高危型HPV感染对不孕患者阴道微生态、免疫功能及辅助生殖临床结局的影响

王宁宁 朱文怡 李生君 张宪军

河北省衡水市人民医院(哈励逊国际和平医院)(053000)

研究证实高危型持续性人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌发生的主要原因[1]。大部分HPV感染可通过体液和细胞免疫清除，但仍有部分HPV患者呈持续感染状态[2-3]。部分研究提示感染HPV的患者发生不孕概率更大，且多为高危型[4-5]。但其对阴道微生态变化、免疫功能与辅助生殖临床结局的影响研究较少。基于此，本研究探索高危型HPV感染对不孕患者免疫功能改变及辅助生殖(ART)临床结局的影响，为临床提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月-2020年1月本院收治的不孕症患者经IVF/ICSI鲜胚移植的高危型HPV感染90例为感染组、HPV阴性90例为未感染组。纳入标准：①所有患者均已婚，未采取避孕措施，同居有正常性生活≥1年未孕；②不孕原因为输卵管障碍、男方少、弱精子症、排卵障碍等；③高危HPV核酸检测；④长方案促排移植第2天或第3天新鲜分裂胚2枚。排除标准：①合并肿瘤、免疫功能障碍患者；②男女双方中有一位染色体异常、严重子宫内膜异位症、子宫腺肌症、子宫肌瘤、生殖道畸形、反复助孕失败或反复流产；③内分泌疾病。本研究经本院伦理委员会审批，患者均签署知情同意书。

1.2 检测方法

①高危型HPV：患者检测前3天无性生活、阴道冲洗或用药、妇科检查后常规采集样本，取得足够上皮细胞后备检。使用PCR-荧光探针法行HPV检测，检测包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68亚型在内的13种高危型HPV，根据判别软件判读结果。试剂盒由江苏硕士生物科技股份有限公司生产。②阴道微生态：采用阴道微生物联合试剂盒测定，包括唾液酸苷酶活性、过氧化氢活性、白细胞酯酶活性，唾液酸苷酶显色为红、紫色为阳性；过氧化氢<2μmol/L不显色为阳性；白细胞酯酶显绿色、蓝色为阳性，3者中出现一项阳性即诊断为阴道微生态失衡，3者均为阴性则为阴道微生态正常。③免疫功能：取患者空腹静脉血处理后，使用流式细胞分析仪(BD FACSCalibur)检测免疫指标自然杀伤细胞(NK)与B淋巴细胞(B)数值。

1.3 观察指标

记录患者一般资料，观察对比两组患者免疫指标情况，随访跟踪患者辅助生殖临床结局。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 两组患者一般资料比较

两组一般资料对比无差异(P>0.05)。见表1。

表1 两组患者一般资料比较

相关指标 感染组(90例)未感染组(90例)t/χ2P不孕类型[例(%)]0.3600.549 原发不孕52(57.78)48(53.3) 继发不孕38(42.2)42(46.7)不孕原因[例(%)]0.4810.488 输卵管问题24(26.7)23(25.6) 排卵障碍36(40.0)38(42.2) 男方弱精少精15(16.7)18(20.0) 其他15(16.7)11(12.2)

2.2 两组患者阴道微生态情况比较

感染组乳酸杆菌异常、细菌性阴道炎、衣原体、解脲脲原体感染、阴道微生态失调发生情况高于未感染组(P<0.05)，霉菌、支原体、滴虫感染情况两组无差异(P>0.05)。见表2。

表2 两组患者阴道微生态情况比较

2.3 两组患者免疫功能指标比较

感染组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK低于未感染组，CD8+高于未感染组(P<0.05)，B细胞两组无差异(P>0.05)。见表3。

表3 两组患者免疫功能指标比较

2.4 高危型HPV感染与免疫功能相关性

Spearman 相关性结果显示：CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK与高危型HPV感染存在负相关，CD8+与高危型HPV感染存在正相关(均P<0.05)。见表4。

表4 高危型HPV感染与免疫功能相关性(%)

