假酸浆果化学成分及其抗炎活性

刘 艳， 孙逢恬， 姜海冰， 潘 娟， 管 伟， 杨炳友*， 匡海学*

(1.黑龙江中医药大学，北药基础与应用研究教育部重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040；2.中国医学科学院药物研究所，北京协和医学院天然药物生物活性物质与功能重点实验室，北京 100050)

假酸浆果是茄科植物假酸浆属假酸浆Nicandraphysaloides(L.) Gaertn.的干燥果实。《中药词典》中记载，我国南方和北方地区都将假酸浆全株(包括果实和种子部分)作为药用，其性甘、酸，味微苦、平，具有祛痰、镇静、清热解毒等功效，常用于治疗风湿痛、狂犬病、精神病、癫痫、鼻渊、感冒、尿道感染以及疮疖等。现代研究表明，假酸浆具有杀虫、抗肿瘤、抗氧化、抗菌、利尿、降糖等药理作用，对假酸果化学成分的研究主要包括甾体、类黄酮、生物碱和脂肪酸[1]。为了丰富对假酸浆果化学成分的认知，本实验进一步探索了其化学成分，最终得到了27个化合物，均为首次从该植物中分离得到，并采用LPS诱导RAW264.7炎症细胞模型评价其抗炎活性。

1 材料

Waters 2695-2996型分析HPLC、Delta 600-2487型制备HPLC、Acquity Ultra Performance液质仪(美国Waters公司)；Bruker-400超导核磁共振光谱仪(瑞士Bruker公司)；SunFire分析型色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm，美国Waters公司)；SunFire半制备型色谱柱(10 mm×250 mm，5 μm；美国Waters公司)；SunFire制备型色谱柱(19 mm×250 mm，10 μm，美国Waters公司)；硅胶(80～100、200～300目，青岛海洋化工厂)；ODS-7515-12A柱色谱用反相ODS(日本YMC公司)；AB-8大孔吸附树脂(沧州宝恩吸附树脂科技有限公司)。

ELx 800酶标仪(美国BioTek公司)；BT25S型电子分析天平(德国Sartorius公司)；150i型二氧化碳培养箱(美国Thermo公司)；Vert-A1型荧光倒置显微镜(德国Carl Zeiss公司)；TDL-4型低速离心机(上海安亭科学仪器厂)。RAW264.7细胞系(武汉大学细胞保藏中心)。胎牛血清(杭州四季青天杭生物科技有限公司)；DMEM(美国Corning公司)；10 000 U/mL青霉素/链霉素(美国Corning公司)；胰蛋白酶细胞消化液(英国Leagene公司)；DMSO(德国Vetec公司)；Lipopolsaccharide(Biosharp公司)；甲基四唑蓝(MTT，Biotopped公司)；无水对氨基苯磺酸(天津市光复精细化工研究所)；N-α-萘乙二胺(天津市傲然精细化工研究所)；85%浓磷酸(天津市科密欧化学试剂有限公司)；醋酸地塞米松(天津天药药业股份有限公司)。96孔板(美国Corning公司)。

假酸浆果采收自黑龙江中医药大学药用植物园，于通风处放置阴干，经黑龙江中医药大学药学院药用植物教研室樊锐锋鉴定为茄科假酸浆属植物假酸浆NicandraPhysaloides(L.) Gaertn.的果实，标本(编号2014007)保存于黑龙江中医药大学中药化学教研室。

2 提取与分离

干燥粉碎的去籽假酸浆果(20 kg)用70%乙醇回流提取3次，每次2 h，减压回收溶剂，得提取物2.34 kg。将提取物与水混悬均匀，通过AB-8型大孔吸附树脂柱处理，依次用10%、30%、95%乙醇洗脱，收集各组分洗脱液，回收溶剂，得10%乙醇洗脱组分914.0 g、30%乙醇洗脱组分452.6 g、70%乙醇洗脱组分306.7 g。

95%乙醇组分(150 g)通过硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇(100∶1～0∶1行梯度洗脱，所得到的洗脱液反复经过TLC分析鉴别后合并，最终得到Fr.1～9共9个流分。Fr.1经过硅胶二氯甲烷-甲醇(8∶2～0∶1)、Sephadex LH-20分离得化合物20(10 mg)、23(5 mg)；Fr.2经过硅胶二氯甲烷-甲醇(8∶2～0∶1)、Sephadex LH-20分离得化合物1(8 mg)、15(7 mg)、16(5 mg)、18(7 mg)、27(6 mg)；Fr.3经过硅胶二氯甲烷-甲醇(7∶3～0∶1)，Sephadex LH-20分离得化合物2(13 mg)、3(10 mg)、17(9 mg)、22(7 mg)、26(6 mg)；Fr.5经过ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制备型HPLC分离得化合物25(6 mg)；Fr.6经过ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制备型HPLC分离得化合物6(11 mg)；Fr.7经过ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制备型HPLC分离得化合物5(10 mg)；Fr.8经过ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制备型HPLC分离得化合物4(11 mg)。

