傣医常用解药抗炎作用筛选研究

梁志庆 倪凯 何鹏飞 王胤骁 赵应红

摘要：目的 研究傣医常用的5种解药对小鼠巨噬细胞焦亡和活力的影响，初步筛选评价其抗炎活性。方法 采用Celigo Cytomter全视野细胞扫描分析仪，对健康生长条件下空白组及药物干预的小鼠巨噬细胞进行分析，通过对细胞增值数的观察分析，筛选出可抑制小鼠巨噬细胞增值的药材。结果 与空白组比较，给药组的小鼠巨噬细胞数减少（P<0.05）。结论 傣族常用解药对小鼠巨噬细胞有一定的抑制作用。

关键词：傣医;解药;巨噬细胞;抗炎;筛选

中图分类号：R285.5   文献标志码：A   文章编号：1007-2349（2022）03-0078-03

炎症反应存在与机体的诸多生理病理过程中，是最基础的保护性反应之一。体内多种细胞参与其中，巨噬细胞在调控人体炎症反应变化的过程中扮演着不可替代角色。人体内的巨噬细胞处于应答状态，当其受到微观世界中各种效应子的激活信号，诸如外界的病原体、突发损伤刺激干扰或者免疫适应，都会引起巨噬细胞的分化，从而开启不同的遗传程序，诱导其成为极化状态[1]。当这种稳态的平衡被打破，就会造成巨噬细胞极化失调。从而可能导致多种慢性炎症相关性疾病的发生发展，例如脓毒症、动脉粥状硬化、哮喘及炎症性肠病等[2]。因此，调控巨噬细胞的稳态，纠正其极化失调表达，可能会延缓这些相关疾病的炎症进程，这也使得对巨噬细胞极化的调控有望成为控制和治疗这些炎症性疾病新的靶点。傣族医药历史悠久，据《贝叶经》记载，早在2500多年前，傣族就有了自己的医药，是傣族人民长期与自然和疾病斗争中总结、积累出来的，并受到中医学、印度传统医学的影响，且傣医理论“四塔”（风、火、水、土）和“五蕴（色、识、受、想、行）与中医阴阳五行学说有相似之处，具有鲜明的民族特色，是祖国医学的重要组成部分。傣医药学具有独到的防病治病的特征。傣医传统理论认为，凡功能以解毒为主，针对各种食物、药物、动物叮咬及各种原因过敏等所导致的体内残留毒素而设，具有解除毒素、调补四塔功能的药物称为雅解（解药），而其使用方法则称为“解法”[3]。在前期调研过程中，搜集到了数十种傣族解药，其中嘿宋些、文尚海、牙给哈蒿、呀楠嫩、芽哈摆、埋答巴等十余种为当地习用常用的解药。

傣医临床常用的解法，其解除毒素、调补四塔功效，可能与调控巨噬细胞稳态、纠正其极化失调以致延缓炎症有关，选择了5种常用傣医解药进行细胞实验，观察其对巨噬细胞生长的影响，初步评价其抗炎活性。

1 材料与方法

1.1 实验细胞 RAW264.7小鼠单核巨噬细胞，编号：KCB200603YJ，来源于中国科学院昆明细胞库（中科院动物所）。

1.2 实验药物与试剂 5种傣药（编号：1、2、3、4、5），批号：20211230，均购自西双版纳州州民族医药研究所。中美特级胎牛血清（04-001-1ACS，BI）、DMEM/高糖培养液（06-1055-57-1ACS，BI）、青霉素-链霉素溶液（03-031-1B，BI）、胰蛋白酶溶液（03-050-1A，BI）上述试剂均从云南泽浩商贸有限公司采购。

1.3 实验仪器 DLAB多速度离心机，型号：DM0412，大兴龙创实验仪器（广州）有限公司;CO2细胞培养箱，德国WIGGENS;BIO成像系统，65666，BIO;全视野细胞扫描分析仪（Celigo Cytomter），美国Nexcelom，耐细隆生物仪器（上海）有限公司;超纯水系统，英国ELGA Classic UF;-80℃超低温冰箱，Ermo Fisher;显微镜 BX600，奥林巴斯（上海）销售服务有限公司;电转仪（半程），314456，北京生物;真空操作台，AIRTECH，0135。

1.4 药材受试液制备 每种傣药均取100 g，加8倍量纯水煎煮3次，每次25 min，滤过，合并滤液浓缩至100mg生药/ml，2500 rpm离心15 min，取上清液高压灭菌后冻存（-15℃）备用。冻存原液稀释为3个浓度（200、400、800μg/mL）供实验用。

