血清铁蛋白联合miR-182检测评估宫内感染及新生儿预后价值

马晓晨 罗 甜 吴慧丽

山东省济南市妇幼保健院(250001)

据报道，宫内感染发生率国外为5%～10%，我国为0.7%～5%[1-2]。宫内感染不仅可导致产妇发生绒毛膜羊膜炎，还可引起新生儿败血症、新生儿感染性肺炎、围产期脑损伤等不良事件[3]。目前，诊断宫内感染的金标准是产后胎盘病理及细菌培养，分娩前诊断仍依赖于血清学检测[4-5]。研究认为机体在遭受细菌感染时血清铁蛋白(FP)水平明显升高，在感染期间FP水平反映机体的某种防御机制，通过剥夺细菌在体内所需的铁来保护免疫细胞功能[6]。近年相关研究显示，微小RNA(miRNA)的过表达可能与新生儿窒息发生发展密切相关，尤其是在新生儿缺血缺氧性脑病中常可检测到miR-182的过表达。miR-182属一种缺氧特异性miRNA，已被证实与临床上多种常见病如神经系统肿瘤、缺血性脑卒中等密切相关[7]。鉴于此研究现状，笔者收集了近年来本院收治的宫内感染产妇资料，探讨血清FP联合miR-182检测对宫内感染的诊断及对新生儿预后的评估价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2016年10月—2019年8月本院收治的绒毛膜羊膜炎产妇临床资料52例作为感染组，年龄(26.4±3.4)岁(24～31岁)，孕周(36.2±3.1)周(28～40周)；住院分娩或晚期妊娠引产的年龄及孕周匹配的健康产妇50例作为对照组，年龄(27.1±3.5)岁(24～32岁)，孕周(35.9±3.1)周(32～40周)。纳入标准：①感染组符合绒毛膜羊膜炎临床诊断标准[8]，且术后胎盘病理证实；②单胎妊娠；③产妇及家属签署知情同意书。排除标准：①伴机体其他部位严重感染；②伴有妊娠期高血压、妊娠期胆汁淤积症等妊娠合并疾病；③入组前3月有抗生素药物使用史；④合并心、肝、肾等重要脏器功能不全。本研究通过医院伦理委员会审查并备案。

1.2 检测方法

患者入院后分别于感染加重时、破膜6h内(使用抗生素前)、分娩时取静脉血分离上清液，采用CF-10全自动化学发光仪(武汉明德生物科技有限公司)检测血清FP水平。利用miRNAesy Kit试剂盒(Qiagen公司)提取血清总RNA，核酸定量检测分析仪检测血清总RNA浓度以及纯度。取2μg总RNA置于逆转录试剂盒中合成cDNA，以cDNA为模板行实时荧光定量PCR反应。反应条件：90℃、15min预变性，95℃、15s，60℃、30s，72℃、20s，共循环40次。miR-182上游引物序列为：5’-TTTGGCAATGGTAGAACTCACACT-3’，下游引物序列为：5’-GCTTTGGCAATGGTAGAACTCACACT-3’，U6上游引物序列为：5’-CTCCCTTCGGCAGCACA-3’，下游引物序列为：5’-AAGGCTTCACGAATTTGCGT-3’。将U6作为参照，采用2-△△Ct法计算miR-200b-3p相对表达量。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 血清FP水平及miR-182相对表达量

感染组血清FP水平(298.48±48.72μg/L)及miR-182相对表达量(2.38±0.70)均高于对照组(197.42±50.80μg/L、1.36±0.47)(t=10.256、8.605，均P<0.001)。

2.2 血清FP联合miR-182检测诊断宫内感染效能

ROC曲线分析显示，血清FP联合miR-182诊断宫内感染价值优于单项检测。见表1。

表1 不同指标诊断宫内感染效能

2.3 新生儿不良结局

感染组新生儿宫内感染、呼吸窘迫综合征、宫内感染性肺炎、围产期脑损伤、新生儿死亡、新生儿Apgar评分<7分的发生率均高于对照组(P<0.05)，两组新生儿早产和宫内窘迫的发生率无差异(P>0.05)。见表2。

表2 两组新生儿不良结局比较[例(%)]

2.4 感染组新生儿Apgar评分与产妇血清FP、miR-182相关性

感染组新生儿Apgar评分<7分、Apgar评分≥7分的产妇血清FP(311.78±51.22μg/L、258.03±49.97μg/L)及miR-182(2.44±0.68、2.01±0.73)有差异(t=3.716、2.157，P=0.001、0.036)。Pearson相关性分析显示，产妇FP水平及miR-182与新生儿Apgar评分均呈负相关(r=-0.308、-0.320，P=0.028、0.022)。

3 讨论

宫内感染不仅可导致产妇绒毛膜羊膜炎，还可导致胎儿早产、败血症、新生儿脑损伤、新生儿呼吸窘迫综合征、感染性肺炎等不良结局的发生[9-10]。相关研究表明，绒毛膜羊膜炎与新生儿不良预后密切相关。陈悦群等研究表明，诊断为绒毛膜羊膜炎的产妇新生儿罹患败血症几率高达6%；杜红艳等研究显示，在产后合并新生儿感染的母亲患绒毛膜羊膜炎的几率为31%。说明绒毛膜羊膜炎与新生儿感染具有相关性[11-12]。因此，早期诊断并采取有效治疗对改善母婴结局有至关重要作用[13]。

目前临床诊断产妇绒毛膜羊膜炎的实验室检查指标种类繁多，但特异度和灵敏度千差万别。有研究表明，FP参与机体免疫调节过程，淋巴细胞表面有铁蛋白受体分子，可与铁蛋白H亚基相结合，这种结合见于机体B淋巴细胞和部分CD4+、CD8+T淋巴细胞[14]。当机体遭受病原体感染时，急性时相蛋白及细胞因子的作用可调节铁的转运和代谢过程，打破了铁平衡，大量铁转运至机体网状内皮系统内，使循环中铁离子浓度下降，而FP水平升高[16-17]。另外，在感染条件下机体肠道吸收铁减少，网状内皮系统对铁的亲和力增加，不能有效释放铁进入血浆，称为网状内皮铁阻滞现象，这些因素都导致了血清FP升高[18]。临床研究已经证实，miRNA对新生儿缺血缺氧性脑病有独特的预测价值。miR-182在缺血缺氧性脑病的发生发展中有重要作用。Stittrich等在小鼠的大脑缺血缺氧模型中发现大脑皮质miR-182表达水平明显升高。基于宫内感染可导致新生儿缺血缺氧性脑病等基础研究结论，有学者提出，可通过miR-182的表达水平辅助诊断宫内感染及评估新生儿预后[19]。

本研究结果显示，感染组血清FP水平及miR-182相对表达量均高于对照组，两指标联合检测具有较高的诊断价值。感染组新生儿宫内感染、新生儿呼吸窘迫综合征、新生儿宫内感染性肺炎、围产期脑损伤、新生儿死亡、新生儿Apgar评分<7分的发生率均高于对照组，新生儿Apgar评分<7分的产妇血清FP水平及miR-182水平均低于Apgar评分≥7分产妇，FP及miR-182水平与新生儿Apgar评分均呈负相关。二者联合检测，不仅可提高诊断宫内感染的准确率，对新生儿围产期脑损伤、感染性肺炎等不良结局也有预测价值[20]。

综上所述，血清FP联合miR-182检测对产妇宫内感染和新生儿预后有较好诊断及评估价值，临床可评估产妇宫内感染及新生儿预后，早期采取针对性诊疗措施，改善母婴结局。