30%乙醇组分(100 g)经反相ODS柱，水-甲醇(1∶9～0∶1)系统梯度洗脱，所得到的洗脱液反复经过TLC分析鉴别后合并，最终得到Fr.1～5共5个流分。Fr.1经过ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制备型HPLC分离得化合物7(15 mg)、11(12 mg)；Fr.2经过ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制备型HPLC分离得化合物8(9 mg)、13(19 mg)；Fr.3经过ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制备型HPLC分离得化合物9(10 mg)、10(14 mg)、14(13 mg)；Fr.4经过ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制备型HPLC分离得化合物12(13 mg)、24(4 mg)。

10%乙醇组分(100 g)经反相ODS柱，水-甲醇(1∶0～0∶1)梯度洗脱，所得到的洗脱液反复经过TLC分析鉴别后合并，最终得到Fr.1～6共6个流分。Fr.1经过ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制备型HPLC分离得化合物21(4 mg)；Fr.5经过ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制备型HPLC分离得化合物19(7 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：不定形粉末(甲醇)，分子式C10H10O4，ESI-MSm/z：195.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：3.75(3H，s，COOCH3)，6.25(1H，d，J=15.9 Hz，H-7)，6.77(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.94(1H，dd，J=2.0，8.2 Hz，H-6)，7.04(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.54(1H，d，J=15.9 Hz，H-8)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：127.7(C-1)，115.1(C-2)，147.0(C-3)，149.6(C-4)，116.5(C-5)，122.9(C-6)，147.0(C-7)，114.9(C-8)，52.0(-OCH3)，169.8(-COOH)。以上数据与文献[2]报道基本一致，故鉴定为咖啡酸甲酯。

化合物2：不定形粉末(甲醇)，分子式C20H20O7，ESI-MSm/z：373.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.98(1H，d，J=1.9 Hz，H-3′)，6.94(1H，d，J=1.9 Hz，H-3)，6.87(1H，dd，J=8.0，1.9 Hz，H-5′)，6.85(1H，dd，J=8.0，1.9 Hz，H-5)，6.82(1H，d，J=8.0 Hz，H-6′)，6.80(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，5.38(1H，d，J=3.9 Hz，H-7′)，5.22(1H，d，J=3.9 Hz，H-7)，4.30(1H，m，H-9α)，4.03(1H，m，H-9β)，3.87(3H，s，2′-OCH3)，3.86(3H，s，2-OCH3)，3.67(1H，m，H-8′)，3.36(1H，d，J=3.9 Hz，H-8)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：147.5(C-1)，149.2(C-2)，110.6(C-3)，132.4(C-4)，119.5(C-5)，116.2(C-6)，85.1(C-7)，51.0(C-8)，179.7(C-9)，148.2(C-1′)，149.4(C-2′)，110.7(C-3′)，133.2(C-4′)，119.8(C-5′)，116.4(C-6′)，87.2(C-7′)，54.5(C-8′)，73.8(C-9′)，56.4(2-OCH3)，56.5(2′-OCH3)。以上数据与文献[3]报道基本一致，故鉴定为巴拉诺酚B。

化合物3：不定形粉末(甲醇)，分子式C18H22O9，ESI-MSm/z：383.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.69(1H，d，J=15.9 Hz，H-3′)，7.20(1H，s，H-5′)，7.04(1H，d，J=8.2 Hz，H-9′)，6.76(1H，d，J=8.2 Hz，H-8′)，6.45(1H，d，J=15.9 Hz，H-2′)，4.82(1H，dd，J=3.1，2.5 Hz，H-4)，4.22～4.31(2H，m，H-3，5)，3.86(3H，s，6′-OCH3)，3.74(3H，s，7-OCH3)，2.00～2.23(4H，m，H-2，6)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：78.6(C-1)，38.4(C-2)，65.8(C-3)，76.4(C-4)，69.0(C-5)，42.2(C-6)，175.7(C-7)，168.9(C-1′)，111.8(C-2′)，147.1(C-3′)，127.9(C-4′)，115.7(C-5′)，150.6(C-6′)，149.4(C-7′)，116.5(C-8′)，124.1(C-9′)，52.9(-OCH3-7)，56.5(-OCH3-6′)。以上数据与文献[4]报道基本一致，故鉴定为4-O-阿魏酸-奎尼酸甲酯。

