交泰丸组分配伍改善小鼠胰岛素瘤B细胞脂质沉积的机制研究

唐悦恒 赵莉 邹欣 徐丽君 陆付耳 董慧

摘要 目的：研究交泰丸中主要活性成分小檗碱（BBR）、肉桂酸（CA）及其配伍（BBR/CA）对软脂酸（PA）诱导的NIT-1胰岛B细胞内脂质沉积的影响。方法：将细胞在PA的培养基中培养24 h，建立高脂诱导的细胞内脂肪沉积模型。分为模型组、BBR组、CA组、BBR/CA组、二甲双胍（Met）组，分别给予相应药物干预，另设对照组。油红O染色法评估細胞内脂肪沉积情况;酶法检测细胞内三酰甘油（TG）含量;使用Western Blotting和实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）及其下游脂肪生成和脂肪酸氧化基因的表达水平，包括脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶（p-ACC）、肉碱酰转移酶-1（CPT-1）、固醇调节元件结合蛋白（SREBP-1c）。结果：PA诱导使NIT-1胰岛B细胞中脂肪沉积明显增加，TG含量显著升高，AMPK蛋白及其下游靶标（如p-ACC、CPT-1等）表达显著降低。同时，AMPK下游脂肪生成基因包括SREBP-1c mRNA、FAS和ACC蛋白表达显著增加。BBR单药和BBR/CA配伍处理优于CA单药，可显著逆转NIT-1胰岛B细胞中上述基因表达水平的变化。结论：在体外，交泰丸活性组分配伍可减少高脂诱导的NIT-1胰岛B细胞内脂肪沉积，其机制可能与减少脂肪合成和增加脂肪氧化有关。

关键词 交泰丸;小檗碱;肉桂酸;NIT-1胰岛B细胞;脂肪

Abstract Objective：To investigate the effects of berberine（BBR） and cinnamic acid（CA），the main active compounds of Jiaotai pills，and the combination of berberine and cinnamic acid（BBR/CA） on palmitic acid（PA）-induced lipid accumulation in NIT-1 pancreatic B cells.Methods：Cells were incubated in culture medium containing PA for 24 hours to establish a model of lipid accumulation induced by high fat.Then treatments with BBR，CA，the combination of BBR and CA（BBR/CA） and Metformin（Met） were performed respectively，and a control group was set up.Intracellular lipid accumulation was assessed by Oil Red O staining and TG content was measured by enzymatic assay.The expression of adenosine monophosphate-activated protein kinase（AMPK） protein and its downstream lipogenic and fatty acid oxidation genes，including fatty acid synthase（FAS），acetyl-CoA carboxylase（ACC），phosphorylation acetyl-CoA carboxylase（p-ACC），carnitine acyl transferase 1（CPT-1） and sterol regulatory element binding protein 1c（SREBP-1c） were determined by Western blot or real time polymerase chain reaction（RT-PCR）.Results：PA induced an obvious lipid accumulation and a significant increase in intracellular TG content in NIT-1 pancreatic B cells.PA also induced a remarkable decrease in AMPK protein expression and its downstream targets such as p-ACC and CPT-1.Meanwhile，AMPK downstream lipogenic genes，including SREBP-1c mRNA，FAS and ACC protein expressions，were increased significantly.Treatments with BBR and BBR/CA，superior to CA，significantly reversed the above genes changes in NIT-1 pancreatic B cells.Conclusion：It can be concluded that in vitro，the active compounds of Jiaotai pills inhibits PA-induced lipid accumulation by decreasing lipogenesis and increasing lipid oxidation in NIT-1 pancreatic B cells.

Keywords Jiaotai pills; Berberine; Cinnamic Acid; NIT-1 pancreatic B cells; Lipid

中图分类号：R587.1文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.19.002

糖尿病（Diabetes Mellitus，DM）是一种由胰岛素分泌缺陷和（或）胰岛素功能缺陷引起的以慢性高血糖为特征的代谢性疾病[1]。根据国际糖尿病联盟（International Diabetes Federation，IDF）報告，2019年全球约有4.63亿成年人患有DM，预计到2045年这一数字将达到7亿[2]。而中国是世界上DM患者数量最多的国家，发病率高达11.2%[3]。DM严重威胁人类健康，其并发症同样给家庭和社会带来沉重负担，相关医疗支出巨大，防控形势严峻，因此，必须加强对其进行综合管理和治疗。