2.5 两组患者CD4+/CD8+分布情况对比

两组患者CD4+/CD8+分布存在差异，感染组患者1.1～1.9少于未感染组(P<0.05)。见表5。

表5 两组患者CD4+/CD8+分布情况对比[例(%)]

2.6 两组患者辅助生殖临床结局比较

两组患者在辅助生殖临床结局上(Gn用量、Gn天数、扳机日内膜、获得成熟卵数量、有效胚胎数、临床妊娠率、活产率、流产率、异位妊娠、种植率)无差异(P>0.05)。见表6。

表6 两组患者辅助生殖治疗情况和临床结局比较

3 讨论

阴道微生态平衡是女性生殖系统健康的重要保证，HPV感染使阴道细菌群失调，致使宫颈细胞学发生变化[6]。在本研究中感染组患者乳酸杆菌异常、细菌性阴道炎、衣原体、解脲脲原体感染、阴道微生态失调发生情况高于未感染组，而霉菌、支原体、滴虫感染情况两组未见差异。分析为：乳酸杆菌是阴道优势菌群，可抑制病原体入侵，激活粘膜免疫系统，及时清除致病菌。当HPV感染发生时乳酸杆菌受到抑制减少，异常增加，屏障作用减弱使衣原体、解脲脲原体等致病菌大量繁殖，炎性反映增加，进一步作用HPV感染持续发生。

HPV患者自身感染细胞清除主要依赖免疫系统[7]，细胞免疫是抵抗病毒的主要方式[8]。淋巴细胞是免疫细胞系统的主细胞，主要包括T淋巴细胞(T)、自然杀伤细胞(NK)与B淋巴细胞(B)，三者共同作用维持机体免疫系统运作。其中T细胞是免疫平衡与维持免疫反应的主导者，CD3+参与T细胞活化信号转导，可有效启动免疫应答；CD4+和CD8+是T细胞表面抗原差异体现，前者CD4+存在于辅助T淋巴细胞，可指导机体抵抗病毒入侵，增强抗病毒能力；后者CD8+存在于抑制性T细胞，参与炎症反应；CD4+/CD8+比值有助于评估机体免疫平衡状况[9-10]。NK细胞是天然免疫系统组成部分，能够识别靶细胞、杀伤介质[11-12]。在本研究中：感染组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK低于未感染组，CD8+高于未感染组，两组B细胞无差异。Spearman 相关性结果显示：CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK与高危型HPV感染存在负相关，CD8+与高危型HPV感染存在正相关，提示高危HPV感染患者机体免疫功能下降。分析原因为：高危HPV感染患者机体B细胞协同作用不明显；高危HPV感染影响NK细胞迁移黏附及细胞表达，使NK细胞水平下降；T细胞对病毒敏感性强，机体遭受高危HPV感染，T细胞群发生紊乱，细胞免疫应答、辅助细胞减少，抑制细胞增加。有研究表明[13]，高危型HPV感染会导致免疫细胞变化，使细胞群发生紊乱，免疫失衡。既往研究得出[14]，成年女性CD4+/CD8+正常值为1.1～1.9，其它皆为异常。本研究中感染组患者1.1～1.9分布少于未感染组，提示高危HPV感染女性多出现免疫失衡状况。

人类辅助生殖技术是临床治疗不孕症的有效手段[15]。相关研究表明，HPV感染ART患者临床妊娠率较非感染者低、周期流产率更高；亦有研究提出HPV感染对ART患者辅助生殖结局无明显影响[16-17]。本研究通过对比，两组患者在辅助生殖临床结局上(Gn用量、Gn天数、扳机日内膜、获得成熟卵数量、有效胚胎数、临床妊娠率、活产率、流产率、异位妊娠、种植率)无明显差异。提示高危型HPV感染未影响排卵、辅助生殖结局。

综上所述，高危型HPV感染不影响不孕患者辅助生殖临床结局，但会导致阴道微生态改变及免疫功能失衡紊乱，仍然需要及时治疗。