补骨脂环己烷溶性化学成分的研究

杨秀伟，吕 倩，许青霞，徐 嵬，张英涛

•化学成分 •

补骨脂环己烷溶性化学成分的研究

杨秀伟，吕 倩，许青霞，徐 嵬，张英涛

北京大学药学院 天然药物学系，天然药物及仿生药物国家重点实验室，北京 100191

研究补骨脂70%乙醇水提取物的环己烷溶性部分的化学成分。采用硅胶、高效液相色谱等柱色谱方法进行分离纯化，通过化合物的谱学数据鉴定其结构。从补骨脂70%乙醇水提取物的环己烷溶性部分分离出21个化合物，分别鉴定为补骨脂醚（1）、对羟基苯甲醛（2）、邻苯二甲酸二异辛酯（3）、补骨脂醚酚G（4）、补骨脂醚酚H（5）、双补骨脂酚V（6）、双补骨脂酚I（7）、双补骨脂酚H（8）、双补骨脂酚F（9）、双补骨脂酚D（10）、双补骨脂酚G（11）、豆甾醇（12）、补骨脂查耳酮（13）、补骨脂定（14）、补骨脂二氢黄酮甲醚（15）、异补骨脂素（16）、补骨脂素（17）、豆甾醇-3--β--吡喃葡萄糖苷-6′--棕榈酸酯（18）、4-羟基合生果素（19）、新补骨脂宁（20）和6-异戊烯基柚皮素（21）。化合物1、4、5和6为4个新的化合物。

补骨脂；豆科；补骨脂醚；补骨脂醚酚G；补骨脂醚酚H；双补骨脂酚V

传统中药补骨脂为豆科植物L[(L.) Mefik.]的干燥成熟果实[1]。药如其名，自《雷公炮灸论》以来，中医一直认为补肾阳以壮骨是补骨脂最主要的功效。补骨脂原产于我国云南、四川；常生长于山坡、溪边、田边，河北、山西、甘肃、安徽、江西、河南、广东、广西、贵州、重庆等省区有栽培；柬埔寨、印度、缅甸、斯里兰卡等国家也有分布[2]。中药物质基础研究是中药守正、继承、发展、创新的关键基础科学问题[3]。在对补骨脂物质基础的系列研究中，本课题组曾报道了补骨脂中的杂萜[4-8]、苯并呋喃[9]、香豆素、黄酮和生物碱[9-10]等类化合物，以及某些化合物的生物学活性[8–11]。本研究从补骨脂的70%乙醇水提取物的环己烷溶性部分分离鉴定出21个化合物，分别为补骨脂醚（psoracorylifether，1）、对羟基苯甲醛（-hydroxybenzaldehyde，2）、邻苯二甲酸二异辛酯（diisooctyl phthalate，3）、补骨脂醚酚G（psoracorylifol G，4）、补骨脂醚酚H（psoracorylifol H，5）、双补骨脂酚V（bisbakuchiol V，6）、双补骨脂酚I（bisbakuchiol I，7）、双补骨脂酚H（bisbakuchiol H，8）、双补骨脂酚F（bisbakuchiol F，9）、双补骨脂酚D（bisbakuchiol D，10）、双补骨脂酚G（bisbakuchiol G，11）、豆甾醇（stigmasterol，12）、补骨脂查耳酮（bavachalcone，13）、补骨脂定（psoralidin，14）、补骨脂二氢黄酮甲醚（bavachinin，15）、异补骨脂素（isopsoralen，16）、补骨脂素（psoralen，17）、豆甾醇-3--β--吡喃葡萄糖苷-6′--棕榈酸酯（stigmasterol-3--β-- glucopyranosyl-6′--palmitate，18）、4-羟基合生果素（4-hydroxylonchocarpin，19）、新补骨脂宁（neocorylin，20）和6-异戊烯基柚皮素（6-prenylnaringenin，21）。化合物1、4、5和6是4个新的化合物（图1）。

图1 化合物1、4～6的化学结构

1 仪器与材料

XT-4型双目显微熔点测定仪（北京泰克仪器有限公司）；Autopol III型旋光仪（Rudolph Research Analytical，Flanders，NJ，美国）；Nicolet Nexues-470 FT-IR红外光谱仪（Thermo Nicolet Inc.，Madison，WI，美国），KBr压片；Varian Cary-300型紫外光谱仪（Varian Inc.，Palo Alto，CA，美国）：Finnigan TRACE 2000 GC-MS质谱仪（EI-MS；Thermo Finnigan Inc.，San Jose，CA，美国）；Thermo Scientific™ Exactive™ GC Orbitrap™ GC-MS高分辨质谱仪（Thermo Scientific公司，美国）；MDS SCIEX API QSTAR型质谱仪（ESI-TOF-MS；Applied Biosystems/MDS Sciex.，Foster，CA，美国）和Waters Xevo G2 Q-TOF高分辨电喷雾离子源质谱仪（HR-ESI-TOF-MS；Waters，Milford，MA，美国）；Bruker AV III 400型核磁共振波谱仪（NMR；Bruker BioSpin AG Facilities，Fällanden，瑞士），四甲基硅烷为内标。反相制备高效液相色谱仪为LC 3000 HPLC系统（北京创新通恒科技有限公司），配置P3050二元泵，CXTH-3000色谱工作站；色谱柱为Phenomenex Prodigy ODS（250 mm×21.2 mm，10 µm；Phenomenex Inc.，Torrance，CA，美国）。GF254薄层色谱硅胶板（TLC）分别为青岛海洋化工厂和Merck公司（Darmstadt，德国）产品，用于引导色谱组分合并；200～300目柱色谱用硅胶为青岛海洋化工厂生产；聚酰胺为台州市路桥四甲生化塑料厂产品；60-ODS-BP型ODS柱色谱填料为日本大曹（Daisogel）公司产品；Sephadex LH-20为Amersham Biosciences（Uppsala，瑞典）产品；分析纯石油醚、环己烷、醋酸乙酯、三氯甲烷、丙酮、甲醇、乙腈为北京市通广精细化工公司产品。

