MiR-146a、sLOX-1、HCY诊断妊娠期高血压疾病合并肾功能损害效果

郭陆晋 李逸群 郑 晖 张家荣

甘肃省定西市人民医院(743000)

据调查[1]我国妊娠妇女发生妊娠期高血压疾病几率为9.4%～10.4%，是造成孕产妇和新生儿死亡的重要因素。妊娠期高血压疾病的发生发展，对肾脏、心脏、肝脏及大脑造成严重损害[2]。尽早发现并及时干预对预防妊娠期高血压疾病早期肾损害有重要意义。有研究[3]指出，同型半胱氨酸(HCY)与高血压疾病早期肾损伤发病有一定相关性；miR-146a、可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)参与了高血压肾功能损害的发生发展[4-5]。但上述指标在妊娠期高血压合并肾功能损害中的作用机制研究报道较少，是否能准确反映肾脏功能损害尚不清楚。故本研究选取妊娠期高血压疾病患者与健康孕妇临床资料进行回顾性分析，探讨miR-146a、sLOX-1和HCY在诊断妊娠期高血压疾病合并肾功能损害的应用价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料

回顾性收集2019年3月—2021年3月本院诊治的119例妊娠孕妇临床资料，分为观察组(妊娠期高血压疾病，n=69)与对照组(健康孕妇，n=50)，观察组根据病情分为妊娠期高血压组(n=25)、子痫前期轻度组(n=25)、子痫前期重度组(n=19)；根据肌酐清除率(Ccr)分为Ccr<80ml/min组(n=35)与Ccr≥80ml/min组(n=34)。纳入标准：①符合相关诊治及子痫前期轻度与重度标准[6]；②孕周>20周；③单胎妊娠；④无原发性肾脏疾病。排除标准：①由其他疾病或药物引起的肾脏损害；②伴有自身免疫系统障碍；③合并严重糖尿病。本研究经本院伦理委员会审批。

1.2 miR-146a、sLOX-1和HCY检测

于患者入院3d内采集晨空腹静脉血。①miR-146a检测：提取miRNA，标本经紫外分光光度计检测吸光值，即吸光度比值为1.8～2.0，采用miRNA反转录试剂盒将miRNA反转录为cDNA，选择SYBR-Green荧光定量PCR检测试剂盒(美国赛默飞世尔科技有限公司)对血浆miR-146a进行荧光定量PCR检测；反应条件：预变性温度95℃ 10min，95℃ 5s，60℃ 60s，共进行40个循环，根据2-△△Ct法计算miR-146a相对表达量。引物序列miR-146a上游引物：CACGGACCTGAAGAACACTGG；下游引物：AGAAATGAAATTAGAACACACATCAATTCC。②酶联免疫吸附法检测sLOX-1和HCY，试剂盒由博研生物科技有限公司生产。

1.3 观察指标

收集119例妊娠孕妇的年龄、孕周、孕次、产次及miR-146a、sLOX-1、HCY资料两组比较。观察观察组不同特征患者miR-146a、sLOX-1、HCY水平，并分析3项指标与病情严重程度相关性，以及诊断妊娠期高血压疾病患者并发肾功能损害效能。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 一般资料比较

两组年龄、孕周、孕次、产次等无差异(P>0.05)。见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 miR-146a、sLOX-1、HCY水平比较

miR-146a、sLOX-1、HCY水平，观察组均高于对照组，且子痫前期重度组高于妊娠期高血压组和子痫前期轻度组，Ccr<80ml/min组高于Ccr≥80ml/min组(均P<0.05)。见表2。

表2 各组miR-146a、sLOX-1、HCY比较

2.3 miR-146a、sLOX-1、HCY相关性及与病情程度关系

Spearman相关性分析显示，miR-146a、sLOX-1与HCY正相关(r=0.803、0.748，均P<0.001)。miR-146a、sLOX-1、HCY与妊娠期高血压疾病程度正相关(r=0.886、0.474、0.875，均P<0.001)。