1.6 实验环境 细胞培养箱环境（37℃、5%CO2），完全培养基稀释，持续抽风状态生物安全柜等，遵循无菌操作。

1.7 受试药材对RAW264.7细胞计数的影响 通过观察其对于细胞技术的影响，从而分析受试药材对巨噬细胞的增殖以及活力情况的影响。

将RAW264.7细胞消化传代，取对数生长期（聚合度在75%以上）的RAW264.7细胞，将每组细胞以1×104个/孔（约8500个细胞）接种于无菌的96孔板中，稍微振荡，使细胞贴壁。然后放入细胞培养箱内培养，24 h后分别加入等量受试药材（培养基稀释后），根据预设的3个浓度，用完全培养基稀释，每组设10个复孔，空白组加入等量培养基，分别在药材刺激后24 h，48 h，72 h取出96孔板，用分析儀检测细胞计数情况，分析其细胞增值和细胞活力情况，从而评价药物对RAW264.7细胞生长的影响。

1.8 统计学方法 实验数据统一进行方差齐性校验，使用SPSS28.0软件进行数据处理分析，各组均数之间的比较采用单因素方差分析计量资料用均数±标准差（x±s）表示，P>0.05为差异无显著统计学性意义，P<0.05为差异有显著统计学性意义。

2 结果

2.1 1号傣药对平均细胞数的影响 表1结果表明，1号傣药高浓度在0～24、24～48、48～72 h时均显著减少小鼠巨噬细胞数;中浓度仅在24～48 h时显著减少小鼠巨噬细胞数;低浓度对小鼠巨噬细胞数无显著影响。

2.2 2号傣药对平均细胞数的影响 表2结果表明，2号傣药高浓度仅在48～72 h时显著减少小鼠巨噬细胞数，中、低浓度对小鼠巨噬细胞数均无显著影响。

2.3 3号傣药对平均细胞数的影响 表3结果表明，3号傣药对小鼠巨噬细胞数无显著影响。

2.4 4号傣药对平均细胞数的影响 表4结果表明，4号傣药高浓度在0～24、24～48、48～72 h时均显著减少小鼠巨噬细胞数;中浓度仅在48～72 h时显著减少小鼠巨噬细胞数;低浓度对小鼠巨噬细胞数无显著影响。

2.5 5号傣药对平均细胞数的影响 表5结果表明，5号傣药高浓度在0～24、24～48、48～72 h时均显著减少小鼠巨噬细胞数;中浓度在24～48、48～72 h时显著减少小鼠巨噬细胞数;低浓度对小鼠巨噬细胞数无显著影响。

3 小结

据文献记载，1号傣药其性凉、味苦，入火、土、风塔，具有清火解毒、消肿止痛之功效，可用于咽喉肿痛、口舌生疮、疔疡斑疹、肺热咳嗽、胃脘痛、尿痛等，还可用于消除因饮食不潔或用药不当所致的各种不良反应[4];2号傣药其性凉、味苦，入火、土、风塔，具有清火解毒、增强免疫之功效;3号傣药其性凉、味甘，入火、土塔，具有清火解毒、强精补肾之功效;4号傣药味苦、微甜，气臭，性温。入四塔，功效为调补四塔，解毒。用于治疗产后因饮食不洁（节）等而致的疾病;5号傣药的功效为清热解毒，性温。入四塔。本研究表明，除3号傣药外，其余4种傣药均对小鼠巨噬细胞生长均有一定的抑制作用，且4、5号傣药的高浓度组在0～72 h 3个时间段均有显著性差异（P<0.05）。

傣医“雅解”学说是傣医理论最具民族特色的理论之一，使用历史悠久，是傣医基础理论的重要组成部分，它以四塔、五蕴为理论核心，“未病先解，先解后治，同解同治”的解毒理论是其核心内容，雅解旨在解除人体内各种毒素，并调节体内“四塔、五蕴”功能失调，达到防病治病，保持人体健康之目的。但“雅解”的生物学原理及解药的作用机制研究匮乏，本研究以不同浓度的药物对巨噬细胞生长的影响为指标，初步评价5种常用傣医解药的抗炎活性，对研究解药的作用机制具有一定的重要意义。

参考文献：

[1]Murray P J.Macrophage polarization[J].Annual Review of Physiology，2017，79（1）：541-566.

[2]Abbadi A，Llfitis J，Wang M，et al.Heparin inhibits proinflammatory and promotes ant-inflammatory macrophage po-larization under hyperglycemic stress [J].Journal of Biological Chemistry，2020，295（15）：4849-4857.

[3]台海川，林艳芳.傣医“解”的理论与解药的现代研究初探[J].中国民族医药志，2009，15（10）：37-39.

[4]李海涛，康利平，郭宝林，等.常用傣药“傣百解”的基原考证[J].中国中药杂志，2014，39（8）：1525-1529.

（收稿日期：2021-11-18）