补骨脂药材于2016年10月采集于云南省临沧市耿马县，经北京大学杨秀伟教授鉴定为豆科补骨脂属植物补骨脂L. 的干燥成熟果实，凭证标本（BGZ201610）存放于北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室。

2 提取与分离

47.9 kg的补骨脂粉末经70%乙醇水回流提取、环己烷萃取和硅胶柱色谱（SCC）处理，得到26个流分Fr. A～Z[8]。

Fr. B（27.2 g）经SCC（650 mm×55 mm），用石油醚-醋酸乙酯（100∶1、50∶1、25∶1、7∶1、5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、0∶100）梯度洗脱，TLC分析，得到15个流分Fr. B-1～B-15。

Fr. B-6（8.2 g）经SCC（450 mm×55 mm），石油醚-丙酮（400∶1、150∶1、90∶1、45∶1、15∶1、8∶1、1∶1、1∶100）梯度洗脱，得到11个流分Fr. B-6-1～B-6-11。Fr. B-6-5经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱；再经制备HPLC（乙腈-甲醇58∶42）纯化，得到化合物1（6 mg，R＝20 min）。Fr. B-6-11经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱；再经乙腈-水（25∶75）洗脱，得到化合物2（15 mg，R＝12 min）。Fr. B-7（1.0 g）经SCC（300 mm×30 mm），石油醚-三氯甲烷（50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、0∶1）梯度洗脱；再经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱；然后再经乙腈-水（90∶10）洗脱，得到化合物3（8 mg，R＝50 min）。Fr.B-8（2.1 g）经反相SCC，乙腈-水（40∶60～100∶1）洗脱，得到13个流分Fr. B-8-1～B-8-13。Fr.B-8-5经制备HPLC（乙腈-水95∶5）纯化，得到补骨脂醚酚A（bakuchiol ether A[6]；5 mg，R＝85 min）。Fr.B-8-12经制备HPLC（乙腈-水70∶30）纯化，得到补骨脂酚（bakuchiol[8]；30 mg，R＝72 min）。Fr. C（136.0 g）经SCC（600 mm×120 mm），用石油醚-醋酸乙酯（100∶1、50∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1、5∶2、1∶1、0∶100）梯度洗脱，得到16个流分Fr. C-1～C-16。Fr. C-4（21.7 g）经SCC（650 mm×55 mm），用石油醚-三氯甲烷（100∶1、50∶1、10∶1、5∶2、1∶1、0∶100）梯度洗脱，得到7个流分Fr. C-4-1～C-4-7。Fr. C-4-6经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱；再经制备HPLC（乙腈-水52∶48）纯化，得到12,13-二氢-12,13-环氧补骨脂酚（12,13-dihydro-12,13-epoxybakuchiol[8]；21 mg，R＝55 min）。Fr.C-4-7经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱，再经制备HPLC（乙腈-水93∶7）纯化，得到双补骨脂酚M（bisbakuchiol M[6]；230 mg，R＝45 min）和补骨脂酚醚B（bakuchiol ether B[6]；60 mg，R＝80 min）。Fr.C-5（20.0 g）经反相SCC，甲醇-水（80∶20～100∶1）洗脱，得到9个流分Fr. C-5-1～C-5-9。Fr. C-5-9经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱，再经制备HPLC（乙腈-水93∶7）纯化，得到补骨脂酚醚C（bakuchiol ether C[6]；34 mg，R＝71 min）。Fr.C-6（0.8 g）经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱；再经制备HPLC（乙腈-水40∶60）纯化，得到Δ3-2-羟基补骨脂酚（Δ3-2-hydroxybakuchiol[8]；4 mg，R＝63 min）。Fr.C-10（2.1 g）经半制备HPLC（乙腈-水90∶10）纯化，得到7个流分Fr. C-10-1～C-10-7。Fr. C-10-3经制备HPLC（乙腈-水52∶48）纯化，得到化合物4（4 mg，R＝55 min）、12-氧代补骨脂酚(12- oxobakuchiol[8]；3 mg，R＝65 min) 和化合物5（4 mg，R＝74 min）。Fr.C-10-5经制备HPLC（乙腈-水52∶48）纯化，得到补骨脂醚酚B（psoracorylifol B[8]；37 mg，R＝74 min）。Fr. C-10-6经制备HPLC（乙腈-水52∶48）纯化，得到补骨脂醚酚C（psoracorylifol C[8]；48 mg，R＝86 min）。Fr. C-11（2.1 g）经半制备HPLC（乙腈-水90∶10）处理后再经制备性TLC（石油醚-三氯甲烷10∶1）分离，得到(12′)-双补骨脂酚C [(12′)-bisbakuchiol C[8]；20 mg，R＝71 min]和双补骨脂酚N（bisbakuchiol N[6]；104 mg，R＝252 min）。Fr. C-14（1.1g）经半制备HPLC（乙腈-水90∶10）分离后再经制备HPLC（乙腈-水52∶48）纯化，得到Δ1,3-补骨脂酚（Δ1,3-bakuchiol[8]；4 mg，R＝35 min）。