棒毛络新妇Trichonephila clavate的脂溶性成分、微量元素及氨基酸分析研究

李文锐 代欣桃 顾小亮 杨志斌 闻焜 杨自忠

摘要：目的研究棒毛络新妇Trichonephila clavate中含有的脂溶性成分、微量元素和氨基酸。方法采用气相色谱-质谱（GC-MS）联用仪、电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）和氨基酸分析仪分别分析棒毛络新妇中的脂溶性成分、微量元素及氨基酸。结果自棒毛络新妇脂溶性提取物中共鉴定出26个脂溶性成分，占离子流图总峰面积的94.52%，其中，油酸乙酯和亚油酸乙酯含量较高。富含7种人体必需微量元素，其中Fe和Zn含量较高，重金属元素As和Pb的含量符合限度要求。此外，棒毛络新妇中共含有17种氨基酸，其中6种为人體必需氨基酸。结论本研究将为进一步开展蜘蛛资源的开发利用提供参考依据。

关键词：棒毛络新妇;脂溶性成分;氨基酸;微量元素

【中图分类号】 F763 【文献标识码】 A      【文章编号】2107-2306（2022）10--03

蜘蛛在自然界种类较多，分布较广，数量较大，是农林害虫的重要天敌[1-2]，也是人类重要的药用资源和食物资源[3-4]。棒毛络新妇Trichonephila clavata（L.Koch，1878）是一种常见蜘蛛，民间俗称花蜘蛛、草蜘蛛，常见于我国南方各省份，北方的北京、河北、山西、陕西、河南和辽宁也有分布[5]。

食用蜘蛛在我国虽然不普遍，但在世居海南的黎族和云南的傣族、景颇族、布朗族、彝族常有食用蜘蛛的习俗，如海南的黎族喜食海南单柄蛛、施氏单柄蛛、广西缨毛蛛;而云南的西双版纳的布朗族喜食横纹金蛛Argiope bruennichi（Scopoli，1772）、傣族喜食斑络新妇Nephila pilipes（Fabricius，1793），德宏的傣族、景颇族喜食大囊地蛛Atypus sacculatus Zhu et al.，2006，泸水的傈僳族和双柏的彝族喜食棒毛络新妇Trichonephila clavata（L.Koch，1878）[3-4]。

为了探索蜘蛛的营养成分，揭示其对人类营养价值的秘密，本课题组选择了棒毛络新妇Trichonephila clavata（L.Koch，1878）作为研究对象，采用GC-MS、ICP-MS和氨基酸分析仪对该蜘蛛的脂溶性成分、微量元素和氨基酸进行分析研究，研究结果将为进一步开展蜘蛛资源的开发利用提供参考依据。

1仪器与材料

1.1仪器

7890A/5975C型气相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司）;Ethos Up型微波消解仪（意大利Milestone公司）;Agilent 7900型电感耦合等离子体质谱仪（美国Agilent公司）;S-433D型氨基酸自动分析仪（德国赛卡姆公司）。

1.2样品与试剂

样品采集自云南省大理市龙龛码头洱海周边地区，阴干。批号：20181101-20181110，经大理大学昆虫生物医药研究院杨自忠教授鉴定为棒毛络新妇Trichonephila clavate（L.Koch，1878），标本及样品现保存于大理大学昆虫生物医药研究院。多元素混合标准溶液（含Cr、Fe、Ni、Zn、As、Se、Sr、Mo、Ba、Pb，国家有色金属及电子材料分析测试中心，100.0μg/mL，批号：17DA224）;混合内标溶液（45Sc、72Ge、103Rh、115In、185Re、209Bi，美国Agilent公司，10μg/mL，批号：5188-6525）;鸡肉成分分析标准物质（地球物理地球化学勘查研究所，批号：GBW10018）;17种氨基酸混合标准溶液：谷氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸（德国塞卡姆公司，批号：09070113，浓度均为2.5?mol.mL-1）;甲醇（色谱纯，批：10945607 812）和硝酸（质量分数65%，批号：K47365856 551）均购于德国默克公司;其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

2方法与结果

2.1样品制备将干燥的棒毛络新妇虫体用中药粉碎机打碎，过40目筛，样品粉末于干燥器中保存备用。

2.2脂溶性成分分析

2.2.1供试品溶液制备称取备用样品15g，用石油醚进行索氏提取1h，提取液减压浓缩得浸膏，取浸膏10mg，加石油醚溶解并定容为浓度1mg/mL的溶液，上机备用。

2.2.2 GC-MS条件Agilent HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25μm）色谱柱;起始柱温60℃;10℃/min升至160℃，保留3 min;5℃/min升至200℃，保留10 min;5℃/min升至240℃，保留5 min;3℃/min升至250℃，保留5 min;2℃/min升至260℃，保留3 min;300℃后运行3 min;前进样口温度200℃;载气为高纯氦气;进样量1.0μL（分流比10：1）;柱流量：1.0 mL/min。离子源：电离能量70 eV;离子源温度230℃;四级杆温度150℃;质量扫描范围为m/z 50-550，溶剂延迟3 min。

