ABO新生儿溶血病患儿溶血三项试验和就诊日龄与血清总胆红素水平的关系研究*

徐文莹 任新雯 井忠翠 刘爱萍 刘耿君 王海燕

ABO新生儿溶血病（ABO haemolytic disease of the newborn，ABO-HDN）是一种免疫介导的溶血性疾病，主要发生于O型妇女分娩的A型或B型的新生儿，发生ABO新生儿溶血病的患儿有可能出现不同程度的贫血及高胆红素血症，严重时胆红素通过胎儿或新生儿的血脑屏障，导致核黄疸甚至会造成终生残疾，如听力障碍等[1]。目前，ABO新生儿溶血病的诊断主要依靠溶血三项试验，包括直接抗人球蛋白试验（direct anti-globulin test，DAT），游离抗体试验（free antibody test）和抗体释放试验（erythrocyte antibody eluate test）。有研究报道，不同日龄的人群，ABO新生儿溶血病确诊率不同[2]。目前关于溶血三项试验和新生儿就诊日龄与血清总胆红素（total serum bilirubin，TSB，μmol/L）的水平的相关分析却尚无报道。基于此，本研究旨在进一步探讨ABO新生儿溶血病患儿溶血三项试验和就诊日龄与血清总胆红素水平的关系，以期为临床诊治提供参考依据。

材料与方法

1 一般资料 选取青岛大学附属医院2016年12月～2020年4月诊断为ABO新生儿溶血病的411例新生儿作为本次实验研究对象。纳入标准：（1）母婴ABO血型不合；（2）新生儿出现高胆红素血症；（3）DAT和（或）红细胞抗体释放试验阳性[3]。排除标准：（1）合并母婴Rh血型不合；（2）患有免疫系统疾病以及血液相关疾病；（3）合并新生儿感染（包括败血症、肺炎、脐炎和肠炎）、新生儿缺氧（包括胎儿宫内窘迫、出生后窒息、出生后持续性缺氧）、头颅血肿。依据BHUTANI等所制作的新生儿小时胆红素列线图为参考，当新生儿胆红素水平超过95百分位（P95）时诊断为高胆红素血症[4]。

2 仪器与试剂 标准抗-A、抗-B、抗Rh-D血型定型试剂（批号：20200508，上海血液生物医药有限责任公司），ABO正反定型及Rh-D血型定型柱凝集试剂卡（批号：AHC168F，奥森多临床诊断有限责任公司），抗人球蛋白检测柱凝集试剂卡（批号：ABR2D7J，奥森多临床诊断有限责任公司）。全自动生化分析仪（日立7600），恒温水浴箱（恒丰，HH-W 420），医用低速离心机（北京BASO，2005-1）等。

3 研究方法 新生儿血液标本进行溶血三项试验、总胆红素检测。同时收集新生儿的临床资料和实验室结果，包括患儿的性别、胎龄、出生体重、就诊日龄。采用微柱凝胶卡式法对新生儿及其母亲进行ABO血型和Rh（D）血型鉴定以及新生儿溶血三项的检测，所有操作均按照《全国临床检验操作规程》进行[5]。

4 统计学处理 采用SPSS 26.0统计学软件进行数据描述及统计分析。采用Shapiro-Wilk检验连续变量的正态性。对分类变量使用χ2检验或Fisher精确概率法检验组间差异性。对连续变量使用Mann-Whitney U检验（两组之间）或Kruskal-Wallis H检验（多组之间）检验组间差异性。如果多组间存在显著差异，使用Bonferroni校正进行事后多重比较。使用Spearman相关检验分析变量之间的相关性。P＜0.05（双侧）表示差异具有统计学意义。

结 果

1 新生儿临床资料特征及其在TSB水平上的比较 46.47%（191/411）的新生儿为男性，46.96%（193/411）的新生儿血型为A型，2.68%（11/411）的新生儿胎龄小于35周，4.38%（18/411）的新生儿出生体重小于2 500 g，38.93%（160/411）的新生儿在出生后24 h之内入院，14.60%（60/411）的新生儿DAT检测结果为阳性，13.14%（54/411）的新生儿溶血三项试验均为阳性。新生儿胎龄（＜35周和≥35周[4]）、出生体重（＜2 500 g和≥ 2 500 g[4]）、就诊日龄（≤1 d、2～4 d和≥5 d）、DAT阳性与否和溶血三项结果皆为阳性与否在TSB水平上的差异均具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 新生儿临床资料和实验室结果在TSB水平上的比较

2 DAT阳性率与就诊日龄的比较 411例新生儿在三组日龄分组（≤1 d组、2～4 d组、≥5 d组）的DAT阳性率分别为50%，46.67%，3.33%，三组差异具有统计学意义（P＜0.05）。即就诊日龄越大，DAT阳性率越低。见表2。

3 TSB水平在就诊日龄上的比较及相关性分析

3.1 排除11例胎龄小于35周和18例出生体重小于2 500 g的新生儿病例，382例新生儿在三组日龄分组（≤1 d组、2～4 d组、≥5 d组）中位TSB水平分别为176.37 μmol/L、220.20 μmol/L和271.10 μmol/L。三组TSB水平差异具有统计学意义（P＜0.001），采用Bonferroni校正检验进行组间两两比较，经两两比较差异均有统计学意义（P＜0.001）。即就诊日龄越大，TSB水平越高。见表2。