Fr. D（335.0 g）经SCC（800 mm×140 mm），用石油醚-三氯甲烷（100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶3、0∶100）梯度洗脱，得到14个流分Fr. D-1～D-14。Fr. D-4（20.7g）经反相SCC，甲醇-水（45∶55～100∶1）洗脱，得到13个流分Fr. D-4-1～D-4-13。Fr. D-4-12经制备HPLC（甲醇-水93∶7）纯化，得到双补骨脂酚T（bisbakuchiol T[6]；15 mg，R＝131 min）和双补骨脂酚U（bisbakuchiol U[6]；28 mg，R= 136 min）。Fr. D-7（1.7g）经半制备HPLC（甲醇-水94∶6）分离，得到12个流分Fr. D-7-1～D-7-12。Fr. D-7-1经制备HPLC（乙腈-水52∶48）纯化，得到13-甲氧基异补骨脂酚（13-methoxyisobakuchiol[8]；14 mg，R＝63 min）。Fr.D-7-4经制备HPLC（乙腈-水90∶10）纯化，得到双补骨脂酚O（bisbakuchiol O[6]；5 mg，R＝95 min）和双补骨脂酚P（bisbakuchiol P[6]；2 mg，R＝87 min）。Fr. D-9（37.0 g）经SCC（650 mm×55 mm），用石油醚-三氯甲烷（100∶1、50∶1、20∶1、10∶ 1、9∶1、8∶1、7∶1、6∶1、5∶1、4∶1、3∶1、1∶1、1∶3、0∶100）梯度洗脱，得到28个流分Fr. D-9-1～D-9-28。Fr. D-9-13经制备HPLC（甲醇-水92∶8）纯化，得到双补骨脂酚Q（bisbakuchiol Q[6]；11 mg，R＝77 min）、双补骨脂酚R（bisbakuchiol R[6]；9 mg，R＝100 min）、双补骨脂酚S（bisbakuchiol S[6]；19 mg，R＝110 min）和化合物6（6 mg，R＝126 min）。Fr. D-9-25经制备HPLC（甲醇-水92∶8）纯化，得到化合物7（18 mg，R＝86 min）、8（25 mg，R＝92 min）、双补骨脂酚B（bisbakuchiol B[8]；15 mg，R＝118 min）和双补骨脂酚A（bisbakuchiol A[8]；26 mg，R＝124 min）。Fr. D-9-26经半制备HPLC（甲醇-水92∶8）纯化，得到化合物9（15 mg，R＝76 min）。Fr.D-11（19.2 g）经反相SCC，甲醇-水（45∶55～100∶1）洗脱，得到27个流分Fr. D-11-1～D-11-27。Fr. D-11-25（5.9 g）经SCC（500 mm×35 mm），用石油醚-三氯甲烷（8∶1、7∶1、6∶1、5∶1、4∶1、3∶1、1∶1、1∶3、0∶100）梯度洗脱，得到18个流分Fr. D-11-25-1～D-11-25-18。Fr. D-11-25-12经制备HPLC（乙腈-水75∶25）纯化，得到化合物10（14 mg，R＝286 min）和11（15 mg，R＝328 min）。Fr. D-12（2.4 g）经半制备HPLC（乙腈-水90∶10）分离，得到13个流分Fr. D-12-1～D-12-13。Fr.D-12-2经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱；再经半制备HPLC（乙腈-水26∶74）纯化，得到12,13-二氢- 12,13-环氧补骨脂酚（12,13-dihydro-12,13- epoxybakuchiol[8]；27 mg，R＝160 min）。Fr. E（6.8 g）经SCC（400 mm×45 mm），用三氯甲烷洗脱，得到10个流分Fr. E-1～E-10，析出沉淀，经甲醇重结晶，得到化合物12（1.7 g）和13（300 mg）。Fr. E～G段析出沉淀，沉淀经甲醇重结晶，分别得到化合物14（23 mg）、15（26 mg）、16（630 mg）、17（2 g）和18（30 mg）。Fr. H（31.0 g）经聚酰胺柱色谱（650 mm×55 mm），三氯甲烷-甲醇洗脱，得到17个流分Fr. H-1～H-17。Fr. H-5（2.1 g）经半制备 HPLC（乙腈-水50∶50）洗脱，得到9个流分Fr. H-14-1～H-5-9。Fr. H-5-4经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱；再经制备HPLC（乙腈-水60∶40）纯化，得到化合物19（140 mg，R＝65 min）。Fr. H-5-5经制备HPLC（乙腈-水52∶48）纯化，得到化合物20（31 mg，R＝95 min）。Fr.H-12经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱；再经制备HPLC（乙腈-水48∶52）纯化，得到化合物21（34 mg，R＝76 min）。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色油状物；EI-MS/: 322 [M]+；HR-EI-MS给出分子式为C23H30O，实测值为322.229 1（理论值322.229 7，C23H30O），与根据NMR数据推出的分子组成一致。化合物1的＋10.0° (0.1, MeOH)；(nm): 247 (4.41), 254 (4.39)；(cm−1): 1636（双键）、1607、1508、1463（芳香环）。将化合物1的NMR波谱与补骨脂酚[8]的比较和进行1H-1H COSY、HSQC、HMBC实验（图2），除补骨脂酚芳环氢谱的1, 4-AA′XX′系统转变为ABX系统外，尚多出1组补骨脂酮G（bavachinone G）的苯并吡喃环信号[7][H: 6.31 (1H, d,= 9.8 Hz, H-21), 5.61 (1H, d,= 9.8 Hz, H-20), 1.42 (6H, s, CH3-22, CH3-23)；C: 76.3 (s, C-19), 131.0(d, C-20), 122.3 (d, C-21), 27.9 (q, C-22, 23)]。该化合物为新化合物，命名为补骨脂醚。

