梁王茶不同极性部位抗氧化及抑制酪氨酸酶活性研究

兰圆圆 杨苗 黄志强 朱开梅

【摘要】目的：研究梁王茶不同极性部位抗氧化和抑制酪氨酸酶活性的作用。方法：采用有机溶剂萃取法萃取得到梁王茶乙酸乙酯、正丁醇和水相部位，采用DPPH法、ABTS法、L-DOPA法评价各萃取部位对自由基的清除能力和酪氨酸酶抑制活性。结论：梁王茶提取物具有较好的抗氧化活性和酪氨酸酶抑制作用，乙酸乙酯提取物为其主要活性部位，具有开发成护肤品的潜在应用价值。

【关键词】梁王茶;抗氧化;酪氨酸酶[1]

基金项目：广西创新驱动发展专项项目（桂科AA18118015）;桂林市科学研究与技术开发计划项目（2020011203-1，2020011203-2）

异叶梁王茶（Notho panax davidii）系五加科梁王茶属植物，是喀斯特地区的特色药材，在广西桂西北、桂东北及贵州、云南等少数民族地区被广泛饮用，具有抗风湿、强筋骨、治疗胃病、咽喉热痛等功效。现代研究发现梁王茶属植物具有镇痛、抗肿瘤、抗病毒、抑菌、调节免疫、防治心脑血管疾病以及解酒保肝等作用。

近年来，人们越来越关注皮肤的健康与保养，如抗衰老、美白、色素沉着等。各种自由基所引发的氧化损伤是导致衰老的原因之一;酪氨酸酶过度激活导致的肌肤色素沉着，也是引起衰老的重要原因。由于化学合成的抗氧化、美白产品会对人体有一定副作用，因此寻找有效、安全、天然的抗氧化剂及酪氨酸酶活性抑制剂是国内外学者的研究热点。本文对梁王茶药材各萃取部位的抗氧化和抑制酪氨酸酶活性活性进行评价，为梁王茶的开发利用提供参考价值和科学依据。

1 实验仪器与材料

N-1300D EYELA旋轉蒸发仪（上海巴玖实业有限公司）;ReadMax 1200型光吸收全波长酶标仪（上海闪谱生物科技有限公司）。无水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇等（天津致远化学试剂有限公司产品）;DPPH（梯希爱有限公司）;ABTS试剂盒（碧云天生物技术公司）;酪氨酸酶（九鼎化学有限公司）;抗坏血酸Vc、熊果酸（津一方科技有限公司）;除另有说明外，所有试剂均为分析级，实验用水为超纯水。

2 实验方法

2.1 梁王茶乙醇提取物及不同溶剂提取物的制备

异叶梁王茶采自广西植物研究所。参考文献方法，称取梁王茶干燥品500g，按料液比1：10加入95%乙醇，60℃回流提取，减压浓缩得梁王茶乙醇提取物。采用有机溶剂萃取法，得到梁王茶乙酸乙酯、正丁醇以及剩下的水相部位，将各极性部位萃取物减压浓缩，作为实验样品。

2.2 抗氧化活性研究

2.2.1 DPPH法

参考文献方法，以VC为阳性对照，将不同浓度的样品和DPPH工作液加入到96孔板的各孔中，同时以无水乙醇代替DPPH工作液作为对照空白，并以无水乙醇代替样品作为样品空白。混合后室温避光反应30 min，在517 nm波长处测吸光度。

2.2.2 ABTS法

按试剂盒说明取相同体积的ABTS溶液以及氧化剂溶液。参考文献方法，将96孔板内加入200 µL ABTS工作液后，进行分组实验，一组加入不同浓度的Trolox溶液，用来绘制标准曲线，另一组加入10 µL不同浓度提取液，作为样品组。同时用PBS代替样品溶液作为空白对照。室温孵育5 min，在405 nm处测定吸光度。参照标准曲线计算出样品的总抗氧化能力。

2.3 酪氨酸酶抑制活性研究

参考文献方法并稍作修改。吸取不同浓度梁王茶样品和熊果酸于96孔板中，加入80 μL PBS缓冲液和40 μL底物溶液，于37 ℃的恒温箱孵育10 min 后，迅速加入40 μL 酪氨酸酶启动反应，反应30 min后，在475 nm 处测定吸光度A。

3 结果

3.1 DPPH自由基的清除能力

由图1可知，在0.05～0.8 mg/mL浓度范围内，梁王茶各萃取物对DPPH自由基均具有一定程度的清除作用，呈正量效关系。样品对DPPH自由基清除大小依次为VC>乙酸乙酯部位>正丁醇部位>醇提部位>水相部位。梁王茶乙酸乙酯部位在其质量浓度为0.8 mg/mL时清除率高达94.18 %。梁王茶乙酸乙酯部位其清除能力仅次于Vc，Vc对DPPH自由基的IC50= 0.02982 mg/mL，而乙酸乙酯部位的IC50= 0.04677 mg/mL。

3.2 ABTS自由基的清除能力

如图2所示，梁王茶各极性萃取物均有不同程度的抗氧化能力，不同部位之间抗氧化活性相差较大。整体上看，当提取物质量浓度达0.4 mg/mL后，清除率曲线变化缓慢。各萃取部位中，乙酸乙酯部位清除ABTS自由基能力最强，在0.8 mg/mL时高达1.3667 mmol/L，与Vc的抗氧化能力相当。样品对ABTS自由基清除大小为：VC≥乙酸乙酯部位>正丁醇部位>醇提部位>水相部位。

3.4酪氨酸抑制活性评价

结果如表3所示。梁王茶各萃取部位均表现出不同的抗酪氨酸酶活性。其对酪氨酸酶抑制活性强弱依次为熊果酸>乙酸乙酯部位>正丁醇部位≥醇提部位>水相部位。乙酸乙酯部位对于酪氨酸酶的抑制作用最好，其IC50为0.2170 mg/mL。说明梁王茶中发挥抑制酪氨酸酶作用的活性成分主要溶解在乙酸乙酯部位。

4 讨论

本研究表明，异叶梁王茶各萃取部位均有不同程度的抗氧化以及抑制酪氨酸酶活性的作用，且成浓度依赖性。在相同质量浓度下，梁王茶乙酸乙酯部位对DPPH、ABTS的清除能力优于其它部位P<0.05。梁王茶乙酸乙酯部位提取物抑制酪氨酸酶活性的能力也最强，其IC50为0.082 mg/mL，仅次于阳性对照熊果酸。以上实验结果提示，梁王茶乙酸乙酯部位具有较强的清除自由基的能力，降低了自由基对黑色素细胞的损伤;可抑制酪氨酸酶的活性，从而抑制机体黑色素合成，因此推断乙酸乙酯部位可能是梁王茶抗衰老、防止色素沉着的主要有效部位。本文首次报道了异叶梁王茶不同提取部位的抗氧化及抑制酪氨酸酶活性，证明其乙酸乙酯部位的药效相对较强，因此可将其作为研究重点，其最优的单一活性成分还需做进一步研究。

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通信作者：朱开梅（1967-），女，汉，教授，主要从事糖尿病并发症及药物治疗。

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