表2 DAT检测结果与TSB水平在不同日龄组的比较

3.2 382例新生儿TSB水平与就诊日龄相关系数为0.42（P＜0.001），呈正相关。见图1。

图1 新生儿ABO溶血病患儿的总胆红素与就诊日龄的相关性分析

讨 论

新生儿溶血病是指母婴血型不合引起的新生儿同种免疫性溶血性疾病，母婴ABO血型不合引起的ABO-HDN约占新生儿溶血病总数的85.3%[6]。大多数病例症状轻微[3]，但仍有高胆红素血症病例报道。临床上仍依据溶血三项试验来诊断ABO-HDN。DAT是用来检测新生儿体内的红细胞是否被母亲来源的IgG抗体致敏，但是由于新生儿红细胞上的血型抗原数量少，能与母体IgG抗体结合的位点有限，DAT对ABO-HDN阳性检出率不足40%[7，8]。游离试验是用来检测新生儿血浆中是否存在与其红细胞未结合的IgG抗体，其对ABO-HDN阳性检出率在70%左右[7，8]，但是随着时间的延长，抗体减弱，其检出率有所下降。本研究数据显示确诊的新生儿中只有14.60%的新生儿DAT阳性，79.81%的新生儿游离试验阳性，DAT阳性与否与患儿TSB水平相关，这与蔡莹等人的结果一致[9]，但曾月婷等人表示直抗试验阳性强弱程度并不能明显反映新生儿溶血病患儿的溶血程度[10]，这可能是由于我们在选择研究病例时将合并患有影响TSB水平疾病的病例排除在外，DAT结果更能反映ABOHDN患儿的溶血实际情况。

当足够多的IgG抗体进入新生儿体内，新生儿红细胞血型抗原上结合大量IgG抗体，溶血三项试验均为阳性时，有大量的红细胞被破坏，此时溶血较严重。本研究显示，溶血三项试验均为阳性的新生儿TSB水平显著高于其他新生儿，当三项试验均为阳性时，表明新生儿红细胞上被致敏大量相应血型抗原的抗体。所以溶血三项试验对新生儿溶血病的病情严重程度有良好的提示作用。

由于ABO-HDN可发生在第一胎，孕妇血清中IgG抗体效价的高低对ABO-HDN的发生率有直接关系，目前临床上通常以1∶64作为临界值，抗体效价越高，新生儿发生溶血的可能性越大。同时随着IgG抗体效价的上升， ABO-HDN的血清总胆红素水平也呈升高趋势[11]。新生儿抗体效价越高，与患儿红细胞上相应抗原结合的抗体也越多，红细胞破坏概率越高，血清胆红素水平也越高[12]，所以IgG抗体效价对新生儿溶血程度筛查也有一定的指导意义。

ABO血型不合导致的新生儿高胆红素血症通常是早发的，常会在患儿出生的前一周因胆红素生成过多或胆红素代谢紊乱引起胎儿黄疸[1]。而新生儿溶血病患儿在出生时常只存在轻中度皮肤黏膜黄染，无明显贫血症状，故常导致延误患儿诊断及治疗。大量研究表明新生儿日龄、标本送检时间为ABO-HDN检出的独立因素，随着时间的推移，ABO-HDN检出率逐渐降低[2，7]，这可能是由于被致敏的红细胞经代谢破坏或从新生儿红细胞上洗脱下来的IgG抗体减少，导致DAT和游离试验的阳性率逐渐减低，同时，这也解释了我们的研究结果，由于红细胞被大量破坏加之新生儿肝脏处理胆红素的能力不足，随着新生儿日龄的增加，DAT的检出率逐渐降低，胆红素水平逐渐升高。

患儿的胎龄和出生体重皆为新生儿发生高胆红素血症的危险因素，为更好地说明患儿就诊日龄与TSB的关系，我们排除了胎龄小于35周和出生体重小于2 500 g的研究病例。结果显示，日龄≥5 d的新生儿TSB水平显著高于日龄≤1 d组和2～4 d组的新生儿，日龄与胆红素水平之间呈现良好的相关性，相关系数为0.42。说明ABO-HDN患儿如不进行相关治疗，溶血程度会逐渐加重。故根据我们的研究结果，对于存在母婴ABO血型不合并疑似ABO-HDN的新生儿来说，及时干预治疗是降低不良后果的关键因素。新生儿ABO溶血病是病理性黄疸主要致病因素，病情严重的新生儿一旦发生胆红素脑病，新生儿的智力和身体机能都会受到严重影响。根据本研究结果，我们建议对于疑有新生儿ABO溶血病的新生儿及时进行溶血三项检测，早日诊断，及时干预，以减少不良后果的发生。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突。