根据2D NMR实验全归属了化合物1的氢、碳信号。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.99 (1H, d,=2.2 Hz, H-2), 6.71 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5), 7.11 (1H, dd,= 8.3, 2.2 Hz, H-6), 6.22(1H, d,= 16.2 Hz, H-7), 6.04 (1H, d,= 16.2 Hz, H-8), 1.49 (2H, m, H-10), 1.95 (2H, m, H-11), 5.10 (1H, t,= 7.2 Hz, H-12), 1.58 (3H, s, H3-14), 1.67 (3H, s, H3-15), 1.19 (3H, s, H3-16), 5.87 (1H, dd,= 17.5, 11.0 Hz, H-17), 5.00 (1H, dd,= 17.5, 1.3 Hz, H-18a), 5.03 (1H, dd,= 11.0, 1.3 Hz, H-18b), 5.61 (1H, d,= 9.8 Hz, H-20), 6.31 (1H, d,= 9.8 Hz, H-21), 1.42 (6H, s, 22, CH3-23)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 130.7 (s, C-1), 123.8 (d, C-2), 121.2 (s, C-3), 152.2 (s, C-4), 116.3 (d, C-5), 126.9 (d, C-6), 126.6 (d, C-7), 135.6 (d, C-8), 42.5 (s, C-9), 41.3 (t, C-10), 23.2 (t, C-11), 124.8 (d, C-12), 131.3 (s, C-13), 17.7 (q, C-14), 25.7 (q, C-15), 23.4 (q, C-16), 146.0 (d, C-17), 111.8 (t, C-18), 76.3 (s, C-19), 131.0 (d, C-20), 122.3 (d, C-21), 27.9 (q, C-22, 23)。

图2 化合物1的1H-1H COSY (▬) 和主要的HMBC (H→C) 相关性

化合物2：白色粉末（甲醇）；EI-MS: 122 [M]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 9.86 (1H, s, -CHO), 7.82 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2, 6), 6.98 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3, 5)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 191.3 (-CHO), 129.8 (C-1), 132.6 (C-2, 6), 116.0 (C-3, 5), 161.7 (C-4)。以上数据与文献报道一致[12-13]，故鉴定化合物2为对羟基苯甲醛。

化合物3：白色粉末（甲醇）；ESI-MS: 391 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 0.91 (9H, m), 1.32 (13H, m), 1.68 (2H, dd,= 12.4, 6.2 Hz), 4.22 (2H, m), 7.54 (1H, dd,= 5.7, 3.3 Hz), 7.70 (1H, dd,= 5.7, 3.3 Hz)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 130.9 (C-1, 2), 128.8 (C-3, 6), 132.4 (C-4, 5), 167.8 (C-7, 8), 68.1 (C-11, 19), 30.3 (C-12, 20), 23.0 (C-13, 21), 28.9 (C-14, 22), 38.7 (C-15, 23), 28.9 (C-16, 24), 14.0 (C-17, 25), 10.9 (C-18, 26)。以上数据与文献报道基本一致[14-15]，故鉴定化合物3为邻苯二甲酸二异辛酯。