化合物4：不定形粉末(甲醇)，分子式C32H42O14，ESI-MSm/z：651.3[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.61(1H，d，J=15.9 Hz，H-7‴)，7.14(1H，d，J=1.6 Hz，H-2‴)，7.00(1H，dd，J=8.2，1.6 Hz，H-6‴)，6.79(1H，d，J=8.2 Hz，H-5‴)，6.76(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.68(1H，d，J=1.6 Hz，H-2)，6.61(1H，dd，J=8.2，1.6 Hz，H-6)，6.38(1H，d，J=15.9 Hz，H-8‴)，5.17(1H，d，J=1.9 Hz，H-1″)，4.50(1H，dd，J=11.9，2.3 Hz，H-6′)，4.33(1H，d，J=7.9 Hz，H-1′)，4.00(1H，dd，J=9.1，2.8 Hz，H-5″)，3.91(1H，dd，J=3.5，1.8 Hz，H-2″)，3.85(3H，s，3‴-OCH3)，3.78(1H，m，H-7)，3.74(3H，s，4-OCH3)，3.71(1H，d，J=3.3 Hz，H-3″)，3.70(1H，d，J=3.4 Hz，H-5′)，2.79(2H，t，J=7.5 Hz，H-8)，1.24(3H，d，J=6.2 Hz，H-6″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：132.7(C-1)，112.8(C-2)，147.5(C-3)，147.1(C-4)，117.0(C-5)，121.2(C-6)，72.3(C-α)，36.7(C-β)，56.5(-OMe)，104.4(C-1′)，75.4(C-2′)，84.1(C-3′)，70.6(C-4′)，75.7(C-5′)，64.7(C-6′)，102.8(C-1″)，72.4(C-2″)，72.4(C-3″)，74.0(C-4″)，70.1(C-5″)，17.9(C-6″)，127.7(C-1‴)，111.7(C-2‴)，149.4(C-3‴)，150.6(C-4‴)，116.5(C-5‴)，124.3(C-6‴)，115.3(C-α′)，147.3(C-β′)，169.1(C-γ′)，56.4(-OCH3)。以上数据与文献[5]报道基本一致，故鉴定为异地黄苷。

化合物5：不定形粉末(甲醇)，分子式C27H36O13，ESI-MSm/z：569.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.08(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，7.11(1H，d，J=8.9 Hz，H-5)，6.91(1H，dd，J=8.9，1.8 Hz，H-6)，4.94(1H，d，J=5.3 Hz，H-7)，4.23(1H，m，H-8)，3.55(1H，dd，J=12.0，3.0 Hz，Ha-9)，3.89(1H，m，Hb-9)，6.72(2H，s，H-2′，6′)，6.55(1H，d，J=15.9 Hz，H-7′)，6.31(1H，dt，J=11.6，5.6 Hz，H-8′)，4.85(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，4.22(2H，dd，J=5.6，1.4 Hz，H-9′)，3.84(3H，s，3-OCH3)，3.81(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.88(1H，m，Ha-6″)，3.68(1H，m，Hb-6″)，3.45～3.51(4H，m，H-2″，3″，4″，5″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：137.6(C-1)，112.5(C-2)，150.5(C-3)，147.3(C-4)，117.7(C-5)，120.8(C-6)，73.8(C-7)，87.3(C-8)，62.5(C-9)，134.8(C-1′)，105.0(C-2′)，154.6(C-3′)，136.4(C-4′)，154.6(C-5′)，105.0(C-6′)，131.4(C-7′)，129.9(C-8′)，63.6(C-9′)，56.7(-OCH3-3)，56.7(-OCH3-3′)，56.7(-OCH3-5′)，103.0(C-1″)，74.8(C-2″)，78.4(C-3″)，71.4(C-4″)，77.9(C-5″)，63.6(C-6″)。以上数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定为7α-柑橘B。

