兰州市女性人乳头瘤病毒感染状况和基因型分布*

郭雅琼，刘科鹏，赵 彬，张 笠，成 慧，刘 媛△

1.西北民族大学医学检验技术系，甘肃兰州 730000；2.西北民族大学附属医院检验科，甘肃兰州 730000；3.兰州大学第一医院生殖中心，甘肃兰州 730000

人乳头瘤病毒(HPV)可引起人黏膜鳞状上皮改变和皮肤疾病。根据HPV的致癌性，可分为低危型HPV(LR-HPV)和高危型HPV(HR-HPV)[1]。持续性HR-HPV感染是宫颈癌发生的主要高危因素[2]。目前的疫苗并没有对所有HR-HPV基因型进行免疫[3]，因此，早期发现HPV感染并鉴别其基因型对宫颈癌的及时防治具有重要临床意义。目前许多国家已经报告了HPV感染的患病率和基因型地理区域分布，结果差异很大[4]。我国不同地区HPV感染的患病率和基因型分布也各不相同，HPV在华中地区[5]以及东南沿海地区[6]的感染率高于华北[7]和西部地区[8]，同时，HPV在经济发达城市的感染率高于经济欠发达的中小城市[9]。目前关于西北地区兰州市HPV感染流行的报道较少，因此，本课题组通过这项回顾性横断面研究，分析兰州市女性HPV感染状况，从而为改进HPV防治策略和疫苗开发提供理论基础。

1 资料与方法

1.1一般资料 以2018年1月至2019年12月于西北民族大学附属医院和兰州大学第一医院体检中心及妇产科门诊就诊的女性为研究对象。纳入标准：既往无宫颈细胞学异常病史、手术史，近1周内无性生活史和阴道用药史的女性，在月经干净后1周内进行检查。排除重复就医(具有多次HPV基因分型结果)和检测结果记录不明的女性,最终符合纳入标准的女性受试者21 918例，年龄16～83岁，平均(38.5±19.4)岁。按照年龄段将21 918例受试者分为5组，≤25岁组(3 775例)，>25～35岁组(3 520例)，>35～45岁组(5 141例)，>45～55岁组(9 095例)和>55岁组(387例)。本研究经西北民族大学附属医院和兰州大学第一医院伦理委员会批准。

1.2仪器和试剂 荧光定量PCR扩增仪ABI7500来自美国应用生物系统公司，分子杂交仪FYY-3来自江苏兴化分析仪器厂，HPV基因分型试剂盒购自亚能生物技术有限公司。

1.3方法

1.3.1标本采集和保存 受试者取截石位，无菌棉签擦拭宫颈分泌物，用专用宫颈采样拭子于宫颈口旋转1周，采集宫颈脱落细胞于采集器中，密封保存送检。

1.3.2检测方法 HPV基因分型检测采用PCR-反向斑点杂交法，可检测23种基因型别，包括17种HR-HPV(HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73、HPV82)及6种LR-HPV(HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV81、HPV83)。实验严格按照试剂盒说明书进行操作，即标本核酸提取→加样→PCR扩增→反向斑点杂交→数据分析→结果审核→报告结果。实验全过程均在质控范围内。

1.4统计学处理 应用SPSS22.0统计软件和Excel2010进行数据汇总与统计学分析。计数资料以频数、率表示，组间比较采用χ2检验或Fisher精确检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HPV感染情况 21 918例受试者中，共检出HPV感染者4 524例，总感染率为20.64%。感染类型以单一HPV感染为主，占75.04%(3 395/4 524)，其中HR-HPV感染比例最高，为66.03%(2 987/4 524)，LR-HPV感染为9.02%(408/4 524)；多重HPV感染相对较少，占24.96%(1 129/4 524)，其中以双重HPV感染比例最高，为76.44%(863/1 129)，且以多重HR-HPV感染比例最高，为57.84%(653/1 129)。见表1和2。

表1 兰州地区女性HPV感染情况(%)

表2 兰州地区女性HR-HPV、LR-HPV感染情况(%)

2.2HPV基因分型检测情况 在4 524例HPV感染者中可检测到21种HPV基因型，其中HR-HPV阳性率前6种基因型分别为HPV16(14.04%)、HPV52(13.06%)、HPV58(12.58%)、HPV68(9.20%)、HPV53(8.22%)和HPV56(8.22%)；LR-HPV感染率最高的为HPV42(10.17%)。见表3。

表3 HPV基因分型检测情况(%)

续表3 HPV基因分型检测情况(%)

2.3不同年龄组HPV感染类型分布情况 5个年龄组中，以>55岁组感染率最高(29.46%)，其次为≤25岁组(25.75%)，>25～35岁、>35～45岁和>45～55岁3个年龄组感染率相对较低，依次为13.58%、20.02%和21.23%，HPV感染率整体呈现“U”型分布，不同年龄组感染率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。分析比较各年龄组中不同HPV感染类型的感染率发现，各年龄组中单一HPV感染的比例均为最高，且以单一HR-HPV感染为主；多重HPV感染率相对较低，主要以多重HR-HPV感染为主。各组间单一HPV感染率、单一LR-HPV感染率、单一HR-HPV感染率、多重HPV感染率、多重HR-HPV感染率、多重混合型感染率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 不同年龄组HPV感染类型分布情况比较[n(%)]