高脂血症是一组以血液中脂质过多为特征的代谢性疾病，随着肥胖症的全球流行，其患病率也在不断增加[4]。游离脂肪酸（Free Fatty Acid，FFA）在生理状况下可以转化成三酰甘油（Triglyceride，TG）和胆固醇酯，以脂滴的形式储存于脂肪细胞中[5]。已有大量研究结果证实，增加的FFA水平的升高会诱导胰岛素抵抗和胰腺B细胞功能障碍，并最终导致2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus，T2DM）的发生发展[6-8]。先前的研究结果还证实，可以通过减少胰岛中的脂肪生成和增加脂质氧化来减少脂质沉积，从而达到减少胰岛B细胞凋亡的目的[9]。因此，减少胰岛B细胞中的脂肪沉积可能成为治疗T2DM的新的研究方向。

交泰丸，起源于明代韩懋的《韩氏医通》一书，由黄连和肉桂两味药组成。方中黄连大苦大寒，清降心火以下交肾水;肉桂辛甘大热，温肾阳蒸肾水上济于心，两药配伍，一寒一热，一阴一阳，相反相成，可使肾水与心火升降协调，彼此交通，是主治心肾不交之不寐证的经典方剂。本课题组经过多年临床实践已经发现其显著的降糖效果。进一步的动物实验表明，交泰丸可减轻DM大鼠的高血糖、高脂血症，减少胰岛脂肪沉积[10-11]，其可能作用机制包括：1）减少肝脏、骨骼肌、心肌的脂肪沉积，改善胰岛素磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）通路信号转导障碍[12];2）减少胰腺脂肪沉积，胰岛细胞凋亡[13]。然而，关于交泰丸减少脂肪沉积的体外药理学研究尚未有报道。

体外的药理研究有条件易控、敏感性和特异性强、快捷迅速等诸多优点[14]。因此，在对药物进行各方面深入评价时，需要进行体外药理实验。为了提高配伍组方的科技含量，有人提出了有效组分配伍的新模式。小檗碱（Berberine，BBR），是一种从黄连中分离得到的生物碱，已被证实可以起到保护胰岛B细胞的作用，包括调节胰岛素分泌和抑制脂肪细胞凋亡，从而改善胰岛素抵抗，调节血糖血脂[15-17]。然而BBR对胰岛B细胞内脂质沉积的影响尚不明确。肉桂酸（Cinnamic Acid，CA），是肉桂代谢后的主要成分，其胰岛素释放特性已通过体内外实验得到证实[18]，但尚未有关于CA对胰岛B细胞脂质沉积的影响的研究。此外，BBR和CA对胰岛B细胞脂质沉积的协同作用亦未被研究。本研究旨在比较BBR、CA及其配伍对软脂酸诱导的NIT-1胰岛B细胞内脂质沉积的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞 小鼠NIT-1胰岛B细胞株（华中科技大学同济医学院基础医学院，货号：CL-0562）。

1.1.2 药物 盐酸小檗碱（Berberine，BBR，黄连素，纯度>98%）（四川蕲州市市郊植物提制，批号：110406），二甲双胍（深圳市中联制药有限公司，批号：1103078）。

1.1.3 试剂与仪器 肉桂酸（Cinnamic Acid，CA，Sigma公司，美国，货号：MK887111），软脂酸（Palmitic Acid，PA，Sigma公司，美国，货号：087K1877）和牛血清清蛋白（BSA，Sigma公司，美国，货号：041M18021V），南非胎牛血清（FBS）（Thermo公司，美国，货号：10091155）、DMEM高糖培养基（Thermo公司，美国，货号：11965092）、RMPI 1640培养基（Thermo公司，美国，货号：11875101），胰蛋白酶（武汉谷歌生物科技有限公司，货号：G4001），青链霉素（武汉谷歌生物科技有限公司，货号：G4003），MTT试剂盒（武汉谷歌生物科技有限公司，货号：G4101），三酰甘油检测试剂盒（长春汇力生物技术有限公司，货号：K068a），BCA法蛋白测定试剂盒（碧云天生物技术研究所，货号：P0012），肉碱脂酰转移酶-1（CPT-1）抗体（Abcam公司，英国，货号：ab234111），腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抗体（Abcam公司，英国，货号：ab32047），乙酰辅酶A羧化酶抗体（ACC，Abcam公司，英国，货号：ab45174），磷酸化乙酰辅酶A羧化酶（p-ACC）抗体（Abcam公司，英国，货号：ab68191），脂肪酸合成酶（FAS）抗体（GeneTex公司，美国，货号：GT1169），TRIzol试剂（TaKaRa公司，日本，货号：740955.50），PrimeScript RT试剂盒（TaKaRa公司，日本，货号：RR014B），SYBR Premix Ex Taq试剂盒（TaKaRa公司，日本，货号：639676）。CO2培养箱（上海一恒科学仪器有限公司，型号：BPN-80CRH），电热恒温水浴锅（上海齐欣科学仪器有限公司，型号：DKB-600B），恒温水平摇床（海门市其林贝尔仪器制造有限公司，型号：Orbital Shaker TS-1），生化分析仪（Roche公司，瑞士，型号：iMagic-M7），Odyssey双色红外荧光成像系统（Odyssey公司，美国，型号：LI-COR Odyssey），光学显微镜（Nikon公司，日本，型号：E100），核酸/蛋白分析仪（Thermo公司，美国，型号：NanoDrop ONEC），Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR System（Applied Biosystems公司，美国，型号：4376599）。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备

