不同标本前处理方法对新型冠状病毒核酸检测结果的影响分析

杨晓龙

摘要：目的：研究分析新型冠状病毒核酸检测中对标本进行不同前处理对于检测结果的影响情况。方法：选取新型冠状病毒核酸检测显示为阳性为12份灭活的咽拭子标本，分为四份，A前处理为化学裂解15min，B为化学裂解30min，C为56℃水浴30min，D为56℃水浴60min，分析四组的检测结果。结果：水浴检查获得的阳性情况优于化学裂解，化学裂解出现两份阴性。结论：化学裂解会一定程度会破坏病毒的结构，对结果影响较大，日常不建议使用该种前处理模式。

关键词：新型冠状病毒;核酸检测;标本处理

由新型冠状病毒所感染导致的肺炎称为新型冠状病毒肺炎，该肺炎在2019年全球爆发。人类感染该种病毒后会出现咳嗽、发热以及呼吸困难等症状，如果不及时开展相应的治疗可直接威胁患者生命安全。为了进一步防治该种病毒，需要开展核酸检测，而核酸检测一般为咽拭子，在核酸检测之前需要对样本进行前处理，前处理模式比较多，日常检测分析中应该选取何种为本次研究重点。

1.资料与方法

1.1基础资料来源

检测结果为阳性的12份灭活的咽拭子标本。

1.2处理方法

1.2.1仪器材料

所用的儀器为数显电热恒温水浴锅;全自动核酸提取仪;荧光定量PCR;SARS-Co-2核酸检测试剂盒。

1.2.2检测方法

采取全自动核酸提取仪对核酸进行提取，并依据SARS-Co-2核酸检测试剂盒相关说明书进行操作，之后置于PCR之上，于45℃ 10min，95℃ 15s;58℃ 30s循环40次。58℃进行单点荧光检测，检测ORFlab基因、N基因、内源性基因MNBH，并且内源性基因MNBH作为本次的参照基因。

1.3结果判断依据

阴性：扩增曲线不是S型，Ct值>39.00或者Ct值为空白;扩增曲线S型，Ct值≤39.00为阳性。SARS-Co-2核酸检测为阳性时需要符合以下两个条件其中1个：（1）同一份标本中ORFlab基因、N基因在PCR检测中均为阳性;（2）两种类型标本PCR检测同时出现单靶标阳性，或者同种类型标本两次采集检测均出现单靶标阳性。

1.4数据分析

相应的数据纳入办公软件EXCEL中进行分析。

2.结果

A组、B组出现阴性，C组和D组结果均为阳性，具体结果见表1。

3.讨论

新型冠状病毒具有比较强的传染性，因此在对标本进行检测分析前，一般需要对其进行灭活处理，但是如果灭活的方式不对可能会导致病毒核酸降解从而出现假阴性。

本次的研究分析中，使用水浴处理的结果与不处理的结果相近，且假阳性率为0 ，并且该种分析结果比较经济。而化学裂解的处理模式出现的假阴性，结果与未处理的标本之间差异性比较大，造成该种情况原因可能为长时间的化学裂解后标本被破坏，释放的SARS-Co-2核酸被RNA酶降解，该结果提示我们后续的处理中，使用化学裂解模式需要慎重考虑。

新型冠状病毒可导致患者出现新型冠状病毒性肺炎，该种疾病出现后患者出现呼吸系统方面的障碍，严重情况下会直接威胁患者的生命安全。在我国虽然该种病毒已经被控制，但在国外，特别是印度该病毒还在危害着人们，因此需要对该疾病做出及时的检测，并给予患者相应的治疗，从而保证其生命安全。但是由于病毒具有非常强的传染性，需要对样本进行处理，之后进行核酸分析，根据核酸的阴性或者阳性判断，其是否感染新型冠状病毒。本次的处理分析中我们选择了化学裂解15min、化学裂解30min、56℃水浴30min以及56℃水浴60min，结果显示，使用水浴后获得的结果比较接近未处理的样本，该种处理模式获得更加客观的结果，而化学裂解后的样本出现比较高的假阴性，说明该种处理模式不适合临床应用。

综上所述，化学裂解会一定程度会破坏病毒的结构，对结果影响较大，日常不建议使用该种前处理模式。

参考文献：

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