nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b在妊娠期高血压疾病中的表达及相关性

杨 娜 王 微 张 芳 严 凤*

1.河北省保定市妇幼保健院(071000)；2.河北省保定市职业技术学院

妊娠期高血压疾病孕妇会出现高血压、蛋白尿、水肿等症状[1-2]。人新饱食分子蛋白1(nesfatin-1)作为一种与摄食功能有关的蛋白，能够参与调控心血管、生殖、胃肠道等系统的功能，同时还有升高平均动脉压、抗炎、抗凋亡作用。miRNA参与多种细胞因子的转录调节以及免疫应答反应[3-4]。临床研究显示，miRNA在维持胎盘的正常发育中发挥重要作用，miRNA表达出现异常可能与妊娠期高血压疾病的发生发展有关，有望成为妊娠期高血压疾病预后评估的生物标志物以及治疗靶点[5-6]。本文研究对nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b进行检测，探究其在妊娠期高血压疾病中的表达及相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

在获得本院伦理委员会批准后，选取2020年1月—2021年3月本院收治的妊娠期高血压患者94例为病例组，包括妊娠期高血压52例，轻度子痫前期35例，重度子痫前期7例；同期产前检查健康孕妇90例为健康组。纳入标准：妊娠期高血压患者符合相关诊断标准[7]；单胎妊娠；临床资料完整；患者及家属均签署知情通知书。排除标准：多胎妊娠者；妊娠前有糖尿病、高血压史；母体或胎儿存在病毒感染；近半年有非法药物成瘾史。

1.2 检测方法

1.2.1标本采集病例组入院后次日、健康组在体检当天清晨采集空腹静脉血，离心取上清液置-80℃保存待用。

1.2.2血清nesfatin-1检测使用酶联免疫吸附法检测血清nesfatin-1水平。试剂盒购自武汉优尔生物科技股份公司。

1.2.3血清miR-1233-3p、miR-181b检测使用RT-PCR检测miR-1233-3p、miR-181b表达。在待测标本内提取总RNA，逆转录后获得cDNA，使用Primer5.0软件设计引物，采用2-△△Ct方法计算，内参U6。设置反转录反应条件：25°C 10min,40°C 60min,85°C 5min；设置扩增条件:94°C20s、72°C 30s、60°C 30s,35个循环，采用2-△△Ct方法计算mRNA表达量。miR-1233-3p上游引物序列：5'-ACCTCCAGCTGGCATTATTACTTTTGG-3'；下游引物序列：5'-TGGTGTCGTGGAGTCG-3'。miR-181b上游引物序列5'-GCGGTCACTTATTCGTGCG-3'；下游引物序列3'GTCGTCCCACATTCCAGCRT-5'。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 一般情况

病例组年龄(28.1±3.1)岁(24～32岁)，孕周(37.5±1.2)周(36～39周)，孕次(2.1±0.7)次(1～3次)，孕前体质指数(BMI)(23.1±1.5)kg/m2(21～25kg/m2)。健康组年龄(27.1±3.12)岁(23～31岁)，孕周(38.5±1.2)周(37～40周)，孕次(2.1±1.5)次(1～4次)，孕前BMI(22.5±1.2)kg/m2(21～24kg/m2)。两组对比无差异(P>0.05)。

2.2 血清nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b表达

如表1所示，病例组nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b表达高于健康组，且在妊娠期高血压、子痫前期、重度子痫前期患者中表达依次上升(P<0.05)。

2.3 影响妊娠期高血压疾病多因素logistic回归分析

将妊娠期高血压疾病严重程度作为因变量(赋值：发展至子痫前期=0，发生子痫前期=1)，将nesfatin-1(赋值：<8.51=0，≥5.81 ng/ml=1)、miR-1233-3p(赋值：<1.21=0，≥1.21=1)、miR-181b(赋值：≥2.15=0，<2.15=1)作为自变量，纳入二分类多因素 logistic回归模型分析。结果显示，nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b为妊娠期高血压疾病发生危险因素(P<0.05)。见表2。

表1 各组血清nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b表达对比

表2 nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b与妊娠期高血压logistic回归分析

2.4 nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b相关性

Pearson相关性分析，nesfatin-1、miR-1233-3p呈正相关(r=0.272；P=0.009)；nesfatin-1、miR-181b呈正相关(r=0.311；P=0.002)；miR-1233-3p、miR-181b呈正相关(r=0.366；P=0.001)。

3 讨论

有学者认为，妊娠期高血压疾病机制学说主要包括血管内皮受损学说、免疫学说、胎盘缺血、氧化应激学说[8-9]。亦有临床研究指出，妊娠期高血压体内炎症因子水平高于正常妊娠者，所以有学者认为妊娠期高血压疾病很可能属于全身性炎症疾病[10-11]。

nesfatin-1做为一个与摄食功能有关的蛋白，主要起抑制摄食、调节肥胖、改善胰岛素抵抗效果[12-13]。本研究发现，nesfatin-1在妊娠期高血压中呈现上升趋势，原因是nesfatin-1能够影响胰岛素，且当出现炎症反应时，机体炎症因子会使nesfatin-1表达升高。有临床研究显示，nesfatin-1对心血管有作用，对侧脑室注射nesfatin-1能显提高平均动脉压[14]。亦有临床研究指出，nesfatin-1在妊娠期高血压中呈高表达[15]。本研究发现，妊娠期高血压患者nesfatin-1水平呈现出高水平，且随疾病加重水平上升。提示妊娠期高血压疾病的发生与血清nesfatin-1水平升高有关，且升高幅度与疾病严重程度相关。推测nesfatin-1参与了妊娠期高血压的发生发展。

miRNA作为一种内源性非编码RNA参与细胞基因表达的调节而影响生物体生理活动。目前临床外周血中检测miRNA，有无创、简便易行、易重复等特点，能够成为一种早期发现一级诊断的良好生物学标记物[16-17]。有研究显示，miRNA在维持胎盘正常发育中发挥重要作用，其异常表达可能与妊娠期高血压的发生发展密切相关，有望成为妊娠期高血压预后评估的生物标志物以及治疗靶点[18]。本研究发现，miR-1233-3p、miR-181b在妊娠期高血压疾病中呈现高表达，可能与miR-1233-3p、miR-181b表达异常升高，影响到cAMP-PKA信号通路有关。有研究显示，cAMP-PKA信号通路能够调节胎盘滋养细胞分化；miR-181b在妊娠期高血压疾病中能够与炎症因子相互作用，共同参与疾病的发生发展[19]；赵影庭等[20]指出，miRNA-1233在妊娠期高血压患者胎盘中呈现高表达，与疾病的严重程度具有相关性；亦有学者认为，妊娠期高血压患者miR-1233-3p呈现高表达，能够作为妊娠期高血压血清检测标记物[21]。本研究发现，miR-1233-3p、miR-181b在妊娠期高血压疾病中呈现高表达，且随病情加重表达上升，且3者在妊娠期高血压疾病中呈现正相关。

综上所述， nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b在妊娠期高血压疾病中呈现高表达，且随着病症加重表达升高，且呈正相关关系。