茵栀黄注射液联合甘草酸二胺对慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清活性氧、DJ-1和肝功能的影响研究Δ

董巧云，刘晓红，哈斯塔娜，王 燕，武 娜，宋爱云

(1.巴彦淖尔市医院消化科，内蒙古 巴彦淖尔015000； 2.巴彦淖尔市医院中医科，内蒙古 巴彦淖尔 015000； 3.巴彦淖尔市医院胃肠外科，内蒙古 巴彦淖尔015000； 4.巴彦淖尔市医院肿瘤科，内蒙古 巴彦淖尔 015000； 5.巴彦淖尔市医院检验科，内蒙古 巴彦淖尔015000)

乙型肝炎属于临床常见的传染性疾病之一，对于慢性乙型肝炎患者而言，病程较长，乙型肝炎病毒DNA大量复制，持续对肝细胞造成损伤，因此极易出现肝纤维化[1-2]。西医认为，肝纤维化是指在慢性肝脏疾病发展过程中，肝细胞被反复破坏后再生，糖蛋白、胶原以及蛋白多糖等细胞外基质在肝脏中弥漫、过度沉积和异常分布，是肝脏对慢性损伤的病理性修复反应[3-4]。中医将肝纤维化归属于“助痛”“积聚”范畴，认为肝纤维化是正气虚弱、湿热邪毒入侵机体导致的气滞血虚、脉络不通以及血瘀于肝[5]。针对乙型肝炎肝纤维化，一方面需进行抗病毒治疗，另一方面需实施抗纤维化治疗[6]。甘草酸二胺具有较强的抗炎、保护肝细胞以及改善肝功能的作用，对多种具有肝毒性的化学药所导致的肝脏损伤均能发挥防治作用，对于复合致病因子引起的慢性肝损害，可显著提高患者的存活率以及改善肝功能[7]。茵栀黄注射液具有清热、解毒、利湿以及退黄的功效，并且对急性、迁延性以及慢性肝炎均能发挥良好的治疗效果[8]。对于乙型肝炎肝纤维化患者采用茵栀黄注射液和甘草酸二胺联合治疗是否可提高治疗效果，目前临床尚无统一结论。本研究对茵栀黄注射液联合甘草酸二胺治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床效果进行研究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 资料来源

选择2016年10月至2019年10月在巴彦淖尔市医院确诊并进行治疗的82例慢性乙型肝炎肝纤维化患者为研究对象。诊断标准：(1)B超、CT以及肝脏超声波检查结果提示，肝脏出现纤维化改变；(2)Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)以及透明质酸(HA)水平检测提示，肝脏存在纤维化改变。纳入标准：(1)全部患者经临床诊断，均符合慢性乙型肝炎诊断标准，且经B超、CT等检查提示出现肝纤维化表现[9]；(2)近期未进行抗病毒治疗。排除标准：(1)伴有其他肝炎病毒类型者；(2)存在肝硬化或肝癌等疾病者；(3)伴有心脑血管严重病变者；(4)对本研究用药存在过敏症状者；(5)存在严重认知功能障碍，无法正常进行言语交流者。采取随机数字排列表法将82例患者分为对照组(41例)以及研究组(41例)。对照组、研究组患者中男性患者分别为35、34例，女性患者分别为6、7例；平均年龄分别为(52.29±3.91)、(52.48±4.28)岁；平均病程分别为(8.81±2.08)、(8.94±2.23)年。两组患者的基线资料相似，具有可比性。本研究入选患者或其家属均在了解本研究的相关条款和内容后签署了知情同意书，同时本研究经医院伦理委员会审核通过。

1.2 方法

全部患者入院后均完善相关检查，予以对照组患者甘草酸二胺胶囊[规格：50 mg(以C42H68N2O16计)]口服治疗，1次150 mg，1日3次。予以研究组患者茵栀黄注射液以及甘草酸二胺治疗，其中甘草酸二胺使用方法与对照组相同；将茵栀黄注射液(规格：每支装10 ml)20 ml与10%葡萄糖注射液250 ml充分混合后静脉滴注，1日1次。两组患者均持续治疗8周。

1.3 观察指标

(1)分别于治疗前后采集患者空腹上臂静脉血样本5 ml，将其放置在3 000 r/min的离心机中进行持续10 min的离心处理，选择上层血清进行活性氧(ROS)水平检测，采用比色法进行检测，检测试剂盒采购至南京建成生物工程研究所。(2)分别于治疗前后穿刺并采集患者肝脏组织标本，DJ-1蛋白水平通过免疫组化染色法检测，并利用酶标仪绘制标准曲线，计算相应浓度值[10]。(3)分别于治疗前后检测两组患者血清学指标，包含丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、凝血酶时间(TT)以及总胆红素(TBIL)。(4)分别于治疗前后检测每组患者肝纤维化指标，包含PC-Ⅲ、LN、HA以及Ⅳ-C。(5)分析血清ROS与DJ-1蛋白的相关性。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组患者治疗前后血清ROS水平和DJ-1蛋白水平变化情况比较

