传统方法与分子生物检测结核病的比较研究

2021-05-18 13:34王茂全
健康之家 2021年14期
关键词:比较结核病

王茂全

摘要:目的:比较传统方法与分子生物检测结核病的有效性。方法:选择2016年~2017年在医院就诊的疑似结核患者90例。检测方法采用分子生物检测方法与传统方法,比较两种方法的有效性。结果:传统方法检出率为62.2%,生物检测方法检出率为82.2%。传统方法检出率低于分子生物检测法检出率(P < 0.05) ,差异具有统计学意义。两方法检测阳性符合率为75.6%。结论:在结核病检测中,生物检测方法比传统方法有更多的优点,例如较为方便、速度快、出错率低等,具有良好的诊断价值,适合临床医疗在诊疗活动中使用。

关键词:传统方法;分子生物检测方法;结核病;比较

结核病是由结核分枝杆菌所引起的一类传染性疾病,是由单一病原体传染而引发的死亡数最多的疾病[1~2]。在2010年,我國进行了一次结核病流行病学筛选,流调结果表明,我国每年有超过130万的结核病病人,在全世界的结核病患者中,占比约13.2%,位居全球第二[3~4]。经过过去很长时间的努力,我国结核病的发病率在一定程度上得到了控制,结核病的发病情况趋于平稳。但最近这些年[5~6],我国部分地区结核病再次增多,使得研究人员对此现象十分重视。结核病的初步预防很关键,重点依靠实验室诊断、结核病的鉴定、诊疗的实施。当下结核病检测方法需要的时间比较长,不符合临床的实际需求,因此,必须研究一种新的方法[7]。文章选择2016年~2017年来医院就诊的90例疑似患者,对传统方法与分子生物检测法进行对比,对所获得的结果进行分析。现报道如下:

1 对象与方法

1.1 一般资料

本研究选择2016年~2017年来医院就诊的90例疑似患者,其中男性占比5/9,女性占比4/9,所有患者的年龄30~73岁,年龄的均值与标准差分别是45.4岁、3.6岁,所有选定的患者都被告知本研究的科学目的,同时签署了知情书。

1.2 方法

仪器:PCR仪器所采用的是宏石SLAN-96P。

标本采集液:在采集到的痰液标准样板中加入4%NaOH饱和溶液,加至4倍痰液体积,混匀,室温放置30 min使其液化,取1 mL置于离心管中。离心机12000 rpm,离心5min,除去上清,沉淀后加入1 mL无菌试验生理盐水,搅拌均匀,12000 rpm重复离心5 min,洗涤两次[8~9]。沉淀后加入50 μDNA提取液,充分搅拌得到饱和溶液中的水不溶性成分,采集过程中应使用进样器充分混合均匀平衡[10]。如果移液器吸头太细而无法消化吸收或堵塞吸头,使用未受污染的吸头将其从移液器吸头顶部取出并切成块,然后置于金属浴中10 min,离心5 min,12000 rpm。

检验方法:所有标本均通过提取病原载玻片、抗酸染色光学显微镜和荧光定量PCR检查采集。取一个PCR反应管,插入已解析的质量保险单,8 000 rpm离心5秒,将反应管置于PCR检测器中,增加至93℃预旋2 min,然后93℃45 s,55℃120 s,30个循环后,置于33℃条件下;PCR反应后检测荧光,将PCR管充分冷藏至33℃,扩增后的反应管迅速放入荧光中,检测仪读取并记下数据,荧光激发波长487 mm,检测波长525 mm。

1.3 统计学处理

统计分析软件采用SPSS ,计量资料用均数、标准差表示,两两比较采用独立样本t检验;计数资料用百分比表示,两两比较采用χ2检验。P < 0.05,差异具有统计学意义。

2 结果

传统方法检测阳性56例,检出率62.2%;分子生物检测方法检测阳性74例,检出率82.2%。传统方法阳性检出率低于分子生物学检测方法(P < 0.05) ,差异有统计学意义(χ2 = 8.792) 。两方法检测阳性符合率为75.6%(56/74) ,见表1

3 讨论

结核病是由结核分枝杆菌所引起的,近年来流行率再次持续上升。结核病检测是诊断结核病最特异的方法,痰涂片是肺结核患者诊疗、判断、开具治疗计划、评估治疗结果的常用方式或方法。涂片抗酸染色迅速方便,同时因为非典型分枝杆菌在中国基本上看不到,如果分枝杆菌出现阳性,那么大体上能够判断结核病。样品在体外聚合,采用链式反应(PCR) 方法,扩增出结核杆菌中所含的DNA,并通过电泳进行检测。该方法不用体外预培养,2d就可以获得报告,节省时间并且很方便,可识别细菌种类,但不足之处是可能存在假阳性或假阴性的情况。 PCR技术的应用对于临床疗效评价、传染病控制和发病机制调查具有重要意义。因为被结核杆菌所感染后并不会出现任何显著的症状,只是PPD检测结果是阳性,所以结核病的判断是临床科研以及结核病预防的关键。过去,肺结核的临床判断大多数是按照就诊病人的临床体征,再加上相应的检测化验数据,但由于很多的就诊病人并未存在明显的症状,所以临床诊断困难。实验室结核病的判断大体上是以细菌涂片与痰培养为核心。痰涂片检查法能够判断出结核病的传染源,价格便宜,适合我国国情,然而检测阳性率不高,进而使得对结核病的判断不够准确。然而在当下的结核病实验室测试中,痰培养诊断还是金标准,尤其是针对药敏检测,在患者临床用药和耐药性检测等方面有着十分关键的价值,但检测周期还是比较长,所以需要进行更新。

在治疗结核病领域,生物技术逐渐获得了广泛的应用,其中便包括PCR荧光技术的广泛应用 [11~15]。PCR技术采用结合分枝杆菌为非特异性引物、非特异性荧光探针、PCR反应液、高温DNA聚合酶、单四多肽链等成分,在体外扩增的基础上检测结核分枝杆菌。

PCR技术在生物检测法中的实施是在PCR反射中加入荧光功能基团,检测荧光数据信号的积累,检测PCR的全过程,并对样品中DNA确定的过程。测试结果在1d内获得[16~18]。PCR扩增在封闭状态下进行,会降低环境的影响,减少阳性结果的出现,在检测灵敏度上确定性很高[19]。

本研究获取90份疑似患者痰标本,采用传统方法、生物检测法分别进行检测,传统方法痰涂片阳性率为62.2%,生物检测方法阳性率为82.2%,两种方法的差异具有统计学意义(P < 0.05)。

总而言之,在结核病的检测过程中,生物检测方法比传统方法有更多的优点,例如较为方便、速度快、出错率低等,具有良好的诊断价值,适用于临床医学用途。但是,随着对结核分枝杆菌的科学研究不断增多,许多新的检测方法层出不穷,虽然每一种检测方法都有其自身的优劣势,而且部分新研究出来的检测方法还未能在临床上普及,甚至有一部分还在实验室阶段,但是相信随着我国基础医学以及生物科技的不断进步,研究探索从整体的角度进行,从细菌水平到分子水平,从传统的实验室方法到现代的实验室方法,并且在各个层次和深度上不断进化和完善,这样就可以一个接一个地走进医院,以理想化的方式成功完成结核病的检测[20~22]。作为医学检验技术人员,每个人都必须掌握新的专业知识和新技术应用,寻找一种高精度、非特异性、高灵敏度、简便快捷的结核分枝杆菌检测新方法。

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