2.4 诊断效能分析

ROC曲线分析显示，miR-146a、sLOX-1、HCY联合诊断妊娠期高血压疾病患者并发肾功能损害效能最佳。见表3。

表3 miR-146a、sLOX-1、HCY诊断并发肾功能损害效能

3 讨论

早期肾损害为妊娠期高血压疾病主要并发症，可能是因妊娠期高血压发生时，全身血管痉挛，不仅会改变机体血流动力学，还会损伤内皮细胞，通过引起肾血管痉挛及降低肾脏血流量和肾小球滤过率，引起血清肌酐升高和损害肾功能[6]。以往临床针对肾功能损害常采用血清肌酐指标检测。但有研究表示其浓度会受多种因素的影响，当肾小球损伤不明显时，血清肌酐仍处于正常范围。基于此，寻找敏感度高、特异度高的指标评估妊娠期高血压疾病患者肾功能尤为重要。有研究[7]认为高血压肾损害的发生与多种基因密切关联，即认为微小RNA(miRNA)参与了高血压肾病的发生发展。基因生物学[8]证实，miR-146a参与了动脉粥样硬化和高血压肾病的病理生理过程。现有研究[9]表示，miR-146a是急性冠脉综合征的重要危险因素，既是评估动脉粥样硬化程度的重要指标，又是反映肾脏功能损害的特异性指标。

miR-146a在正常情况下相对表达量极低，但在高血压影响下会随血压水平升高而上调，可能与高血压引起血管内皮功能障碍有关。有研究[10]表示，miR-146a是高血压肾损害的一种保护性miRNA，其表达量增加能通过抑制溶血磷脂酶1升高小动脉中的一氧化氮水平，起到保护血管内皮和调节血压作用。但这一说法并未被证实。基于上述观点，本研究发现miR-146a在高血压肾损害病理进程中同样具有重要作用，即miR-146a表达量会随着肾功能损害程度的加重而上升，即A组的miR-146a高于B组。sLOX-1是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白，主要分布于血管丰富部位[11-12]。正常情况下含量较低，但当受到炎性细胞因子、蛋白激酶C、血管紧张素Ⅱ及氧化应激等诱导时表达量上升。本研究显示， sLOX-1水平Ccr<80ml/min组高于Ccr≥80ml/min组，子痫前期重度组高于妊娠期高血压组和子痫前期轻度组，提示sLOX-1可能参与了妊娠期高血压疾病和肾损害发生发展。相关性分析，sLOX-1与娠期高血压疾病的进展呈正相关，说明sLOX-1会随着病情发展而上调。分析认为：可能与妊娠期高血压疾病患者存在内皮细胞损伤，导致炎性因子介入，血管内皮源性舒张因子及一氧化氮减少有关，在一定程度上诱导sLOX-1分泌[13-14]。

HCY是一种广泛分布于机体的氨基酸半胱氨酸异种[15]。有研究[16]指出，其水平上升与肾功能损害有关。正常情况下HCY代谢相关酶主要生存于肾脏，经肾脏清除，但当肾功能受损HCY代谢相关酶也会随之缺乏或活性丧失，通过阻滞代谢通道造成血液HCY蓄积，故本研究观察组的表达量高于对照组。另外，HCY水平上升也会一定程度诱导动脉平滑肌细胞增生及损伤血管内皮细胞，使其发生血管痉挛、血氧不足，加重对肾脏的损害[17-18]。基于上述3种指标在妊娠期高血压合并肾功能损害患者中的异常升高，本文对其进行ROC曲线分析显示，3者均有较高的评估敏感度和特异性，但联合检测预测价值更高。

综上所述，miR-146a、sLOX-1、HCY水平会随着妊娠期高血压疾病的发展而上升，联合检测有利于提高诊断妊娠期高血压并发肾功能损害效能，为临床治疗提供指导。本研究局限在于为单中心回顾研究，入组样本相对较少且均为本院收治病例，虽体现出miR-146a、sLOX-1、HCY联合诊断的优势，但尚缺乏大量研究证实。仍有待行大样本随机对照实验验证结论。