取90 mL 1640培养基、10 mL FBS和1 mL青链霉素，充分混匀得到1640完全培养基。将一定量的小鼠NIT-1胰岛B细胞接种于25 mL的培养瓶内，用配制好的完全培养基在37 ℃、5% CO2的培养箱中培养，2～3 d换液1次，当细胞生长至80%～90%时，进行传代或冻存。

弃掉NIT-1胰岛B细胞中原有的培养基，加入含0.5% BSA，0.25 mmol/L PA培养基，在培养箱中培养24 h，建立高脂诱导的NIT-1胰岛B细胞内脂肪沉积模型后将细胞分为对照组、模型组、小檗碱组、肉桂酸组、交泰丸组分配伍组（BBR/CA）和二甲双胍组。

1.2.2 干预方法

将处于对数生长期的NIT-1胰岛B细胞以1×105个/mL接种到96孔板中，待细胞融合按不同浓度梯度加入药物：1）PA：0.10、0.25、0.40、0.50 μmol/L;2）BBR：5、10、15、20、30、50、100 μmol/L;3）CA：50、100、200、300、500 μmol/L;4）Met：10、15、20、25、30、35、40 μmol/L。每组设置6个复孔，正常组和空白对照组分别加入等量未加药的细胞悬液和PBS，孵育24 h。向每孔加入MTT工作液50 μL，孵育4 h后弃掉液体，加入100 μL的DMSO，摇床振荡10 min后，用酶标仪测定490 nm波长各孔的吸光度。选择合适的药物干预浓度干预对应组别细胞，进行后续实验。

1.2.3 检测指标与方法

1.2.3.1 细胞内TG测定

将细胞按1×105个/mL种入6孔板，按对照组、模型组、小檗碱组、肉桂酸组、交泰丸组分配伍组（BBR/CA）和二甲双胍组的分组进行造模加药。孵育24 h后裂解各组细胞，以酶法检测细胞内TG含量。

1.2.3.2 油红O染色

如前所述对细胞进行分组造模加药。孵育24 h后用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗2遍，固定于10%甲醛中，加入油红染液染色1 h，使用光学显微镜观察并拍摄脂滴。

1.2.3.3 Western Blotting法检测

弃去含药培养基，用PBS洗涤2次后将细胞裂解提取蛋白，使用BCA法蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度，用Buffer给蛋白统一浓度。

配制10% SDS-PAGE凝胶，按40 μg的蛋白含量完成上樣，电泳完成后使用NC膜进行转膜。转膜后使用含5%脱脂奶粉或5% BSA的封闭液封闭1 h。在4 ℃下与一抗（AMPK、ACC、p-ACC、FAS、CPT-1）孵育过夜。TBST洗涤3次后，将膜与荧光标记的二抗在室温下避光孵育1 h。最后将膜在TBST中洗涤3次后使用Odyssey双色红外荧光成像系统进行扫描，用ImageJ软件分析条带灰度，以目的基因条带与内参基因β-actin的比值来表示蛋白的表达水平。

