增大<25%；进展：原肿瘤病灶体积增大≥25%或发现新的肿瘤病灶。所有病人评估时间一致，若出现进展及时更改化疗方案，临床受益(完全缓解、部分缓解或稳定)继续化疗疗程，将完全缓解和部分缓解病人纳入有效组，其余纳入无效组。

1.2.3 观察指标 收集病人性别、年龄、KPS评分、WHO分级、病灶部位、手术类型、临床病理资料及血清miR-145-5p水平，将其作为自变量，以化疗是否有效(是=0、否=1)作为因变量进行Logistic回归分析。

1.2.4 随访 以门诊或电话方式进行随访，所有病人自化疗开始均随访1年，统计病人1年总生存率及无进展生存率，进展生存：复查增强头颅MRI，测量肿瘤体积，肿瘤体积较治疗前增加25%及以上，或发生新的部位转移纳入进展生存，否则纳入无进展生存。

1.3 统计学处理 采用SPSS 23.0软件分析数据，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验；计数资料以百分比表示，采用χ2检验；等级资料采用秩和检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 疗效评价及随访结果 90例病人总有效率为34.44%(31/90)，其中完全缓解率为15.56%(14/90)，部分缓解率为18.89%(17/90)，稳定率为37.78%(34/90)，进展率为27.78%(25/90)。随访1年，病人总生存率为32.22%(29/90)，其中无进展生存率23.33%(21/90)，进展生存率8.89%(8/90)。

2.2 有效组和无效组化疗前血清miR-145-5p水平比较 有效组血清miR-145-5p相对表达量高于无效组，差异有统计学意义(P<0.01)。详见表1。

表1 有效组和无效组化疗前血清miR-145-5p水平比较(x±s)

2.3 有效组和无效组临床资料比较 有效组年龄、KPS评分及WHO分级与无效组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 有效组和无效组临床资料比较

2.4 Logistic回归分析影响化疗敏感性的因素 Logistic回归分析结果显示，年龄、KPS评分、WHO分级、血清miR-145-5p水平均是影响化疗敏感性的因素(P<0.05)。详见表3、表4。

表3 影响因素赋值表

表4 Logistic回归分析影响化疗敏感性的因素

2.5 血清miR-145-5p预测脑胶质瘤病人预后的效能分析 血清miR-145-5p相对表达量对脑胶质瘤病人1年死亡预测最佳截断点为6.02，预测灵敏度、特异度、准确度及AUC分别为75.86%、88.52%、84.44%、0.780。详见图1。

图1 血清miR-145-5p预测脑胶质瘤病人预后的ROC曲线图

3 讨 论

脑胶质瘤属于高度恶性肿瘤，发病原因多样，包括家族遗传、接触环境致癌物等[7-8]。替莫唑胺属于烷化剂类药物，临床应用广泛，其缺点是耐药性普遍，疗效个体差异较大[9]。烷化剂耐药的基本机制是癌细胞中存在多种修复细胞损伤因子，如泛素系统酶、甲基鸟嘌呤甲基转移酶等，可降低细胞对烷化剂的敏感性[10-11]。因此，寻找可调节修复因子活性标志物对评估化疗敏感性及预后至关重要。

小分子miRNA通过与靶基因miRNA 3′端非编码区结合，从而调控靶基因转录或翻译过程[12-13]。miR-145在多种恶性肿瘤中表达具有特异性，且可调控肿瘤细胞化疗敏感性，参与肿瘤发生及进展[14-15]。Zhuang等[16]研究发现，通过抑制miR145基因表达，膀胱癌细胞干性随之增强，继而导致耐药性增强。癌细胞存在的损伤修复因子是耐药的重要机制。Chen等[17]研究发现，miR-145-5p可作用于DNA损伤关键容忍蛋白RAD18基因，从而抑制RAD18表达，而RAD18已证实具有降低D组范可尼贫血偶联因子、抑制细胞凋亡作用，RAD18表达降低则化疗敏感性增加。本研究结果证实，血清miR-145-5p相对表达量是影响化疗敏感性的因素，提示miR-145-5p与脑胶质瘤化疗敏感性关系密切，高水平miR-145-5p可增强化疗敏感性，分析可能机制是调控癌细胞损伤修复因子表达而增强化疗敏感性。

癌细胞侵袭、转移是导致疾病复发及预后不良的主要原因。Zhang等[18]发现，胃癌组织miR-145-5p表达水平低于癌旁组织，且与淋巴结转移、分期关系密切，miR-145-5p高表达的病人预后总生存时间长于低表达的病人，与本研究结果相似。Liu等[19]通过分析50例结直肠癌病人血清miR-145表达水平发现，血清低表达水平与结直肠癌分化程度、临床分期、转移等关系密切，可作为预测结直肠癌预后预测的参考指标，与刘妍[20]的研究结果一致。本研究结果发现，血清miR-145-5p相对表达量预测脑胶质瘤病人1年死亡灵敏度、特异度、准确度及AUC均较高，提示血清miR-145-5p与脑胶质瘤预后关系密切，进一步提示血清miR-145-5p水平可作为预测化疗预后的可靠指标。本研究不足之处在于纳入的研究对象均为本院病人，且样本量有限，可能导致结果产生一定偏倚，今后需进一步扩样本量，开展多中心研究，以证实研究结果的准确性。

综上所述，血清miR-145-5p与脑胶质瘤病人化疗敏感性及预后关系密切，高水平miR-145-5p可增强化疗敏感性，并作为预测化疗预后的可靠指标，为提高脑胶质瘤术后化疗疗效及预测预后提供参考，并及时调整治疗策略，为病人争取更多生存机会。