柏蛇湿疹膏提取液抗氧化活性的研究

朱雨晴 俞彩霞 朱杰 金姬 周文灿

【摘 要】目的：以柏蛇湿疹膏提取液，并对其抗氧化活性进行验证。方法：柏蛇湿疹提取液测定清除ABTS+·和超氧自由基的活性，验证其抗氧化能力。结果：柏蛇湿疹膏提取液具有较强的体外抗氧化活性，其抗氧化能力低于Vc，略优于盐酸小柴碱单剂。结论：证实柏蛇湿疹膏具有一定的体外抗氧化活性。

【关键词】中药膏方，柏蛇湿疹膏，抗氧化活性

Study on antioxidant activity of extract of cypress snake eczema ointment

Zhu Yuqing， Yu Caixia， Zhu Jie， Jin Ji， Zhou Wencan

Hangzhou Fuyang maternal and child health care hospital， Hangzhou， Zhejiang 311400， China

【Abstract】Objective： to take the extract of cypress snake eczema ointment and verify its antioxidant activity. Methods： the scavenging activities of ABTS +· and superoxide free radicals were measured to verify its antioxidant ability. Results： the extract of Baishe eczema ointment had strong antioxidant activity in vitro. Its antioxidant capacity was lower than Vc and slightly better than that of xiaochaine hydrochloride. Conclusion： it is confirmed that Baishe eczema ointment has certain antioxidant activity in vitro.

【Key？Words】Traditional Chinese medicine ointment， cypress snake eczema ointment， antioxidant activity

根據我院皮肤科临床治疗的数据分析、疗效结果，中药湿疹方剂柏蛇湿疹膏，是基础源于我院皮肤科治疗湿疹的经典中药处方，由黄柏、蛇床子、马齿苋、金银花四味中药组成。其临床治疗效果明确，特别是在治疗儿童湿疹方面，安全性更高，疗效也更加显著。其中黄柏（Cortex Phellodendri）为芸香科植物黄皮树以及黄檗的干燥树皮[1]，生物碱类为其主要有效成分，以小檗碱（Berberine）含量最高[2]。探讨柏蛇湿疹膏提取液体外抗氧化活性，为临床用药提供实验依据。

1.1 仪器

Sartorius BD 211D十万分之一电子平（塞多利斯）；Sartorius BS 110S万分之一电子天平（塞多利斯）；旋转蒸发仪（上海申生），SHZ-D（Ⅲ）型循环水真空泵（邦西仪器科技公司）。

1.2 材料与试剂

柏蛇湿疹膏提取液，由我院药学部制备（处方由等量的黄柏、蛇床子、马齿苋、金银花组成），盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定院，含量测定用，批号：0726-201908）。磷酸溶液，甲醇，无水乙醇，抗坏血酸，ABTS，过硫酸钾，邻苯三酚，氯化亚铁，铁氰化钾，Tris溶液，盐酸等均购自华东医药股份有限公司。

2.1 ABTS自由基清除能力测定

ABTS+·清除率测定方法参照Li[3]等，稍作改进，流程见图1。设置组别：阳性对照组、小檗碱组和提取液组，分别对应加入5个浓度梯度的Vc、盐酸小檗碱和柏蛇湿疹膏提取液。设置平行实验3次。

计算公式：清除率（%）=[A0-A/A0]×100%

A734nm可用于测定ABTS+·浓度，A734nm数值减小的幅度可用于反映清除能力的强弱，减小幅度越大，则表示总抗氧化的能力越强。Vc为常用的抗氧化剂，对细胞新陈代谢中形成的有毒自由基和其他活性氧（ROS）[4]具有较好的清除作用。柏蛇湿疹膏提取液对ABTS自由基清除率见表1。可见柏蛇湿疹膏对ABTS+·较强，但不及Vc，优于盐酸小檗碱。清除能力随着样品浓度的增大而增强。

2.2 超氧自由基清除能力测定

参考Marklund[5]等方法稍作改进。设置组别：阳性对照组、小檗碱组和提取液组，分别对应加入5个浓度梯度的Vc、盐酸小檗碱和柏蛇湿疹膏提取液。具体设计如下：

空白组：5 mL Tris-HCl+1 mL邻苯三酚+4 mL H2O

阳性组：4 mL 0.12 mg/mL Vc+5 mL Tris-HCl+1 mL邻苯三酚

对照组1：4 mL柏蛇湿疹膏+6 mL H2O

对照组2：4 mL盐酸小檗碱+6 mL H2O

樣品组1：4 mL柏蛇湿疹膏+5 mL Tris-HCl+1 mL邻苯三酚

样品组2：4 mL盐酸小檗碱+5 mL Tris-HCl+1 mL邻苯三酚

超氧自由基清除率计算公式：清除率（%）= [1-（A样品-A对照）/A空白]×100%

本实验中的超氧自由基来源于邻苯三酚自氧化。超氧自由基是活性氧中的一种，大量超氧自由基的产生会使人体过氧化，进而会引发多种与氧化有关的疾病。柏蛇湿疹膏提取液对超氧自由基清除率见表2。可见柏蛇湿疹膏对超氧自由基具有较强的清除能力，但不及Vc，优于盐酸小檗碱。清除能力随着样品浓度的增大而增强。

机体在新陈代谢中会产生活性氧自由基簇（ROS），主要包括超氧阴离子自由基（O2-）和羟自由基（·OH）。ROS可调节细胞间的信号传递和细胞生长等，但一旦过量则将有羟基产生。羟基会与细胞的类脂膜、DNA和蛋白等反应[6-7]。由ROS介导的细胞膜脂质的过氧化反应，以及DNA和蛋白质的氧化损伤与炎症[8]、衰老[9]、动脉粥样硬化[10]、癌症和神经变性疾病等多种慢性病理状态都密切相关。以上述工艺条件制备的柏蛇湿疹膏，通过验证清除ROS的能力，来初步探讨其对于湿疹治疗的作用机制。

由试验结果可知，柏蛇湿疹膏具有较强的ABTS+·和超氧自由基清除能力。中药多靶点间相互协同作用发挥药效，实验结果也证实柏蛇湿疹膏复方的抗氧化能力优于盐酸小檗碱单药。由此可见中药在协同作用后药效得到充分提高，但复方的作用机制还有待探讨，若能对柏蛇湿疹膏抗氧化作用机制进行深入研究，将有助于进一步开发其药用价值。

参考文献

[1] Flora， T.E.C.o.C.， Chinese Flora[J]Flora of China. 1997，42（2）：103.

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[5] Marklund， S. and G. Marklund， Involvement of the superoxide anion radical in the autoxidation of pyrogallol and a convenient assay for superoxide dismutase.[J].European Journal of Biochemistry， 1974，47（3）：469-474.

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[8] Blaser Heiko，Dostert Catherine，Mak Tak W，Brenner Dirk. TNF and ROS Crosstalk in Inflammation.[J]. Trends in cell biology，2016，26（4）.249-261.

[9] Seong-Hoon Park，Ozkan Ozden，Haiyan Jiang，Yong I.Cha，J.Daniel Pennington，Nukhet AykinBurns，Douglas R. Spitz，David Gius，Hyun-Seok Kim. Sirt3， Mitochondrial ROS， Ageing，and Carcinogenesis.[J].IJMS，2011，12（9）：6226-6239.

[10] Stirban，A，The role of AGEs and ROS in atherosclerosis.[J].Herz，2010，35（3）：170-180.

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