1.2.3.4 RT-PCR检测

采用TRIzol和氯仿提取细胞总RNA，使用核酸/蛋白分析仪检测所提取RNA的浓度和纯度。根据PrimeScript RT试剂盒说明将RNA逆转录为cDNA。使用Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR System，根据SYBR Premix Ex Taq试剂盒的说明依次加入cDNA、引物混合液和荧光试剂后设置RT-PCR程序：预变性95 ℃ 30 s，PCR 95 ℃、5 s，60 ℃、30 s。每个样本设置3个复孔，扩增结束后以2-△△Ct法计算mRNA的表达水平。

引物序列如下：β-actin：前引物：5′-CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC-3′;后引物：5′-ATGGAGCCACCGATCCACA-3′;SREBP-1c：前引物：5′-CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC-3′;后引物：5′-GAAGTCACTGTCTTGGTTGTTGATG-3′。

1.3 统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用单因素方差分析对各组数据进行比较，如果方差齐性用LSD-t检验，如果方差不齐性用Dunnett′s T3检验，以P<0.05为差异有统计学意义。使用GraphPad软件完成制图。

2 结果

2.1 各组药物及软脂酸对NIT-1胰岛B细胞生长抑制的影响

如前所述，用不同浓度PA、BBR、CA和Met干预NIT-1胰岛B细胞，孵育24 h后比较相邻2浓度细胞存活率间差值的差异（△D），将差异最大的浓度作为药物干预的合适浓度，最终选择0.25 mmol/L的PA、10 μmol/L的BBR、100 μmol/L的CA和35 μmol/L的Met供后续实验使用。

2.2 BBR、CA及其配伍对NIT-1胰岛B细胞内TG含量的影响

与对照组比较，PA诱导的模型组NIT-1胰岛B细胞内TG含量显著增加（P<0.01）;与模型组比较，小檗碱组、交泰丸组分配伍组和二甲双胍组细胞内TG含量均显著降低，而肉桂酸组细胞内TG含量差异无统计学意义（P>0.05）;单独给予BBR处理后细胞内TG含量与交泰丸组分配伍组比较差异无统计学意义（P>0.05），而肉桂酸组细胞内TG含量与交泰丸组分配伍组比较显著升高（P<0.05）。见图1A。

油红O染色的结果显示，与对照组比较，模型组细胞内脂滴数量明显增多;与模型组比较，小檗碱组和交泰丸组分配伍组细胞内的脂滴数量均显著减少，Met处理后脂滴数量同样减少，而单独给予CA处理后细胞内脂滴数量虽有所减少，但效果不如其他组明显。见图1B。

2.3 BBR、CA及其配伍对NIT-1胰岛B细胞AMPK及其下游脂肪生成基因表达的影响

与对照组比较，PA作用24 h后NIT-1胰岛B细胞内FAS和ACC蛋白表达显著增加而AMPK和p-ACC蛋白表达水平明显下降（P<0.01）。与模型组比较，小檗碱组、肉桂酸组、交泰丸组分配伍组和二甲双胍组细胞内FAS和ACC蛋白表达明显降低（P<0.01），AMPK和p-ACC蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与交泰丸组分配伍组比较，小檗碱组细胞AMPK蛋白表达显著升高（P<0.05），而小檗碱组和肉桂酸组细胞FAS蛋白表达均明显降低（P<0.05）。见图2。

2.4 BBR、CA及其配伍对NIT-1胰岛B细胞AMPK下游脂肪酸氧化基因表达的影响

经PA诱导后，NIT-1胰岛B细胞中CPT-1蛋白表达显著升高（P<0.05）。与模型组比较，小檗碱组、肉桂酸组、交泰丸组分配伍组和二甲双胍组细胞CPT-1蛋白表达均显著增加（P<0.01）。与交泰丸组分配伍组比较，单独给予BBR处理后细胞CPT-1蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05），单独给予CA处理后细胞内CPT-1蛋白表达显著降低（P<0.05），这或许证明CA可以增强NIT-1胰岛B细胞中的脂肪酸氧化。见图3。

2.5 各组NIT-1胰岛B细胞SREBP-1c mRNA表达的比较

与对照组比较，PA作用24 h后NIT-1胰岛B细胞SREBP-1c mRNA表达显著增加（P<0.01）。给予BBR、CA或BBR联合CA处理后NIT-1胰岛B细胞SREBP-1c mRNA表达显著降低（P<0.05，P<0.01），而Met处理后细胞内SREBP-1c mRNA的表达差异无统计学意义。与BBR/CA组比较，肉桂酸组细胞SREBP-1c mRNA表达显著增加（P<0.01），小檗碱组差异无统计学意义。