化合物6：不定形粉末(甲醇)，分子式C27H36O13，ESI-MSm/z：569.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.07(1H，d，J=1.9 Hz，H-2)，7.12(1H，d，J=8.9 Hz，H-5)，6.92(1H，dd，J=8.9，1.9 Hz，H-6)，4.94(1H，d，J=5.3 Hz，H-7)，4.23(1H，m，H-8)，3.56(1H，dd，J=12.0，3.5 Hz，Ha-9)，3.89(1H，m，Hb-9)，6.72(2H，s，H-2′，6′)，6.53(1H，d，J=15.8 Hz，H-7′)，6.31(1H，dt，J=11.0，5.0 Hz，H-8′)，4.86(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，4.22(2H，dd，J=5.7，1.2 Hz，H-9′)，3.84(3H，s，3-OCH3)，3.78(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.88(1H，m，Ha-6″)，3.68(1H，m，Hb-6″)，3.43～3.52(4H，m，H-2″，3″，4″，5″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：137.6(C-1)，112.5(C-2)，150.5(C-3)，147.2(C-4)，117.7(C-5)，120.8(C-6)，74.9(C-7)，87.3(C-8)，61.5(C-9)，134.8(C-1′)，105.0(C-2′)，154.6(C-3′)，136.4(C-4′)，154.6(C-5′)，105.0(C-6′)，131.4(C-7′)，129.9(C-8′)，63.6(C-9′)，56.7(3-OCH3)，56.7(3′-OCH3)，56.7(5′-OCH3)，103.0(C-1″)，74.8(C-2″)，78.2(C-3″)，71.4(C-4″)，77.8(C-5″)，62.5(C-6″)。以上数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定为7β-柑橘B。

化合物7：不定形粉末(甲醇)，分子式C26H28O13，ESI-MSm/z：549.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：8.12(1H，s，H-2)，7.38(2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′)，6.84(2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′)，6.76(1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.58(1H，d，J=1.9 Hz，H-6)，3.89(1H，d，J=2.4 Hz，Api-H-2)，3.56(1H，s，Api-H-5)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：154.7(C-2)，124.5(C-3)，182.6(C-4)，163.4(C-5)，101.8(C-6)，164.7(C-7)，96.1(C-8)，158.6(C-9)，108.3(C-10)，123.2(C-1′)，131.4(C-2′)，116.3(C-3′)，158.9(C-4′)，116.3(C-5′)，131.4(C-6′)，102.3(C-1″)，74.8(C-2″)，78.0(C-3″)，71.7(C-4″)，77.2(C-5″)，69.0(C-6″)，111.1(C-1‴)，78.2(C-2‴)，80.5(C-3‴)，75.0(C-4‴)，65.6(C-5‴)。以上数据与文献[7]报道基本一致，故鉴定为金雀异黄素7-O-β-D-阿哌呋喃磺酰基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10：不定形粉末(甲醇)，分子式C21H20O12，ESI-MSm/z：465.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.20(1H，d，J=1.5 Hz，H-6)，6.39(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，7.86(1H，d，J=1.4 Hz，H-2′)，6.87(1H，d，J=8.1 Hz，H-5′)，7.55(1H，dd，J=1.5，8.1 Hz，H-6′)，5.21(1H，d，J=8.1 Hz，H-1″)；13C-NMR(100 MHz, CD3OD)δ：158.3(C-2)，135.7(C-3)，179.4(C-4)，162.8(C-5)，100.0(C-6)，165.9(C-7)，94.9(C-8)，159.0(C-9)，105.7(C-10)，123.3(C-1′)，116.2(C-2′)，145.8(C-3′)，149.8(C-4′)，117.8(C-5′)，123.0(C-6′)，104.6(C-1″)，75.8(C-2″)，78.1(C-3″)，71.2(C-4″)，78.3(C-5″)，62.6(C-6″)。以上数据与文献[9]报道基本一致，故鉴定为异槲皮素。

化合物11：不定形粉末(甲醇)，分子式C27H30O16，ESI-MSm/z：611.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.87(1H，d，J=2. 1 Hz，H-2′)，7.60(1H，dd，J=8.5，2.1 Hz，H-6′)，6.98(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，6.41(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.10(1H，d，J=7.6 Hz，Glc-H-1)，4.52(1H，d，J=1.2 Hz，Rha-H-1)，1.19(3H，d，J=6.2 Hz，Rha-H-6)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：158.5(C-2)，135.9(C-3)，179.5(C-4)，162.9(C-5)，100.0(C-6)，166.2(C-7)，94.9(C-8)，158.9(C-9)，105.6(C-10)，123.1(C-1′)，117.7(C-2′)，145.8(C-3′)，149.8(C-4′)，116.1(C-5′)，123.6(C-6′)，106.0(C-1″)，73.1(C-2″)，75.1(C-3″)，70.2(C-4″)，75.7(C-5″)，67.3(C-6″)，101.9(C-1‴)，72.1(C-2‴)，72.3(C-3‴)，73.9(C-4‴)，69.7(C-5‴)，18.0(C-6‴)。以上数据与文献[10]报道基本一致，故鉴定为槲皮素3-O-(6″-O-α-鼠李糖-β-半乳吡喃糖苷)。