根据2D NMR实验（图3）全归属了化合物4的氢、碳信号。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.06 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2, 6), 6.75 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3, 5), 2.95 (1H, dd,= 12.0, 1.9 Hz, H-7), 3.47 (1H, d,= 1.9 Hz, H-8), 1.81 (1H, m, H-10a), 1.60 (1H, m, H-10b), 1.69 (1H, td,= 12.0, 4.0 Hz, H-11a), 1.59 (1H, m, H-11b), 2.84 (1H, td,= 12.0, 4.0 Hz, H-12), 4.66 (1H, brs, H-14a), 4.59 (1H, brs, H-14b), 1.48 (3H, s, H3-15), 1.07 (3H, s, H3-16), 5.95 (1H, dd,= 17.7, 11.1 Hz, H-17), 5.15 (1H, dd,= 17.7, 1.0 Hz, H-18a), 5.19 (1H, dd,= 11.1, 1.0 Hz, H-18b), 4.78 (1H, brs, 8-OH)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 134.7 (s, C-1), 129.8 (d, C-2, 6), 115.2 (d, C-3, 5), 153.9 (s, C-4), 46.5 (d, C-7), 78.7 (d, C-8), 41.4 (s, C-9), 30.5 (t, C-10), 28.5 (t, C-11), 41.7 (d, C-12), 148.0 (s, C-13), 111.8 (t, C-14), 19.0 (q, C-15), 27.0 (q, C-16), 144.9 (d, C-17), 113.3 (t, C-18)。

图3 化合物4的1H-1H COSY (▬)、主要的HMBC (H→C) 相关性和NOESY (H↔H)

根据2D NMR实验，全归属了化合物5的氢、碳信号。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.25 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2, 6), 6.79 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3, 5), 5.06 (1H, d,= 2.7 Hz, H-7), 4.13 (1H, d,= 2.7 Hz, H-8), 1.70 (1H, brd,= 9.5 Hz, H-10a), 1.61 (1H, brd,= 9.5 Hz, H-10b), 1.84 (1H, m, H-11a), 1.36 (1H, m, H-11b), 1.99 (1H, m, H-12), 1.04 (3H, s, H3-14), 1.61 (3H, d,= 8.9 Hz, H3-15), 1.05 (3H, s, H3-16), 5.99 (1H, dd,= 17.7, 10.9 Hz, H-17), 5.04 (1H, dd,= 17.7, 1.0 Hz, H-18a), 5.09 (1H, dd,= 10.9, 1.0 Hz, H-18b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 135.7 (s, C-1), 127.7 (d, C-2, 6), 115.4 (d, C-3, 5), 155.1 (s, C-4), 79.2 (d, C-7), 91.3 (d, C-8), 43.1 (s, C-9), 33.2 (t, C-10), 28.0 (t, C-11), 43.8 (d, C-12), 114.4 (s, C-13), 16.8 (q, C-14), 26.7 (q, C-15), 23.1 (q, C-16), 146.8 (d, C-17), 111.9 (t, C-18)。

图4 化合物5的1H-1H COSY (▬)、主要的HMBC (H→C)相关性和NOESY (H↔H)

根据2D NMR实验，全归属了化合物6的氢、碳信号。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.19 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2, 6), 6.74 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3, 5), 6.25 (1H, d,= 16.2 Hz, H-7), 6.08 (1H, d,= 16.2 Hz, H-8), 1.49 (2H, m, H-10), 1.93 (2H, m, H-11), 5.10(1H, brt,= 7.3 Hz, H-12), 1.58 (3H, s, 14-CH3), 1.67 (3H, s, 15-CH3), 1.19 (3H, s, 16-CH3), 5.87 (1H, dd,= 17.7, 10.7 Hz, H-17), 5.01 (1H, dd,= 17.7, 1.3 Hz, H-18a), 5.03 (1H, dd,= 10.7, 1.3 Hz, H-18b), 7.21 (1H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.75 (1H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 4.09 (1H, d,= 9.2 Hz, H-7′), 3.77 (1H, d,= 9.2 Hz, H-8′), 1.63 (1H, m, H-10′a), 1.30 (1H, m, H-10′b), 1.78 (2H, m, H-11′), 3.11(1H, m, H-12′), 0.85 (3H, s, 14′-CH3), 0.51 (3H, s, 15′-CH3), 1.29 (3H, s, 16′-CH3), 6.10 (1H, dd,= 17.7, 10.9 Hz, H-17′), 4.97 (1H, dd,= 17.7, 1.6 Hz, Ha-18′), 4.92 (1H, dd,= 10.9, 1.6 Hz, Hb-18′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 132.8 (s, C-1), 126.4 (d, C-2, 6), 123.6 (d, C-3, 5), 155.1 (s, C-4), 136.5 (d, C-7), 136.5 (d, C-8), 42.5 (s, C-9), 41.2 (t, C-10), 23.2 (t, C-11), 124.8 (d, C-12), 131.3 (s, C-13), 17.6 (q, C-14), 25.7 (q, C-15), 23.3 (q, C-16), 145.9 (d, C-17), 111.9 (t, C-18), 132.3 (s, C-1′), 130.4 (d, C-2′, 6′), 114.7 (d, C-3′, 5′), 154.1 (s, C-4′), 81.1 (d, C-7′), 81.6 (d, C-8′), 38.6 (s, C-9′), 29.1 (t, C-10′), 19.9 (t, C-11′), 76.4 (d, C-12′), 81.7 (s, C-13′), 21.0 (q, C-14′), 23.3 (q, C-15′), 24.7 (q, C-16′), 146.0 (d, C-17′), 108.5 (t, C-18′)。