3 讨论

DM的发病率正在逐年上升，对人类健康的影响巨大，其带来的医疗保健费用也日益增长，给患者本身及其家庭以及社会带来沉重的负担。DM在中医学中属于消渴病范畴，正如《素问病机气宜保命集·卷下·消渴论》所记载的“上热故烦渴多饮，下寒故小便多出。本因下部肾水虚，而不能制其上焦心火，故上实热而下虚冷”，肾阳虚于下，心火亢于上，是消渴的重要病机[20]。由黄连和肉桂两味药所组成的交泰丸，一直以来是治疗心烦不寐、心悸不安、头晕耳鸣、腰酸遗精、五心烦热等心肾不交症状的经典方剂，其温肾清心、交通心肾的功效正切中消渴肾阳虚心火亢的基本病机。本课题组将交泰丸临床应用于T2DM患者的治疗发现，给予交泰丸治疗后，患者的睡眠质量得到明显改善，血糖也有不同程度的下降，血脂紊亂得到纠正。而许多动物实验结果同样表明，交泰丸及其单味药黄连、肉桂可有效治疗T2DM大鼠[10-11，21]，其降糖调脂的作用机制可能与降低肝脏、胰腺、骨骼肌和心肌TG含量，减少胰岛细胞凋亡有关[22-23]。

异位脂质堆积是指非脂肪组织中出现脂肪沉积，肝脏中的异位脂质堆积与肥胖、胰岛素抵抗和T2DM密切相关[24]。骨骼肌中过量的脂质堆积同样被认为与胰岛素抵抗的发生发展有关[24-25]。高脂饮食会引起循环中FFA水平升高，而长时间的FFA水平升高会引起B细胞内脂质沉积，最终导致B细胞损伤及功能下降。FFA能酯化为TG储存于体内各器官中：一方面，TG分解代谢时产生大量的脂酰辅酶A（CoA），其中一部分进行β氧化产能，更多的脂酰CoA进入非氧化的代谢途径，代谢产物可对B细胞产生脂毒性，诱导B细胞凋亡;另一方面，软脂酸CoA可与丝氨酸在丝氨酸神经酰胺转移酶的催化下，合成神经酰胺，后者激活核因子κB（NF-κB），进而使诱导型一氧化氮合酶（iNO）表达增加，NO合成增多，NO源性氧自由基过多，造成B细胞DNA的损伤，B细胞凋亡[26-27]。因此，可以通过减少细胞内脂肪沉积来减轻B细胞损伤，从而达到改善脂毒性和预防T2DM发展的目的。由于交泰丸可能具有减少胰岛细胞凋亡的作用，但中药成分复杂，因此我们选择黄连、肉桂各自的有效活性成分小檗碱和肉桂酸为研究对象，通过体外药理学实验进一步探索交泰丸活性成分对NIT-1胰岛B细胞内脂肪沉积的影响。

本研究中，我们采用软脂酸作用24 h诱导NIT-1胰岛B细胞内脂肪沉积。结果显示细胞内TG含量升高，油红O染色也观察到细胞内脂滴明显增多，提示模型建立成功。给予BBR以及BBR/CA干预后，细胞内TG含量下降，脂滴明显减少，而CA干预使细胞内脂滴有一定程度的减少，细胞内TG含量下降，但与模型组比较，差异无统计学意义，以上结果提示BBR减少细胞内脂肪沉积作用优于CA。此外，交泰丸组分配伍组，即BBR/CA组降低细胞内TG含量作用并不优于BBR单药，这可能与二者配伍后有效浓度下降有关。全世建等[28]采用高效液相色谱法测定黄连和肉桂不同比例配伍后的5种有效成分小檗碱、药根碱、巴马亭、桂皮醛和肉桂酸的质量百分含量变化趋势，结果表明，黄连含量固定时，随着肉桂配伍含量增加，黄连中的生物碱含量比例下降;而随着肉桂含量增加，桂皮醛和肉桂酸含量未呈比例上升。本课题组前期研究同样证实，肉桂比例升高会降低黄连中小檗碱的溶出量;黄连比例越高，肉桂中肉桂醛、肉桂酸含量越低，这可能是由于黄连和肉桂配伍后，在煎煮过程中黄连中的生物碱与肉桂中的酚酸类成分产生沉淀所导致的[29-30]。