化合物12：不定形粉末(甲醇)，分子式C21H20O10，ESI-MSm/z：433.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：4.90(1H，d，J=9.6 Hz，Glc-H-1″)，6.45(1H，s，H-8)，6.50(1H，s，H-3)，6.88(1H，d，J=8.7 Hz，H-5′)，7.33(2H，m，H-6′，H-2′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：166.2(C-2)，105.2(C-3)，184.0(C-4)，162.0(C-5)，109.1(C-6)，164.9(C-7)，95.3(C-8)，158.7(C-9)，103.9(C-10)，123.5(C-1′)，117.0(C-2′)，147.0(C-3′)，151.0(C-4′)，114.2(C-5′)，120.4(C-6′)，75.3(C-1″)，71.8(C-2″)，80.1(C-3″)，72.6(C-4″)，82.6(C-5″)，62.9(C-6″)。以上数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定为异荭草苷。

化合物13：不定形粉末(甲醇)，分子式C21H20O11，ESI-MSm/z：449.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.54(1H，s，H-3)，6.49(1H，s，H-6)，7.39(1H，brs，H-2′)，6.89(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，7.37(1H，d，J=8.0 Hz，H-6′)，4.90(1H，d，J=10.1 Hz，H-1″)，4.15(1H，t-like，J=8.0 Hz，H-2″)，3.48(1H，t-like，J=8.8 Hz，H-3″)，3.50(1H，t-like，J=8. 8 Hz，H-4″)，3.42(1H，d，J=4.4 Hz，H-5″)，3.89(1H，d，J=8.0 Hz，H-6″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：166.3(C-2)，103.9(C-3)，184.0(C-4)，158.8(C-5)，95.3(C-6)，165.3(C-7)，109.3(C-8)，162.0(C-9)，105.1(C-10)，123.6(C-1′)，114.2(C-2′)，147.1(C-3′)，151.1(C-4′)，116.8(C-5′)，120.3(C-6′)，75.3(C-1″)，72.6(C-2″)，80.2(C-3″)，71.8(C-4″)，82.6(C-5″)，62.8(C-6″)。以上数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定为5,7,3′,4′-四羟基-8-C-β-D-葡萄糖黄酮碳苷。

化合物14：不定形粉末(甲醇)，分子式C23H24O10，ESI-MSm/z：461.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.38(1H，d，J=8.6 Hz，H-5)，6.62(1H，dd，J=8.6，1.9 Hz，H-6)，6.73(1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，5.1(1H，d，J=7.4 Hz，H-1″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：168.6(C-2)，114.0(C-3)，176.3(C-4)，132.4(C-5)，111.4(C-6)，158.2(C-7)，102.6(C-8)，163.5(C-9)，112.7(C-10)，86.2(C-11)，39.2(C-12)，127.9(C-1′)，131.9(C-2′)，115.8(C-3′)，157.3(C-4′)，115.8(C-5′)，131.9(C-6′)，102.2(C-1″)，74.7(C-2″)，78.7(C-3″)，71.5(C-4″)，78.4(C-5″)，62.7(C-6″)。以上数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定为小茴香素葡萄糖。

化合物15：不定形粉末(甲醇)，分子式C9H8N2O3，ESI-MSm/z：193.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.76(1H，s，H-2)，7.10(1H，s，H-5)，6.19(1H，d，J=9.4 Hz，H-7)，7.85(1H，d，J=9.4 Hz，H-8)，3.90(3H，s，3-OCH3)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：104.0(C-2)，147.3(C-3)，109.9(C-5)，164.2(C-6)，112.3(C-7)，146.2(C-8)，151.6(C-9)，153.6(C-10)，56.8(3-OCH3)。以上数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定为木黄酮。

