2019—2021 年北京市兽医系统实验室检测能力比对

杜 鹃，吴 迪，吴惠明，周德刚，巴洪宇，史 记，范君文，傅彩霞，沈光年

（北京市动物疫病预防控制中心，北京 100026）

为全面了解兽医系统实验室检测能力和动物疫情监测预警水平，促进北京市整体动物疫病检测能力的提升，按照农业农村部统一要求，2019—2021 年，北京市动物疫病预防控制中心组织全市兽医系统实验室开展了检测能力比对工作。比对施行统一的检测标准、检测时间和试剂样品，并在规定时间内收回检测结果进行统计分析，比对结果真实反映了北京市各区基层实验室的检测能力水平，这对促进基层实验室加强检测能力建设，提高质量控制水平意义重大。

1 材料与方法

1.1 比对方法

2019—2021 年北京市兽医系统实验室检测能力比对，共设置了检测项目14 个（表1）。每个比对项目设置5～6 个检测盲样。全市配有实验室的12 个区全部参加了本次比对，包括顺义、平谷、房山、门头沟、昌平、密云、丰台、怀柔、大兴、朝阳、通州、延庆，其中有2 个区实验室不具备分子生物学检测能力，不参加分子生物学检测项目，2020、2021 年分别单独为其设置了1 项血清学检测项目，保证每个实验室每年参加3～4 个检测项目。

表1 2019—2021 年北京市兽医系统实验室检测能力比对项目 单位：个

1.2 试验项目和试剂

2019—2021 年不同比对项目选取的方法、标准及试剂见表2，个别重复的比对项目采用的方法、标准及试剂相同。

表2 比对项目的方法、标准和试剂

1.3 比对样品制备

比对样品由国家参考实验室或相应试剂公司生产，由北京市动物疫病预防控制中心进行测试、分装和编号，并标定样品参考值，每份样品量可保证足够用于重复性检测。

1.4 比对样品保存和发放

比对所用检测试剂由北京市动物疫病预防控制中心统一购入，按试剂盒要求条件存放。比对样品制备完成后-20℃保存。由各区参与比对的实验室在规定时间统一领取，放入装有冰袋的保温箱中4 h 内送至比对实验室。

1.5 评判标准

口蹄疫病毒O 型抗体检测、H5 亚型禽流感病毒抗体试验、H7 亚型禽流感病毒抗体检测评判标准：检测值与参考值的偏差不超过1 个滴度，判为结果符合。

布鲁氏菌抗体检测、口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测、H7N9 亚型禽流感病毒检测、猪瘟病毒抗体检测、禽流感病毒通用型检测、非洲猪瘟病毒检测、小反刍兽疫病毒抗体检测、禽白血病病毒p27 抗原检测评判标准：阳性样品的检测结果应为“阳性”，阴性样品的检测结果应为“阴性”。

1.6 结果分析

各项目根据评判标准进行结果分析。2019—2021 年北京市兽医系统实验室检测能力比对共设置的14 个检测项目中，除F-PCR 设置为定量试验外，其余项目均设置为定性试验，不再作进一步的偏离程度分析。本研究仅对2019 年的H7N9 亚型禽流感病毒检测（荧光RT-PCR），2020 年的禽流感病毒通用型检测（荧光RT-PCR）、非洲猪瘟病毒检测（荧光PCR）和2021 年的非洲猪瘟病毒检测（荧光PCR），按照《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》（CNAS-Gl002）中方法进行能力统计量的计算。以相对偏差（D）和Z 比分数，分析各实验室检测值和给定参考值的差异。计算公式：D=（检测值-参考值）×100%/ 参考值；Z=（检测值-参考值）/σ，其中σ表示能力评定标准差，根据经验值（预期值）设定为0.2×参考值。2019 年的H7N9 亚型禽流感病毒检测（荧光RT-PCR）强阳性样品H7、N9 的Ct 值参考值均为20，弱阳性样品H7、N9 的Ct 值参考值均为30；2020 年的禽流感病毒通用型检测（荧光RT-PCR）强阳性样品Ct 值参考值为18，弱阳性样品Ct 值参考值为24，非洲猪瘟病毒检测（荧光PCR）强阳性样品Ct 值参考值为25，弱阳性样品Ct 值参考值为31；2021 年的非洲猪瘟病毒检测（荧光PCR）强阳性样品Ct 值参考值为28，弱阳性样品Ct 值参考值为33。结果分析：｜Z｜≤2，表明“满意”；2 ＜｜Z｜＜3，表明“有问题”，产生警戒信号，提醒实验室应引起注意；｜Z｜≥3，表明“不满意”，产生措施信号，实验室应分析原因，制定针对性整改措施。

2 结果

2019—2021 年共开展了14 个项目的比对。根据检测结果评判规则，全市区级兽医实验室中不同年份、不同比对项目的结果统计见表3。

表3 2019—2021 年北京市兽医系统实验室检测能力比对结果

2.1 各年份实验室比对结果

按照不同年份统计，2019—2021 年各年份实验室检测能力比对结果见表4。实验室全部符合率从2019 年的75.00%提至2021 年100%，样品符合率从2019 年98.02%提高到2021 年100%。