AMPK是脂肪组织中一个主要的能量感应器和调节器。AMPK的抑制与肥胖和DM等脂肪沉积障碍的发展有关，相反，AMPK的激活可以抑制脂肪生成并刺激脂肪酸氧化，导致细胞内脂质含量减少[31-32]。脂肪的累积取决于脂肪合成加再酯化和脂肪分解两方面，FAS和ACC是调控该过程的2个关键酶。An等[33]的研究显示，AMPK在脂肪酸代谢过程中有着重要作用，在一定程度上可以调控ACC的活性。此外，长链脂肪酸（Long Chain Fatty Acid，LCFA）氧化的调控在代谢性疾病的研究中引起了越来越多的关注，通过CPT-1在线粒体外膜运输是LCFA氧化的限速步骤，研究结果证实CPT-1是LCFA的氧化过程中必不可少的部分[34]。此外，肝脂质稳态是由一些核受体和转录因子密切调控的。SREBP-1c是刺激一些与脂肪合成相关的基因表达的转录调节因子，它可以连接脂肪合成基因包括固醇调节元件的启动区，如ACC和FAS，并且能够上调这些基因的表达[35-36]。Zhu等[37]的研究结果证实，SREBP-1c基因的表达水平与肝细胞内TG含量存在密切联系。

黄连及其有效成分BBR对DM的治疗效果已被证实有效，且BBR在治疗有血脂异常的T2DM患者时能兼顾有效性和安全性[38]。Shen等[16]研究发现，BBR可以减少胰岛B细胞内脂肪沉积，其可能机制是激活NIT-1细胞AMPK，同时引起其下游分子ACC磷酸化和FAS表达下降。本研究结果同样表明，BBR能激活NIT-1细胞AMPK蛋白的表达，降低脂肪生成基因ACC、FAS和SREBP-1c的表达，上调ACC的磷酸化水平，提示BBR可抑制细胞内脂肪合成。这一发现与Brusq等[39]的研究结果一致，后者表明BBR通过AMPK激活抑制HepG2细胞中的脂质合成。此外，BBR干预后，AMPK下游脂肪酸氧化基因CPT-1表达上调，提示BBR可增加细胞内脂肪氧化。这可能是BBR减少NIT-1胰岛B细胞内TG含量的原因之一。虽然本研究中没有检测p-AMPK蛋白的表达水平，但AMPK下游脂肪生成基因表达的减少和脂肪酸氧化基因的增强在一定程度上同样可以反映B细胞中的AMPK活化。

CA是肉桂在机体代谢后的主要效应成分。Qin等[40]发现肉桂提取物对SREBP-1c mRNA表达的抑制效果可能涉及小肠上皮细胞的胰岛素通路。本研究发现，CA与BBR一样能激活NIT-1胰岛B细胞AMPK的蛋白表达，降低脂肪生成基因ACC、FAS和SREBP-1c的表达，上调ACC的磷酸化水平，提示CA可抑制细胞内脂肪合成;CA干预可上调NIT-1胰岛B细胞CPT-1蛋白表达，提示CA可增加细胞内脂肪氧化。然而，CA减少细胞内脂质沉积的作用明显弱于BBR，且在增加AMPK蛋白表达和降低FAS蛋白表達方面，BBR单药似乎比交泰丸组方配伍更有效。似乎CA单药不能极大地抑制NIT-1胰岛B细胞中的脂肪生成过程。这些发现可能是给予CA干预后NIT-1胰岛B细胞内TG含量的降低与模型组比较差异无统计学意义的原因之一。此外，本研究并未观察到BBR和CA对PA诱导的细胞内脂肪沉积和细胞凋亡的协同作用;相反，BBR的作用很可能会因培养基中CA的存在而减弱，这需要后续实验进一步研究。

综上所述，我们的体外研究表明，在低浓度软脂酸存在下，交泰丸活性组分配伍和小檗碱单药可有效抑制NIT-1胰岛B细胞内脂肪沉积，其机制与增加AMPK的活性、减少脂肪合成以及增加脂肪酸氧化有关，这种抑制作用可以保护B细胞免受软脂酸诱导的脂毒性的损伤。而交泰丸活性组分配伍组并不明显优于小檗碱、肉桂酸单药组，其可能原因尚需进一步探讨。

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（2021-08-10收稿 責任编辑：王明）