3 讨 论

宫颈癌是全球妇女中最常见的妇科恶性肿瘤之一，由多种因素共同作用所致。HPV是一种嗜上皮性DNA病毒，属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，能引起人体皮肤黏膜鳞状上皮增殖。在目前已知的HPV基因亚型中，LR-HPV一般不诱发癌变，HR-HPV感染宿主后很容易发生突变而发展为癌，HR-HPV感染是宫颈癌的主要危险因素[10]。因此，早期发现HPV感染，对于预防宫颈癌的发生、发展显得尤为重要。

本研究通过PCR-反向斑点杂交技术对入选的21 918例女性宫颈脱落细胞进行HPV检测发现，兰州市女性HPV总感染率达到20.64%，高于新疆(14.0%)、阳曲(8.9%)、佛山(13.5%)等地区的HPV感染率[11-13]，但低于华中地区，如长沙(26.5%)[6]、重庆(26.2%)[14]，提示HPV在中国不同地区其感染率不同。本研究显示，所有HPV感染者中以单一HPV感染率最高，为15.49%(3 395/21 918)，与相关文献报道一致[15]。说明由于不同地区经济、文化等多因素差异的影响，HPV感染状况存在一定的地域差异，但基本以单一HPV感染为主。同时，超过80%的单一HPV感染者是HR-HPV感染，这也与先前的多项研究一致[16-17]。这些结果表明，HR-HPV感染的筛查和控制是我国宫颈癌防治面临的严峻挑战。

本研究中HPV多重感染率为5.15%。目前关于多重HPV感染是否能够促进宫颈病变的发生、发展，观点尚不一致。有文献报道，多重HPV感染会增加HPV感染的持续时间、宫颈癌及癌前病变的患病风险[18]；另有文献报道，与单一HPV16感染相比，HPV16合并其他亚型多重HPV感染的女性其患宫颈癌的风险并没有增加[19]。因此，有关多重HPV感染对女性宫颈癌及癌前病变的作用有待于进一步研究证实。

本研究中共检出21种HPV基因型别，HR-HPV中危害性最大的HPV16阳性率最高，这与先前文献报道一致[20]，同时还发现HPV52和HPV58也是本地区常见的HR-HPV感染基因型，而LR-HPV则以HPV42最为常见。目前在我国应用于临床的预防性二价疫苗(HPV16、HPV18)和四价疫苗(HPV16、HPV18、HPV6、HPV11)均未涵盖HPV52、HPV58，而预防性九价疫苗(HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV45、HPV52和HPV58)虽涵盖了本地区感染率较高的基因型别，但由于该疫苗接种的最佳年龄为16～26岁，且以无性生活者为宜，因此不完全适用于兰州地区女性。本研究通过对兰州地区女性HPV感染基因型的分布特点进行研究发现，除HPV16外，兰州地区还应重点预防HPV52和HPV58两种亚型的感染，同时，通过本研究为兰州地区疫苗接种和研发提供更全面的流行病学资料。本研究中感染率较高的3种HR-HPV与国内其他地区基本相同，但阳性率不同。说明HPV基因型别在各地区的感染率具有地域差异。这种差异可能与本地区的地理位置、自然条件、居民生活习惯及其就医观念有关。

通过对本地区不同年龄女性HPV感染情况的分析发现，不同年龄组间HPV感染率差异有统计学意义(P<0.05)，且存在2个感染高峰，>55岁组感染率最高(29.46%)，其次为≤25岁组(25.75%)，>25～35岁组最低(13.58%)；>35～45岁组、>45～55岁和>55岁组3组HPV感染率为20.02%、21.23%和29.46%，呈现随年龄增长感染率逐渐增加的趋势。HPV感染率整体呈现“U”型分布，与国外有关报道类似[21]。≤25岁组感染率高可能与该年龄段女性性生活活跃、生殖道尚未完全发育成熟等有关，但因该年龄组女性自身免疫力强，故少有造成癌变，多为一过性感染，大多数会在1～2年内自愈[22]，因此，对该年龄段女性的性教育、HPV感染知识普及和HPV疫苗接种等显得尤为重要。>55岁组感染率最高，可能由于该年龄段女性机体免疫力和激素水平降低所致，该年龄段女性容易发生HPV感染，且HPV潜伏感染易转变为持续感染，而HR-HPV的持续感染更容易使宫颈发生癌变，因此，对本地区>55岁女性的防治措施应以宫颈癌筛查为主，在筛查HPV感染情况的同时进行液基薄层细胞学检查，从而更有效地降低本地区宫颈癌的发生率。

综上所述，兰州市女性HPV感染率较高的3种HR-HPV为HPV16、HPV52、HPV58，单一HPV16感染是最常发生和最具持续感染倾向的基因型；35岁后HPV感染率随年龄的增加而增加，尤其以>55岁女性HPV感染率增加最为明显。