PTEN、TIMP-1及XIAP在老年喉癌癌前病变中的表达及临床意义

陈建良，鲁慧文，蒋志云，刘燕美

喉癌的病变来源于喉黏膜上皮组织，是一种发生在头颈部的常见恶性肿瘤，以老年人最为多见[1]。据相关报道，喉癌的发病率占全身恶性肿瘤的2.1%[2]，而目前对喉癌的发病机制并未完全明确。喉癌早期无症状或症状不典型，因此不被患者所重视，发现时已到中晚期，再给予手术等治疗会严重影响患者生活质量及预后[3]。因此在喉癌癌前病变期行肿瘤标志物检测及诊断极为重要。既往文献显示，基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)与肿瘤细胞增殖呈负相关，第10同源染色体丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)作为具有磷酸酶活性的抑癌基因在喉癌癌前病变中呈低表达状态，而X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达上调[4-6]。基于此，本研究检测PTEN、TIMP-1及XIAP在老年喉癌癌前病变中的表达情况，并分析其临床意义，旨在为喉癌的早期诊断提供参考。

1 资料与方法

1.1临床资料 收集我院2018年4月—2020年4月收治的接受手术治疗的97例喉癌新鲜手术切除癌组织作为喉癌组，男59例，女38例，年龄49～77(65.26±5.96)岁；有淋巴结转移33例，无淋巴结转移64例。同时选取上述患者距肿瘤组织3 cm的癌旁正常组织作为癌旁组织组。纳入标准：均满足喉癌诊断标准[7]，经影像学及病理检查确诊；手术治疗前均未接受放、化疗；病历资料完整；癌旁组织均为正常黏膜；无凝血功能障碍。排除标准：合并其他系统恶性肿瘤或严重器质性疾病者；合并严重心血管疾病者；有活动性感染疾病者；认知丧失者；有自身免疫系统或血液系统疾病者。

1.2研究方法

1.2.1PTEN、TIMP-1及XIAP检测：采用免疫组织化学染色法检测PTEN、TIMP-1及XIAP表达情况。每例组织蜡块均切片4张，厚度约4 μm。PTEN、uPA、EZH2标本均经甲醛溶液固定，石蜡包埋、载玻片泡酸、高温灭菌及多聚赖氨酸涂片等处理。DAB显色剂显色，苏木素复染，乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。PTEN、TIMP-1及XIAP兔多克隆抗体均购自美国Epitomics公司。DAB显色剂及配套试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2.2判定标准：病理科专业医师在光学显微镜下随机观察5个视野，要求每个视野至少计数100个完整的肿瘤细胞。PTEN、TIMP-1及XIAP免疫组织化学染色阳性判定标准[8]：肿瘤细胞胞质或胞核中出现棕黄色或棕褐色颗粒，反之则为阴性。阳性细胞比例评分：≤5%为0分，5%～25%为1分，25%～50%为2分，50%～75%为3分，>75%为4分；染色强度评分：未染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。染色指数=阳性细胞比例评分+染色强度评分。染色指数>3分为阳性；染色指数≤3分为阴性。阳性率=阳性例数/总例数×100%。

1.3观察指标

1.3.1随访情况：对97例喉癌患者进行为期1年的随访。随访方式：来院复查及电话随访并统计1年内由喉癌导致死亡的人数。对比不同组织及生存、死亡组患者PTEN、TIMP-1、XIAP的表达情况。

1.3.2死亡相关影响因素：收集患者的病历资料，包括姓名、性别、年龄、有无淋巴结转移及肿瘤分化程度、浸润深度等。分析喉癌患者死亡的相关危险因素。

2 结果

2.1不同组织中PTEN、TIMP-1、XIAP表达情况 喉癌组织组PTEN、TIMP-1阴性表达率均高于癌旁组织组，XIAP阳性表达率高于癌旁组织组(P<0.05)。见表1。

表1 喉癌和癌旁组织中PTEN、TIMP-1、XIAP表达情况比较[例(%)]

2.2生存组与死亡组患者PTEN、TIMP-1、XIAP的表达情况 97例喉癌随访期间有29例死亡，病死率为29.90%。死亡组患者PTEN、TIMP-1阴性表达率高于生存组，XIAP阳性表达率高于生存组(P<0.05)。见表2。

