鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p的表达水平及临床价值

薛玉峰，张会平，王 芳，郝宗生

(涿州市医院 a.耳鼻喉科；b.药剂科，河北涿州 072750)

鼻咽癌是一种起源于鼻咽部上皮细胞的恶性肿瘤，其进展隐匿，有很高的恶性程度，多数患者发展到临床晚期才发现，致使其预后较差，5年生存率较低[1]。因此，寻找一种对鼻咽癌早期诊断的生物标志物显得非常重要。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一类单链、进化高度保守的小分子非编码RNA，参与鼻咽癌的发生发展过程[2-3]。研究发现，鼻咽癌中miR-144-3p 及miR-151-3p 存在异常表达，其通过调控多种靶基因的生物学功能参与鼻咽癌的发生发展，有望作为诊断鼻咽癌的潜在标志物[4-5]。但关于miR-144-3p 及miR-151-3p 在鼻咽癌中的临床诊断价值尚未阐明。因此，本研究通过检测鼻咽癌患者血清miR-144-3p 及miR-151-3p 表达水平，分析其与鼻咽癌病理特征的关系及诊断鼻咽癌的价值，为临床提供参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取涿州市医院2016年1月～2020年7月收治鼻咽癌患者106 例，男性63 例，女性43例，年龄36～78（59.20±12.75）岁。依据临床分期：I 期12 例，Ⅱ期19 例，Ⅲ期50 例，Ⅳ期25 例；淋巴结转移：颈部伴淋巴结转移51 例，无淋巴结转移55 例。纳入标准：首次确诊鼻咽癌，经鼻咽部组织活检病理学检查确诊。排除标准：既往已接受放疗、化疗或其他抗肿瘤治疗者，并发其他恶性肿瘤者。另选取同期正常者50 例作为对照组，男性32 例，女性18 例，年龄38～75（60.28±10.53）岁。两组年龄、性别比较差异无统计学意义（P>0.05）。本研究与患者签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂 ABI 7500 型荧光定量PCR 仪（美国ABI 公司），PCR 试剂盒购自上海吉凯基因化学技术有限公司，RNeasy 试剂盒、miRNA Easy 试剂盒和TRIzol 试剂盒均购自美国Qiagen 公司，离心机为美国ABI 公司产品。生化分析仪为日立7600型全自动生化分析仪。

1.3 方法 所有研究对象均采集空腹静脉血3ml，离心分离血清，在ABI 7500 型荧光定量PCR 仪上检测miR-144-3p 及miR-151-3p。PCR 总反应体系为20μl：1μl 引物及探针Mix（20×），10μl TaqMan 通用混合物溶液（2×），1.33 μl 反向转录脱氧核糖核酸，7.67μl 双蒸馏水；反应条件：95℃预变性10 min；95℃变性15 s，60℃退火60 s，进行45 个循环。采用2-△△Ct法计算miR-144-3p 及miR-151-3p 水平。

1.4 统计学分析 采用SPSS22.0 统计软件分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。应用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析miR-144-3p 及miR-151-3p 诊断鼻咽癌的价值。采用Pearson法进行相关分析。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组miR-144-3p 及miR-151-3p 水平比较 鼻咽癌组血清miR-144-3p 及miR-151-3p 表达水平分别为2.36±1.05 和3.58±1.73，均明显高于正常对照组（0.82±0.27 和0.97±0.36），差异有统计学意义（均P<0.001）。

2.2 miR-144-3p 及miR-151-3p 与鼻咽癌临床病理特征的关系 见表1。鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p 表达水平升高与临床分期高、分化程度低、淋巴结转移及远处转移有关，差异均有统计学意义（均P<0.01）。

表1 miR-144-3p 及miR-151-3p 与鼻咽癌临床病理特征的关系（n=106,±s）

表1 miR-144-3p 及miR-151-3p 与鼻咽癌临床病理特征的关系（n=106,±s）

类 别nmiR-144-3pt 值P 值miR-151-3pt 值P 值病理类型 鳞状细胞癌492.32±1.05 0.8710.375 3.50±1.66 1.1730.245非角化型402.39±0.973.62±1.74未分化型172.44±1.083.70±1.78临床分期 Ⅰ～Ⅱ期311.68±0.57 12.153<0.001 2.30±1.06 16.375<0.001Ⅲ～Ⅳ期753.05±1.204.72±2.18分化程度 中高分化631.94±0.73 5.8240.002 2.66±1.17 10.726<0.001低分化432.80±1.104.45±1.96淋巴结转移 有513.27±1.28 14.285<0.001 4.93±2.25 19.307<0.001无551.60±0.542.18±1.03远处转移 有373.35±1.31 16.170<0.001 5.15±2.30 21.286<0.001无691.56±0.502.04±1.03