图5 化合物6的1H–1H COSY (▬) 和主要的HMBC (H→C) 相关

化合物12：白色针晶（甲醇）；ESI-MS/: 413.0 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.34 (1H, t-like,= 4.6 Hz, H-6), 5.15 (1H, dd,= 15.1, 8.5 Hz, H-22), 5.01 (1H, dd,= 15.1, 8.5 Hz, H-23), 3.51 (1H, m, H-3), 1.01 (3H, s, 19-CH3), 0.92 (1H, d,= 6.4 Hz, 21-CH3), 0.84 (3H, t,= 6.3 Hz, 29-CH3), 0.80 (6H, d,= 6.7 Hz, 26, 27-CH3), 0.70 (3H, s, 18-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 37.2 (C-1), 31.9 (C-2), 71.8 (C-3), 42.2 (C-4), 140.7 (C-5), 121.7 (C-6), 31.7 (C-7), 31.9 (C-8), 50.1 (C-9), 36.5 (C-10), 21.2 (C-11), 40.5 (C-12), 42.3 (C-13), 55.9 (C-14), 24.4 (C-15), 28.9 (C-16), 56.7 (C-17), 12.3 (C-18), 19.4 (C-19), 39.7 (C-20), 21.1 (C-21), 138.3 (C-22), 129.2 (C-23), 51.2 (C-24), 31.9 (C-25), 21.1 (C-26), 21.1 (C-27), 25.4 (C-28), 12.0 (C-29)。以上数据与文献报道一致[19]，故鉴定化合物12为豆甾醇。

化合物13：红色方晶（石油醚-醋酸乙酯），mp 154～156 ℃；EI-MS/: 338 [M]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.43 (1H, d,= 15.4 Hz, H-α), 7.83 (1H, d,= 15.4 Hz, H-β), 7.56 (2H, dd,= 8.6, 2.7 Hz, H-2, 6), 6.89 (2H, dd,= 8.6, 2.7 Hz, H-3, 5), 6.44 (1H, s, H-3′), 7.59 (1H, s, H-6′), 3.26 (2H, dd,= 7.2, 1.3 Hz, H-1), 5.28 (1H, tt,= 7.2, 1.3 Hz, H-2), 1.77 (3H, s, H-4), 1.74 (3H, s, H-5), 3.87 (3H, s, 4′-OMe), 13.51 (1H, brs, 2′-OH)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 191.9 (C=O), 118.1 (C-α), 143.9 (C-β), 127.7 (C-1), 130.5 (C-2, 6), 116.0 (C-3 5), 158.1 (C-4), 113.4 (C-1′), 164.1 (C-2′), 99.4 (C-3′), 165.3 (C-4′), 121.6 (C-5′), 129.7 (C-6′), 28.0 (C-1″), 122.3 (C-2″), 132.9 (C-3″), 17.9 (C-4″), 25.8 (C-5″), 55.7 (4′-OMe)。以上数据与文献报道一致[20]，故鉴定化合物13为补骨脂查耳酮。

化合物14：白色粉末（甲醇）；EI-MS/: 336 [M]+。1H-NMR (400 MHz, pyridine-5): 7.87 (1H, s, H-5), 7.17 (1H, s, H-8), 7.48 (1H, d,= 2.0 Hz, H-3′), 7.34 (1H, d,= 8.4, 2.0 Hz, H-5′), 8.17 (1H, d,= 8.4 Hz, H-6′), 5.67 (1H, tt,= 7.4, 1.3 Hz, H-2″), 3.72 (2H, brd,= 7.4 Hz, H-1″), 1.74 (3H, s, 4″-Me), 1.78 (3H, s, 5″-Me), 13.13 (1H, s, 7-OH), 12.24 (1H, s, 4′-OH)；13C-NMR (100 MHz, pyridine-5): 158.5 (C-2), 104.7 (C-3), 160.3 (C-4), 121.5 (C-5), 127.4 (C-6), 160.3 (C-7), 102.9 (C-8), 153.9 (C-9), 103.1 (C-10), 114.6 (C-1′), 156.9 (C-2′), 99.4 (C-3′), 156.9 (C-4′), 115.9 (C-5′), 121.5 (C-6′), 28.4 (C-1″), 121.7 (C-2″), 133.1 (C-3″), 17.6 (C-4″), 25.6 (C-5″)。以上数据与文献报道一致[20]，故鉴定化合物14为补骨脂定。

化合物15：白色针晶（甲醇），mp 154～155 ℃；EI-MS/:338 [M]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.38 (1H, dd,= 13.3, 2.9 Hz, H-2), 3.04 (1H, dd,= 16.9, 13.4 Hz, H-3α), 2.78 (1H, dd,= 16.9, 2.9 Hz, H-3β), 7.69 (1H, s, H-5), 6.44 (1H, s, H-8), 3.84 (3H, s, 7-OMe), 7.34 (2H, brd,= 8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.90 (2H, brd,= 8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.77 (1H, s, 4′-OH), 3.24 (2H, brd,= 7.3 Hz, H-1″), 5.27 (1H, tt,= 7.3, 1.3 Hz, H-2″), 1.74 (3H, s, H-4″), 1.69 (3H, s, H-5″)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 79.8 (C-2), 44.0 (C-3), 191.5 (C-4), 127.1 (C-5), 124.9 (C-6), 164.3 (C-7), 98.8 (C-8), 162.4 (C-9), 113.8 (C-10), 55.8 (7-OMe), 130.8 (C-1′), 127.9 (C-2′, 6′), 115.7 (C-3′, 5′), 156.2 (C-4′), 27.8 (C-1″), 121.7 (C-2″), 133.1 (C-3″), 25.8 (C-4″), 17.7 (C-5″)。以上数据与文献报道一致[21]，故鉴定化合物15为补骨脂二氢黄酮甲醚。