化合物16：不定形粉末(甲醇)，分子式C13H14N2O2，ESI-MSm/z：231.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：4.72(1H，d，J=6.2 Hz，H-1)，4.01(1H，dd，J=4.5，12.0 Hz，H-3)，3.04(1H，m，H-4)，7.48(1H，d，J=7.7 Hz，H-5)，7.05(1H，t，J=7.2 Hz，H-6)，7.14(1H，t，J=7.2 Hz，H-7)，7.34(1H，d，J=7.7 Hz，H-8)，3.45(1H，dd，J=4.5，15.9 Hz，H-4a)，1.75(3H，d，J=6.2 Hz，10-CH3)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：51.2(C-1)，59.5(C-3)，24.3(C-4)，107.7(C-4a)，127.5(C-4b)，119.2(C-5)，120.6(C-6)，123.4(C-7)，112.3(C-8)，138.6(C-8a)，131.3(C-9a)，17.2(C-10)，173.5(C-11)。以上数据与文献[9]报道基本一致，故鉴定为1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸。

化合物17：不定形粉末(甲醇)，分子式C20H27NO11，ESI-MSm/z：458.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.88(1H，s，H-2)，7．44(3H，m，H-5，6，7)，7．60(2H，m，H-4，8)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：135.1(C-1)，129.3(C-2)，130.1(C-3)，131.0(C-4)，130.1(C-5)，129.3(C-6)，70.3(C-7)，118.8(C-8)，103.0(C-1′)，74.8(C-2′)，78.0(C-3′)，71.7(C-4′)，77.9(C-5′)，70.0(C-6′)，105.0(C-1″)，75.3(C-2″)，77.8(C-3″)，71.5(C-4″)，77.7(C-5″)，62.8(C-6″)。以上数据与文献[15]报道基本一致，故鉴定为苦杏仁苷。

化合物18：不定形粉末(甲醇)，分子式C14H16N2O3，ESI-MSm/z：261.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.06(1H，s，H-2)，7.09(1H，dd，J=8.1，1.0 Hz，H-6)，7.3(1H，d，J=8.1 Hz，H-7)，4.71(1H，dd，J=7.8，5.9 Hz，H-11)，3.27(1H，dd，J=14.6，3.7 Hz，H-10a)，3.14(1H，dd，J=14.6，7.8 Hz，H-10b)，3.64(3H，s，H-CH3O)，1.90(3H，s，H-AC)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：124.4(C-2)，110.8(C-3)，119.1(C-4)，119.8(C-5)，122.5(C-6)，112.3(C-7)，128.8(C-8)，138.1(C-9)，28.5(C-10)，55.0(C-11)，174.1(C-12)，52.7(C-OCH3)，173.2(C-Ac-1)，22.4(C-Ac-2)。以上数据与文献[16]报道基本一致，故鉴定为N-乙酰色氨酸甲酯。

化合物19：不定形粉末(甲醇)，分子式C14H14N2O2，ESI-MSm/z：243.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.79(1H，brd，J=8.6 Hz，H-11)，7.12(1H，d，J=8.6 Hz，H-12)，6.79(1H，brs，H-9)，4.97(1H，t-like，J=7.4 Hz，H-3)，3.02～3.10(1H，m，H-5a)，4.37～4.42(1H，m，H-5b)，2.71～2.80(2H，m，H-6)，2.62～2.66(1H，m，H-15b)，2.57～2.60(1H，m，H-14b)，2.40～2.46(1H，m，H-15a)，1.87～1.93(1H，m，H-14a)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：135.6(C-2)，56.4(C-3)，38.9(C-5)，22.0(C-6)，107.0(C-7)，128.8(C-8)，103.4(C-9)，151.5(C-10)，112.2(C-11)，112.5(C-12)，133.0(C-13)，26.8(C-14)，32.6(C-15)，176.0(C-16)。以上数据与文献[17]报道基本一致，故鉴定为沙棘酰胺。

化合物20：不定形粉末(甲醇)，分子式C15H22O3，ESI-MSm/z：251.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.97(1H，d，J=9.8 Hz，H-1)，6.20(1H，d，J=9.8 Hz，H-2)，3.01(1H，d，J=14.4 Hz，H-6α)，2.54(1H，d，J=14.4 Hz，H-6β)，2.09(1H，ddd，J=14.0，14.0，4.7 Hz，H-8β)，1.90(3H，s，H-15)，1.73(1H，m，H-9)，1.66(1H，m，H-8)，1.64(1H，m，H-9)，1.29(6H，s，H-12，H-13)，1.24(3H，s，H-14)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：159.7(C-1)，126.5(C-2)，188.5(C-3)，132.4(C-4)，162.7(C-5)，34.2(C-6)，75.9(C-7)，26.9(C-8)，34.4(C-9)，41.6(C-10)，80.0(C-11)，24.8(C-12)，25.0(C-13)，23.5(C-14)，10.8(C-15)。以上数据与文献[18]报道基本一致，故鉴定为canusesnol A。