2.2.3样品测定样品按“2.2.2”项下条件测定，得到总离子流图，见图1。通过NIST11.L标准谱库检索（取相似度90%以上），各成分相对百分含量采用面积归一化法进行计算，见表1。

2.3微量元素分析[6]

2.3.1精密称取样品粉末约0.3 g，置聚四氟乙烯消解罐中，加入6 mL硝酸和2 mL双氧水，微波消解，消解功率1800 w，30 min内升至190℃，保持20 min。冷却，于130℃赶酸至溶液剩余约1.0 mL，转入50 mL量瓶，超纯水定容。同法制备试剂空白溶液。

2.3.2 ICP-MS工作条件射频功率1550 w，等离子气体流量15.0 L·min-1，雾化气体流量0.99 L·min-1，辅助气体流量0.90 L·min-1，采样深度10.0 mm;雾化室温度2℃，重复次数3次。

2.3.3样品测定精密称取10批样品（20181101-20181110），按照“2.3.1”的方法和“2.3.2”项下条件分别处理和测定10种微量元素，结果见表2。

2.4氨基酸分析

2.4.1参考文献方法[7]制备茚三酮溶液，样品稀释液和流动相。

2.4.2样品的制备精密称取样品粉末约0.3g于水解管中，加6 mol/L的盐酸6 mL，苯酚9 mg，充氮气，融封，置110℃干燥箱中水解22 h，冷却后滤过至蒸发皿中，蒸干，残渣加超纯水溶解并稀释至25 ml，摇匀，精密量取2 mL，用样品稀释液定容至10 mL，备用。

2.4.3标准品溶液的制备精密量取混合对照品溶液适量，用样品稀释液逐级稀释为10、20、40、60、80、100 mmol/mL的系列混合标准溶液。

2.4.4色谱条件色谱柱：LCA KO6/Na分离柱4.6×150 mm;流速：洗脱泵0.45 mL/min，衍生泵0.25 mL/min;检测波长：570 nm和440 nm，柱温：57℃;进样体积：50μL。梯度洗脱（0～2.5 min，100%A;2.5～11.0 min，85%A;11.0～17.0 min，80%A;17.0～23.0 min，67%A;23.0～29.0 min，20%A;29.0～42.0 min，100%B）。

2.4.5样品测定精密称取10批（20181101-20181110）样品，按“2.4.2”的方法和“2.4.4”项下条件分别处理和测定，采用外标一点法計算各氨基酸的含量。结果见表3。

3讨论

本研究从棒毛络新妇脂溶性提取物中共分离鉴定了26个化学成分，其中，油酸乙酯和亚油酸乙酯含量较高，油酸乙酯主要作为润滑剂;亚油酸乙酯为多不饱和脂肪酸类物质，能调节人体的脂质代谢，治疗和预防心脑血管疾病，促进生长发育，具有防癌抗癌作用，参与机体免疫调节[8]。

本实验采用ICP-MS法同时测定棒毛络新妇中10种元素的含量，结果显示棒毛络新妇中富含人体必需微量元素Fe、Zn、Sr、Cr、Se、Ni和Mo，这些元素是人体重要生理功能的物质基础，对人体健康具有积极意义[9]。其中Fe和Zn的含量较高，Fe参与血红蛋白的形成，具有造血功能;Zn对人体健康有重要的调控功能，可以增强免疫力，加快生长发育，缺乏可导致细菌、病毒等反复感染[10]。另外，两种重金属元素As和Pb的含量符合2012年我国颁布的《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》对重金属含量的限度要求：As≤2.0 ug/g、Pb≤5.0 ug/g。

由本研究表6可知，检测的17种氨基酸中，含6种人体必需氨基酸，药效氨基酸约占氨基酸总量的53%。其中甘氨酸和谷氨酸的含量较高。甘氨酸有神经活动抑制性的递质作用，对生物体内代谢调节起重要作用;谷氨酸为主要的鲜味氨基酸，可以参与肌肉、肝脏和大脑等组织的解毒活动。

本实验研究结果证实，棒毛络新妇不仅是人类重要的药食资源，还具有一定的营养价值，是极具开发利用的可更新的自然资源。但此次研究样品采集地单一，所检测的数据不足以代表我国棒毛络新妇的整体情况，因此还需进一步探讨。

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基金项目 ： 国家地方联合工程研究中心创新能力建设项目（云发改高技[2015]395）;云南省科技创新平台建设项目（2015DG030）;云南省应用基础研究青年项目（2016FD074）;云南省重大科技专项计划（202002AA100007）。

作者简介 ; 李文锐（1987-），女，本科，主管药师，研究方向：食品药品检验检测。

通讯作者 ： 杨自忠（1969-），男，博士，教授，研究方向：蛛形动物资源及开发利用。