化合物16：白色针晶（石油醚-醋酸乙酯），mp 137～138 ℃；EI-MS/: 186 [M]+；1H-NMR(400 MHz, CDCl3): 6.39 (1H, d,= 9.6 Hz, H-3), 7.81 (1H, d,= 9.6 Hz, H-4), 7.43 (1H, d,= 8.6 Hz, H-5), 7.37 (1H, d,= 8.6 Hz, H-6), 7.69 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 7.12 (1H, d,= 2.0 Hz, H-3′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 160.8 (C-2), 114.0 (C-3), 144.5 (C-4), 123.8 (C-5), 108.7 (C-6), 157.3 (C-7), 116.8 (C-8), 148.4 (C-9), 113.4 (C-10), 145.8 (C-2′), 104.0 (C-3′)。以上数据与文献报道一致[20]，故鉴定化合物16为异补骨脂素。

化合物17：白色针晶（石油醚-醋酸乙酯），mp 162～163 ℃；EI-MS/: 186 [M]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.38 (1H, d,= 9.6 Hz, H-3), 7.80 (1H, d,= 9.6 Hz, H-4), 7.68 (1H, s, H-5), 7.46 (1H, s, H-8), 7.70 (1H, d,= 2.2 Hz, H-2′), 6.84 (1H, d,= 2.2 Hz, H-3′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 161.0 (C-2), 114.6 (C-3), 144.0 (C-4), 119.8 (C-5), 124.8 (C-6), 156.3 (C-7), 99.8 (C-8), 152.0 (C-9), 115.4 (C-10), 146.9 (C-2′), 106.3 (C-3′)。以上数据与文献报道一致[20]，故鉴定化合物17为补骨脂素。

化合物18：白色针晶（三氯甲烷），mp 168～170 ℃；ESI-MS: 835 [M＋Na]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 4.38 (1H, m, H-3), 5.36 (1H, t-like,= 4.6 Hz, H-6), 0.69 (3H, s, 18-CH3), 1.00 (3H, s, 19-CH3), 1.03 (3H, d,= 6.6 Hz, 19-CH3), 5.14 (1H, dd,= 15.1, 8.6 Hz, H-22), 5.01 (1H, dd,= 15.1, 8.6 Hz, H-23), 0.91 (3H, d,= 6.4 Hz, 26-CH3), 0.88 (3H, d,= 7.0 Hz, 27-CH3), 0.80 (3H, t,= 6.7 Hz, 29-CH3), 4.37 (1H, d,= 7.6 Hz, H-1′), 3.26～3.58 (4H, overlapped, H-2′～5′), 4.40 (1H, dd,= 11.9, 5.5 Hz, H-6′a), 4.29 (1H, dd,= 11.9, 1.5 Hz, H-6′b), 2.33 (2H, t,= 7.8 Hz, H-2″), 1.25 (24H, overlapped, (CH2)12, H2-3″～H2-14″), 1.64 (2H, m, CH2-15″), 0.88 (3H, t,= 6.8 Hz, CH3-16″)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 37.3 (C-1), 31.8 (C-2), 79.7 (C-3), 42.3 (C-4), 140.3 (C-5), 122.1 (C-6), 31.8 (C-7), 31.9 (C-8), 50.1 (C-9), 36.7 (C-10), 22.7 (C-11), 38.9 (C-12), 39.8 (C-13), 55.9 (C-14), 24.9 (C-15), 28.9 (C-16), 56.8 (C-17), 12.2 (C-18), 18.8 (C-19), 40.5 (C-20), 21.3 (C-21), 138.3 (C-22), 129.3 (C-23), 51.2 (C-24), 31.9 (C-25), 21.1 (C-26), 19.3 (C-27), 25.4 (C-28), 12.0 (C-29), 101.2 (C-1′), 73.4 (C-2′), 76.0 (C-3′), 70.2 (C-4′), 73.8 (C-5′), 63.4 (C-6′), 174.5 (C-1″), 34.2 (C-2″), 25.4 (C-3″), 29.1 (C-4″), 29.3 (C-5″), 29.4 (C-6″), 29.6 (C-7″), 29.7 (C-8″), 29.69 (C-9″), 29.74 (C-10″, 11″), 29.76 (C-12″, 13″), 31.9 (C-14″), 22.7 (C-15″), 14.1 (C-16″)。以上数据与文献报道一致[22]，故鉴定化合物18为3--[6′--棕榈酰基]-β--吡喃葡萄糖基-豆甾醇。