化合物21：不定形粉末(甲醇)，分子式C12H22O12，ESI-MSm/z：359.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.10(1H，d，J=3.7 Hz，H-1)，4.47(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：94.0(C-1)，73.0(C-2)，76.3(C-3)，78.0(C-4)，78.1(C-5)，62.9(C-6)，98.2(C-1′)，73.9(C-2′)，74.9(C-3′)，71.8(C-4′)，71.9(C-5′)，62.8(C-6′)。以上数据与文献[19]报道基本一致，故鉴定为麦芽糖。

化合物22：不定形粉末(甲醇)，分子式C10H16O6，ESI-MSm/z：233.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：4.21(2H，d，J=7.1 Hz，H-2′)，3.65(6H，s，H-6，7)，2.94(2H，d，J=15.3 Hz，H-2a，4a)，2.79(2H，d，J=15.3 Hz，H-2b，4b)，1.27(3H，d，J=7.1 Hz，H-3′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：171.8(C-1)，44.3(C-2)，74.6(C-3)，44.3(C-4)，171.8(C-5)，52.4(C-6)，52.4(C-7)，174.6(C-1′)，63.0(C-2′)，14.4(C-3′)。以上数据与文献[20]报道基本一致，故鉴定为3-羧乙基-3-羟基戊二酸1,5-二甲酯。

化合物23：不定形粉末(甲醇)，分子式C29H38O6，ESI-MSm/z：505.3[M+Na]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.79(1H，dd，J=10.2，2.4 Hz，H-2)，6.68(1H，J=10.2，5.0，2.4 Hz，H-3)，3.22(1H，d，J=3.9 Hz，H-6)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：205.9(C-1)，129.3(C-2)，142.7(C-3)，38.2(C-4)，74.5(C-5)，57.8(C-6)，55.9(C-7)，40.1(C-8)，33.2(C-9)，53.2(C-10)，25.6(C-11)，30.6(C-12)，138.0(C-13)，137.3(C-14)，125.5(C-15)，126.8(C-16)，143.1(C-17)，129.6(C-18)，14.7(C-19)，45.3(C-20)，18.3(C-21)，72.2(C-22)，40.4(C-23)，74.4(C-24)，77.9(C-25)，97.9(C-26)，21.7(C-27)，24.4(C-28)。以上数据与文献[21]报道基本一致，故鉴定为withahisolide G。

化合物24：不定形粉末(甲醇)，分子式C34H48O10，ESI-MSm/z：639.3[M+Na]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.84(1H，dd，J=10.0，2.0 Hz，H-2)，6.92(1H，ddd，J=2.1，4.8，10.0 Hz，H-3)，5.77(1H，d，J=5.0 Hz，H-6)，4.62(1H，d，J=11.2 Hz，H-27a)，4.50(1H，dt，J=3.3，13.2 Hz，H-22)，4.45(1H，d，J=11.2 Hz，H-27b)，4.32(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.80(1H，dd，J=5.8，8.4 Hz，H-7)，3.36(1H，m，H-4)，2.92(1H，dd，J=4.6，21.6 Hz，H-4)，2.56(1H，m，H-23)，2.20(1H，dd，J=3.3，18.3 Hz，H-23)，2.12(3H，s，H-28)，1.22(3H，s，H-19)，1.04(1H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.77(3H，s，H-18)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：205.7(C-1)，127.6(C-2)，147.7(C-3)，34.4(C-4)，141.6(C-5)，128.4(C-6)，64.8(C-7)，36.4(C-8)，40.5(C-9)，51.0(C-10)，24.6(C-11)，40.8(C-12)，43.6(C-13)，53.2(C-14)，25.0(C-15)，28.2(C-16)，52.2(C-17)，12.3(C-18)，18.8(C-19)，39.5(C-20)，13.8(C-21)，80.2(C-22)，30.8(C-23)，160.4(C-24)，123.6(C-25)，168.6(C-26)，63.6(C-27)，20.8(C-28)，104.0(C-1′)，75.0(C-2′)，78.0(C-3′)，71.6(C-4′)，78.0(C-5′)，62.8(C-6′)。以上数据与文献[22]报道基本一致，故鉴定为daturataturin A。