治疗前，两组患者的血清ROS和DJ-1蛋白水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；研究组患者治疗后的血清ROS、DJ-1蛋白水平明显低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组患者治疗前后血清ROS水平和DJ-1蛋白水平变化情况比较Tab 1 Comparison of changes in serum ROS and DJ-1 protein levels between two groups before and after

2.2 两组患者治疗前后血清学指标水平变化情况比较

研究组患者治疗后的ALT、AST以及TBIL水平明显低于对照组，TT明显长于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组患者治疗前后血清学指标水平变化情况比较Tab 2 Comparison of changes of serum indicators between two groups before and after

2.3 两组患者治疗前后肝纤维化指标水平变化情况比较

研究组患者治疗后的PC-Ⅲ、LN、HA以及Ⅳ-C水平明显低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 两组患者治疗前后肝纤维化指标水平变化情况比较Tab 3 Comparison of changes of liver fibrosis indicators between two groups before and after

2.4 慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清ROS水平与DJ-1表达水平的相关性

Pearson相关分析结果显示，慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清ROS水平与DJ-1表达水平呈较明显的正相关性(r=0.686，P<0.05)。ROS：平均值为67.003 2，标准差为12.535 7；DJ-1：平均值为1.688 5，标准差为0.284 9。相关性曲线见图1。

图1 慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清ROS水平与DJ-1表达水平的相关性Fig 1 Correlation of serum ROS and DJ-1 expression levels in patients with chronic hepatitis B hepatic fibrosis

2.5 慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清ROS、DJ-1表达水平与肝纤维化指标的相关性

慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清ROS、DJ-1表达水平与肝纤维化指标(PC-Ⅲ、LN、HA以及Ⅳ-C)均呈现正相关性(P<0.05)，见表4。

表4 慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清ROS、DJ-1表达水平与肝纤维化指标的相关性Tab 4 Correlation between serum ROS and DJ-1 expression levels and liver fibrosis indicators in patients with chronic hepatitis B hepatic fibrosis

3 讨论

肝纤维化是指因致病因子导致肝内结缔组织异常增生。任何肝脏损伤在肝脏修复愈合过程中都会存在肝纤维化过程，若损伤因素长期不能去除，纤维化过程长时间持续则会发展成肝硬化，对患者生命安全产生严重威胁[11-12]。肝炎是引起肝纤维化的重要因素之一，因此，对于乙型肝炎病毒感染患者，采取有效措施治疗对改善其肝纤维化程度具有积极意义[13-14]。

正常情况下，DJ-1蛋白大部分存在于膜间隙以及细胞质中，当受到氧化应激反应刺激后，DJ-1蛋白可向线粒体转位，随着刺激的进一步加重，可持续向细胞核移位，进而发挥抗氧化效果[15]。甘草酸二胺是从中药甘草中提取的有效成分，可调节患者肝细胞代谢，增强肝细胞活性，进而促进肝功能恢复。其一方面可发挥抗炎效果，进而避免肝炎对患者肝细胞造成持续损伤；另一方面可发挥较高的抗氧化效果，阻碍纤维生成细胞大量增生，进而发挥抗纤维化作用[16]。肝纤维化的发展与氧化应激密切相关，过量的活性氧簇堆积是氧化应激的主要特征。蔡熙等[8]的研究结果显示，茵栀黄注射液可改善患者ALT、谷氨酰转肽酶以及AST等指标水平，提高疾病治疗效果。本研究中，研究组患者治疗后的血清ROS、DJ-1蛋白水平明显低于对照组；ALT、AST以及TBIL水平明显低于对照组，TT明显长于对照组；PC-Ⅲ、LN、HA以及Ⅳ-C水平明显低于对照组，上述差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示，慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清ROS水平与DJ-1表达水平呈较明显的正相关性，慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清ROS、DJ-1表达水平与肝纤维化指标PC-Ⅲ、LN、HA以及Ⅳ-C水平均呈现正相关性。有文献报道，敲除DJ-1基因可引起线粒体形态以及功能改变，DJ-1蛋白表达水平降低可使肝细胞氧自由基水平降低，同时减少吞噬细胞和炎症细胞的浸润，从而延缓了肝纤维化的进展[17]。

有研究结果显示，单一使用甘草酸二胺进行治疗，虽然可发挥一定治疗效果，但是相关指标的改善程度不及联合其他方法治疗组，且联合组患者在治疗过程中未发现明显的不良反应，具有较高的安全性[18]。茵栀黄注射液中包含黄芩、栀子以及茵陈，其中黄芩可发挥清热泻火的功效；栀子具有护肝利胆的效果；茵陈可发挥利湿清热的效果，还可促进胆汁分泌以及排泄，使血液中胆红素水平降低，并发挥抗菌作用[19]。茵栀黄注射液与甘草酸二胺联合应用，可显著提高治疗效果，改善患者的肝功能以及肝纤维化指标水平。

综上所述，对慢性乙型肝炎肝纤维化患者采用茵栀黄注射液联合甘草酸二胺治疗，可改善患者机体血清ROS、DJ-1蛋白水平以及肝功能，延缓肝纤维化进程，提高治疗效果。