2.3 miR-144-3p 及miR-151-3p 诊断鼻咽癌的价值 见表2 和图1。血清miR-144-3p 及miR-151-3p 表达水平诊断鼻咽癌的最佳截断值分别为1.61和2.25，二者联合诊断鼻咽癌的曲线下面积（0.937，95%CI：0.875～0.996）明显高于单项miR-144-3p（0.820，95%CI：0.762～0.881）和miR-151-3p（0.858，95%CI：0.797～0.915），差异有统计学意义（P<0.05），其敏感度为95.3%，特异度为87.0%。

图1 miR-144-3p 及miR-151-3p 诊断鼻咽癌的ROC 曲线

表2 miR-144-3p 及miR-151-3p 诊断鼻咽癌的价值

2.4 miR-144-3p 表达水平与miR-151-3p 的相关性 见图2。相关分析显示，鼻咽癌患者血清miR-144-3p 表达水平与miR-151-3p 呈正相关（r=0.872，P<0.001）。

图2 血清miR-144-3p 表达水平与miR-151-3p 的相关性

3 讨论

鼻咽癌是常见的头颈部恶性肿瘤，其发病部位隐蔽，早期无典型症状，且个体疗效差异较大，故寻找高特异度和高敏感度的生物标志物，对鼻咽癌的早期诊断和预后判断具有重要的临床意义。近年来研究表明，miRNA 在鼻咽癌的发病过程中起到重要的作用，并可为鼻咽癌诊断及靶向治疗提供新的思路[6-7]。有研究指出，miR-144-3p 在恶性肿瘤患者中存在异常表达，对肿瘤细胞的分化、增殖起到重要的调控作用，有望成为恶性肿瘤早期诊断、疗效监测及靶向基因治疗的新型标志物[8]。另有研究认为，miR-151-3p 通过调节多种信号通路，影响肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭，与鼻咽癌的发生和发展相关，可能作为恶性肿瘤诊断及疗效预测的生物标志物[9]。

本研究显示，miR-144-3p 及miR-151-3p 在鼻咽癌组中的表达水平明显高于对照组，提示鼻咽癌存在miR-144-3p 及miR-151-3p 的异常高表达，具有癌基因作用，可参与鼻咽癌的发生。SONG 等[10]研究发现，miR-144-3p 在鼻咽癌组织中明显高表达，其通过直接靶向磷酸酶与张力蛋白同源物基因促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭，诱导鼻咽癌上皮间质转化，促进鼻咽癌的进展。LIU 等[11]研究表明，鼻咽癌组织中miR-151a-3p 水平明显高于癌旁组织，miR-151a-3p 促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭，与鼻咽癌发病密切相关。本研究中Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌患者血清miR-144-3p 及miR-151-3p 表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期，miR-144-3p 及miR-151-3p 表达水平在低分化和有淋巴结转移的鼻咽癌患者中均明显升高，提示miR-144-3p 及miR-151-3p 的高表达可促进鼻咽癌的发生发展。既往研究认为，鼻咽癌组织中miRNA 的表达水平显著高于癌旁组织，有远处转移的患者miRNA 的表达水平明显高于无远处转移患者，而且miRNA 高表达患者预后较差，提示miRNA 可能在鼻咽癌远处转移中起重要作用，对预后有重要影响[12]。本研究ROC 曲线显示，miR-144-3p 为1.61 及miR-151-3p 为2.25 是诊断鼻咽癌的最佳截断值，二者联合诊断鼻咽癌的效能较高。本研究相关性显示，miR-144-3p 与miR-151-3p在鼻咽癌中呈正相关。这说明miR-144-3p 及miR-151-3p 可作为诊断鼻咽癌的生物学标志物，二者联合检测诊断鼻咽癌的价值最大。LI 等[13]研究显示，miRNA 在Ⅰ期鼻咽癌中表达异常，参与肿瘤形成和发展相关的通路，为鼻咽癌的早期发现和治疗提供了依据。WEN 等[14]研究发现，与传统的血清标志物相比，miRNA 对鼻咽癌的诊断敏感度和特异度较高，可能是鼻咽癌新的血清学标志物和潜在的治疗靶点，具有广阔的应用前景。另有研究表明，miRNA 能调控多种靶基因的生物学功能，是一种有前途的鼻咽癌非侵袭性生物标志物，为鼻咽癌的诊断和治疗提供了一个新的方向[15]。

综上所述，miR-144-3p 及miR-151-3p 在鼻咽癌中呈高表达，且与鼻咽癌的发生发展密切相关，二者联合检测有助于提高鼻咽癌的诊断价值，能够为临床治疗提供新的思路。