表4 2019—2021 年各年份实验室检测能力比对结果

2.2 各实验室3 年比对结果

全市共有区级兽医系统实验室12 个，3 年全部参加实验室比对，参与率100%。按照结果全部符合的年数进行了统计（图1）。

图1 2019—2021 三年实验室全部符合率分布图

2.3 各检测技术类别比对结果

按检测技术类别统计，实验室各技术类别检测能力比对结果见表5。2019—2021 年开展的14个比对项目，涵盖了血凝抑制试验（HI）、试管凝集试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、F-PCR 4 个技术类别，HI 实验室符合率为100%，试管凝集试验实验室符合率为100%，ELISA 实验室符合率83.33%，F-PCR 实验室符合率为70.00%。

表5 2019—2021 年各技术类别检测能力比对结果

2.4 荧光聚合酶链式反应（F-PCR）比对结果

对2019 年的H7N9 亚型禽流感病毒检测（荧光RT-PCR），2020 年的禽流感病毒通用型检测（荧光RT-PCR）、非洲猪瘟病毒检测（荧光PCR）和2021 年的非洲猪瘟病毒检测（荧光PCR）结果Ct 值进行差异分析表明，除2019 年H7N9 亚型禽流感病毒检测（荧光RT-PCR）2 个实验室分别有1 个弱阳性样品未检出，判定阴性，2020 年的禽流感病毒通用型检测（荧光RT-PCR）1 个实验室1 个弱阳性样品未检出，判定阴性外，其他实验室结果均未出现判定结果结论性错误。除2019 年H7N9 亚型禽流感病毒检测（荧光RT-PCR）1 个实验室强阳性样品2 ≤｜Z｜≤3，表明“有问题”，其他实验室检测样品均为｜Z｜≤2，表明“满意”。各实验室比对结果Ct 值的相对偏差与Z 比分数见表6～9，Z比分数情况见图2～5。

图2 2019 年H7N9 亚型禽流感病毒检测（荧光RT-PCR）比对结果Z 比分数

表6 2019 年H7N9 亚型禽流感病毒检测（荧光RT-PCR）比对结果

表7 2020 年禽流感病毒通用型检测（荧光RT-PCR）比对结果

图3 2020 年禽流感病毒通用型检测（荧光RT-PCR）比对结果Z 比分数

图4 2020 年非洲猪瘟病毒检测（荧光PCR）比对结果Z 比分数

图5 2021 年非洲猪瘟病毒检测（荧光PCR）比对结果Z 比分数

3 讨论

每年比对项目的设置，都结合国家中长期动物疫病防治规划以及当前动物疫病防控重点，尽量覆盖ELISA、F-PCR 等兽医实验室常用检测技术类别。对实验室间检测能力比对出现结果错误的实验室，由市动物疫病预防控制中心提供技术支持，协助其发现问题，落实整改，并重新进行比对复测，直至结果达标，这对强化基层兽医实验室的技术能力具有很大帮助。

北京市近3 年区级实验室间检测能力比对符合率逐年提高，各年度实验室符合率分别为75.00%、83.33%、100%，各年度样品符合率分别为98.02%、99.21%、100%。说明通过每年的实验室检测能力比对，查找问题并整改落实，大多数实验室的检测能力在逐渐进步，特别是分子生物学检测能力有了质的突破，但是仍然有2（2/12）个实验室不具备分子生物学检测能力，需要加强软硬件建设。

近3 年没有实验室重复出现错误，全对及出现过1 次错误的实验室分别占比58.33%和41.67%，说明实验室检测能力整体理想，但是稳定性还有待提高，需要加强人员培训，进一步提高准确度。

从3 年试验时间比对覆盖的检测技术类别来看，HI、试管凝集作为常用检测技术，各实验室操作比较熟练，符合率稳定性比较好；ELISA 也是兽医实验室常用检测技术，但是有竞争ELISA、液相阻断ELISA 等众多种类，所以ELISA 试验也是基层兽医实验室常出问题的项目；而F-PCR 是近几年在北京市各基层兽医实验室刚刚普及的检测技术，培训频率高、强度大，也是进步最为突出的检测技术。

对F-PCR 比对结果进一步分析表明，除2019年H7N9 亚型禽流感病毒检测（荧光RT-PCR）2个实验室分别有1 个弱阳性样品未检出，判定阴性，2020 年的禽流感病毒通用型检测（荧光RTPCR）1 个实验室1 个弱阳性样品未检出，判定阴性外，其他实验室结果均未出现判定结果结论性错误。2019 年H7N9 亚型禽流感病毒检测（荧光RTPCR）1 个实验室强阳性样品2 ≤｜Z｜≤3，表明“有问题”，同时该实验室也是有弱阳性样品未检出的实验室，提示该实验室引起注意，查找原因加强培训，提升该项目检测能力。其他实验室检测样品均为｜Z｜≤2，表明“满意”，尤其是非洲猪瘟病毒检测（荧光PCR）项目在北京市具备分子生物学检测能力的10 个区级实验室中标准化程度高，一致性强。10 个实验室全部作为北京市2019 年第一批授权开展非洲猪瘟检测的实验室，在近年的非洲猪瘟疫情监测工作中发挥了重要作用。

此外，近3 年实验室检测能力比对中各实验室的原始记录来看，原始记录信息不完整、没有可追溯性等问题突出。这些问题需要实验室进一步强化管理，不断提高实验室管理水平和检测人员的技术水平，确保实验室检测的科学性、准确性和规范性，为北京市动物疫病的防控以及食品安全和公共卫生安全的保障提供有力的技术支持。