化合物25：不定形粉末(甲醇)，分子式C28H38O7，ESI-MSm/z：509.3[M+Na]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.73(1H，dd，J=10.2，2.4 Hz，H-2)，6.63(1H，ddd，J=10.2，5.1，2.4 Hz，H-3)，3.01(1H，d，J=3.8 Hz，H-6)，3.95(1H，brs，H-12)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：206.0(C-1)，129.5(C-2)，142.4(C-3)，38.0(C-4)，74.9(C-5)，57.3(C-6)，57.1(C-7)，37.4(C-8)，29.9(C-9)，52.2(C-10)，30.6(C-11)，73.8(C-12)，48.1(C-13)，45.0(C-14)，24.1(C-15)，28.0(C-16)，44.9(C-17)，12.9(C-18)，15.2(C-19)，40.7(C-20)，12.2(C-21)，80.2(C-22)，30.6(C-23)，160.0(C-24)，126.5(C-25)，168.6(C-26)，57.1(C-27)，20.1(C-28)。以上数据与文献[23]报道基本一致，故鉴定为withastramonolide。

化合物26：不定形粉末(甲醇)，分子式C18H19NO4，ESI-MSm/z：314.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：2.73(2H，t，J=7.4 Hz，H-2)，6.72(2H，d，J=8.2 Hz，H-5，H-7)，6.78(1H，d，J=8.2 Hz，H-8′)，6.98(1H，d，J=l.5 Hz，H-5′)，6.99(1H，dd，J=8.2，1.5 Hz，H-9′)，7.03(2H，d，J=8.4 Hz，H-4，H-8)，7.43(1H，d，J=15.6 Hz，H-3′)，7.43(1H，d，J=15.6 Hz，H-2′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：42.6(C-1)，35.8(C-2)，131.4(C-3)，130.8(C-4)，116.4(C-5)，157.0(C-6)，116.3(C-7)，130.8(C-8)，169.2(C-1′)，118.2(C-2′)，142.0(C-3′)，128.3(C-4′)，111.6(C-5′)，149.3(C-6′)，149.8(C-7′)，116.5(C-8′)， 123.3(C-9′)，56.4(-OCH3)。以上数据与文献[24]报道基本一致，故鉴定为阿魏酰酪胺。

化合物27：不定形粉末(甲醇)，分子式C17H17NO3，ESI-MSm/z：284.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.05(1H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.71(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，2.74(2H，t，J=7.5 Hz，H-7)，3.45(2H，t，J=7.5 Hz，H-8)，7.39(2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′)，6.78(2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′)，7.44(1H，d，J=15.7 Hz，H-7′)，6.38(1H，d，J=15.7 Hz，H-8′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：131.4(C-1)，130.8(C-2)，116.3(C-3)，157.0(C-4)，116.3(C-5)，130.8(C-6)，35.9(C-7)，42.6(C-8)，127.8(C-1′)，130.6(C-2′)，116.8(C-3′)，160.6(C-4′)，116.8(C-5′)，130.6(C-6′)，141.8(C-7′)，118.6(C-8′)，169.3(C-9′)。以上数据与文献[25]报道基本一致，故鉴定为N-(E)-p-coumaroyltyramine。

4 抗炎活性评价

参照文献[26]，检测化合物1～27对LPS诱导的RAW264.7炎症细胞NO生成的影响。除空白组外，其余各组加入100 μL含2 μg/mL LPS的DMEM培养基，37 ℃、5%CO2孵育24 h后，空白组和LPS模型组加入100 μL DMEM培养基，其他各组加入100 μL含不同质量浓度(5、25、50、100、200 μg/mL)药物的DMEM培养基，地塞米松(Dexamethasone，DXM)作为阳性药，37 ℃、5%CO2孵育2 h。培养结束后，取上清100 μL转至干净96孔板中，加入Griess试剂A液、B液各50 μL，避光显色30 min，用酶标仪测各孔540 nm波长处光密度(OD)值，重复3次，计算IC50值，见表1。结果表明，化合物1、3～4、6～11、13～15、18、20、22～27对NO的抑制作用较明显。

表1 各化合物对LPS诱导的RAW264.7炎症细胞中NO生成的影响

5 结论

本实验对假酸浆果乙醇提取物的化学成分进行研究，并利用LPS诱导的RAW264.7炎症细胞模型评价各化合物的抗炎活性，以上结果丰富了对假酸浆果化学成分的认知，可为其药效物质基础阐明及药用开发与资源利用提供依据。