表2 生存组与死亡组患者PTEN、TIMP-1、XIAP的表达情况比较[例(%)]

2.3喉癌患者死亡的相关因素分析 淋巴结转移、浆膜浸润、分化程度、PTEN阴性、TIMP-1阴性、XIAP阳性为喉癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05，P<0.01)。见表3。

表3 喉癌死亡的危险因素多因素Logistic回归分析

2.4PTEN、TIMP-1、XIAP单一检测及三者联合检测对老年喉癌癌前病变的预测价值 PTEN、TIMP-1、XIAP单一检测及三者联合检测的AUC分别为0.942、0.818、0.928、0.979。三者联合检测AUC大于PTEN、TIMP-1、XIAP单一检测，敏感度、特异度高于PTEN、TIMP-1、XIAP单一检测(P<0.05)。见图1和表4。

图1 PTEN、TIMP-1、XIAP单一检测及联合检测对老年喉癌癌前病变的预测价值ROC曲线

表4 PTEN、TIMP-1、XIAP单一检测及联合检测对老年喉癌癌前病变的预测价值

3 讨论

喉癌癌前病变是指临床表现具有恶变潜能的喉部病变，包括喉黏膜白斑病、喉角化病、喉乳头状瘤等临床症状、病理学特征和体征表现类似的疾病，组织病理学表现为上皮单纯增生和不典型增生[9]。既往文献报道，喉癌易发生侵袭和转移，是影响喉癌患者预后及生存的重要因素[10-11]。近年来除了喉部肿瘤以外的肿瘤治疗后总生存率均有所提高，喉部恶性肿瘤主要为喉癌，因此加强对喉癌癌前病变的检测，探索相关治疗方法，对提高喉癌患者生存率具有重要意义。

PTEN为第10同源染色体丢失性磷酸酶-张力蛋白基因，TIMP-1为基质金属蛋白酶抑制剂-1，XIAP为X-连锁凋亡抑制蛋白，ROC为受试者工作特征 既往文献报道，TIMP-1是活性最强的基质金属蛋白酶(MMPs)抑制剂。在正常细胞中TIMP-1表达比例处于平衡状态，对组织重建、血管形成等具有重要作用[12-13]。而当TIMP-1与MMPs比例失去平衡时，TIMP-1低表达会导致MMPs失活或不能活化，促进肿瘤侵袭和转移[14]。PTEN基因是近年来发现的具有磷酸酶活性的抑癌基因，可抑制丝裂原活化的蛋白激酶信号通路[15]。文献报道，乳腺癌、卵巢癌、胃癌、口腔鳞状细胞癌等多种恶性肿瘤中均存在PTEN基因缺失[16-17]，因此认为PTEN基因与恶性肿瘤发生、发展密切相关。本研究结果显示，喉癌组织中PTEN、TIMP-1阴性表达率高于癌旁组织，死亡组患者PTEN、TIMP-1阴性表达率高于生存组，进一步证实上述观点。

XIAP是近年发现的与细胞凋亡有关的蛋白。研究表明，细胞凋亡对于抑制肿瘤生成起着非常关键的作用，多数学者在卵巢癌、膀胱癌等肿瘤中均发现XIAP处于高表达状态[18-19]。本研究结果显示，XIAP在喉癌组织中高表达，且在喉癌患者中，死亡组患者XIAP阳性率表达高于生存组，与既往研究结果相符[20]。本研究发现，淋巴结转移、浆膜浸润、分化程度、PTEN阴性、TIMP-1阴性、XIAP阳性为喉癌患者死亡的独立危险因素，提示对喉癌癌前病变患者行PTEN、TIMP-1及XIAP检测对疾病的早期预测具有积极作用。基于此，笔者通过绘制ROC曲线发现，PTEN、TIMP-1、XIAP三者联合检测对老年喉癌癌前病变预测价值的AUC为0.979，敏感度为91.65%、特异度为92.45%，均高于各指标单一检测，提示三者联合检测比单一检测对老年喉癌癌前病变预后具有较高的判断价值。

综上所述，PTEN、TIMP-1及XIAP联合检测有助于老年人喉癌癌前病变的早期诊断。