化合物19：黄色粉末（甲醇）；EI-MS/:322 [M]+；1H-NMR (400 MHz, CD3COCD3): 14.07 (1H, s, 2′-OH), 8.99 (1H, s, 4-OH), 7.77 (1H, d,= 15.3 Hz, H-α), 7.82 (1H, d,= 15.3 Hz, H-β), 7.76 (2H, d,= 8.6 Hz, H-2, 6), 6.94 (2H, d,= 8.6 Hz, H-3, 5), 6.38 (1H, d,= 8.9, H-5′), 8.06 (1H, d,= 8.9, H-6′), 5.72 (1H, d,= 10.0 Hz, H-3′′), 6.71 (1H, d,= 10.0, H-4′′), 1.45 (6H, s, H3-5′′, 6′′)；13C-NMR (100 MHz, CD3COCD3): 194.1 (C=O), 119.0 (C-α), 146.5 (C-β), 133.1 (C-1), 132.8 (C-2, 6), 117.7 (C-3, 5), 162.0 (C-4), 110.8 (C-1′), 161.3 (C-2′), 115.8 (C-3′), 162.6 (C-4′), 109.7 (C-5′), 130.1 (C-6′), 79.4 (C-2′′), 128.4 (C-3′′), 117.2 (C-4′′), 29.4 (C-5′′, 6′′)。以上数据与文献报道基本一致[23]，故鉴定化合物19为4-羟基合生果素。

化合物20：白色粉末（甲醇）；EI-MS/: 388 [M]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.92 (1H, s, H-2), 8.13 (1H, d,= 8.8 Hz, H-5), 6.93 (1H, dd,= 8.8, 2.2 Hz, H-6), 6.85 (1H, d,= 2.2 Hz, H-8), 7.18 (1H, d,= 2.2 Hz, H-2′), 6.80 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5′), 7.23 (1H, dd,= 8.4, 2.2 Hz, H-6′), 6.35 (1H, d,= 9.9 Hz, H-1″), 5.56 (1H, d,= 9.9 Hz, H-2″), 1.72 (2H, m, H-4″), 2.10 (2H, m, H-5″), 5.09 (1H, brt,= 7.1 Hz, H-6″), 1.57 (3H, s, H3-8″), 1.65 (3H, s, H3-9″), 1.39 (3H, s, H3-10″)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 152.6 (C-2), 124.8 (C-3), 176.7 (C-4), 128.0 (C-5), 115.4 (C-6), 161.8 (C-7), 102.8 (C-8), 158.1 (C-9), 117.7 (C-10), 124.0 (C-1′), 127.2 (C-2′), 121.1 (C-3′), 153.5 (C-4′), 116.2 (C-5′), 129.6 (C-6′), 122.7 (C-1″), 129.9 (C-2″), 78.9 (C-3″), 41.4 (C-4″), 22.7 (C-5″), 124.0 (C-6″), 131.7 (C-7″), 17.6 (C-8″), 25.7 (C-9″), 26.6 (C-10″)。上述数据与文献报道基本一致[24]，故鉴定化合物20为新补骨脂宁。

4 讨论

尽管许多研究组从补骨脂中分离鉴定出了黄酮[23-24,26-27]和香豆素[28-30]等类化合物，但补骨脂中具有化学结构多样性的还是杂萜类化合物，如单量体补骨脂酚类的、本研究报道的新化合物（1、4、5）及其二聚体新化合物（6）和已知化合物（7～11）。本研究结果进一步丰富了补骨脂的化学成分结构类型多样性，是值得关注的补骨脂潜在效应成分[31]和潜在质量标志物[32]。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Study on chemical constituents from cyclohexane soluble part of

YANG Xiu-wei, LYU Qian, XU Qing-xia, XU Wei, ZHANG Ying-tao

State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, Department of Natural Medicines, School of Pharmaceutical Sciences,Peking University, Beijing 100191, China

To study chemical constituents of cyclohexane soluble part in 70% ethanol aqueous extract of(the fruits of).The compounds were separated and purified by silica gel and high performance liquid column chromatographies, and their structures were determined by spectroscopic data analyses.Twenty-one compounds were obtained and identified as psoracorylifether (1),-hydroxybenzaldehyde (2), diisooctyl phthalate (3), psoracorylifol G (4), psoracorylifol H (5), bisbakuchiol V (6), bisbakuchiol I (7), bisbakuchiol H (8), bisbakuchiol F (9), bisbakuchiol D (10), bisbakuchiol G (11), stigmasterol (12), bavachalcone (13), psoralidin (14), bavachinin (15), isopsoralen (16), psoralen (17), stigmasterol-3--β--glucopyranosyl-6′--palmitate (18), 4-hydroxylonchocarpin (19), neocorylin (20), and 6-prenylnaringenin (21), respectively.Compounds 1, 4, 5, and 6 are four new compounds.

; Leguminosae; psoracorylifether; psoracorylifol G; psoracorylifol H; bisbakuchiol V

R284.1

A

0253 - 2670(2022)11 - 3269 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.11.001

2022-03-10

国家自然科学基金资助项目（81773865）

杨秀伟，男，教授，博士生导师，主要从事中药有效物质基础和药物代谢研究。Tel: (010)82801569 E-mail: xwyang@bjmu.edu.cn

[责任编辑 王文倩]