无菌操作在食品微生物检验中的应用效果

魏茂琪

摘要：目的 分析无菌操作在食品微生物检验中的应用效果。方法 选取本市62例肉类食品，时间2021年04月-2022年04月，用随机数字表法平均分为对照组31例，包括16例猪肉，15例牛肉，行常规方法检验;观察组31例，包括17例猪肉，14例牛肉，行无菌操作检验，比较两组检验效果。结果 观察组的猪肉、牛肉菌落总数均明显低于对照组（P<0.05）。 结论 在食品微生物检验中执行无菌操作，能够显著提升检验效果，具有推广价值。

关键词：无菌操作;食品;微生物检验

近些年来，在食品微生物检验中存在各种问题，超标现象屡禁不止，尤其多发生于肉类食品，威胁到食品安全，成为当下一种热议话题，产生严重影响。提升食品安全质量的关键在于微生物检验，不同检验方法取得结果各不相同，以往常应用常规方法检验，该方式缺乏规范化流程，未严格执行无菌操作，容易致使检验结果出现偏差。本次研究以肉类食品为对象，分析无菌操作的应用效果。

1 资料和方法

1.1一般资料

选取本市62例肉类食品，时间2021年04月-2022年04月，样品来源为昆明市盘龙、官渡、五华、西山四个主城区规范化农贸市场，采取随机抽样的方式。用随机数字表法平均分为对照组31例，包括16例猪肉，15例牛肉;观察组31例，包括17例猪肉，14例牛肉。提前将乳糖、氯化钠和磷酸氢二钾等准备好，做好标记处理。

1.2方法

1.2.1菌落总数检验方法

以无菌操作称取25g样品置盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用均质器拍1min;若样品为液态，不需要均质，震荡混匀，制成1：10的样品匀液。取1mL1：10稀释液注入含有9mL稀释液的试管中，制备1：100稀释液。如上法依次制备10倍系列稀释样品匀液。选择2个～3个适宜的稀释度各吸取1mL稀释液于灭菌平皿，每个稀释度做两个平皿。同时分别取1mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。倾注平板计数琼脂，混匀，琼脂凝固后倒置在恒温培养箱36℃培养，48小时后计数（水产品30℃培养72h）。选取菌落数在30CFU～300CFU的平板，按公式N=∑C/（n1+0.1n2）d计算，结果“四舍五入”后采用两位有效数字报告。

1.2.2菌落总数计算公式

若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式计算：N=∑C/（n1+0.1n2）d

式中：N——样品中菌落数;

∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和;

n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数;

n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数;

d——稀释因子（第一稀释度）

1.2.3测定菌落总数

以《GB4789.2-2016食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》为标准，对菌落总数述展开测定，对样本进行稀释，倍数为10倍，选择2个～3个适宜的稀释度各吸取1mL稀释液于灭菌平皿，每个稀释度做两个平皿，设置空白对照和阴性对照。

1.2.4操作方法

对照组行常规方法检验，按照流程展开各项操作，未遵循无菌理念。观察组行无菌操作检验：①在无菌室内，将操作时间和缓冲時间设置好，确保洁净度达到1万级，定时清扫室内卫生，保证干净整洁，不存在杂物。②采取新洁尔灭溶液，浓度为0.1%，酒精，浓度为75%，展开消毒处理。③对于各项仪器，需严格展开高压灭菌处理，严密包扎。④在检验过程中，应用阴性作为对照，在进行接种时，先采取火焰灼烧方式，展开灭菌处理。⑤选取新洁尔灭溶液，浓度为5%，对吸管和含有菌液的试管进行浸泡，时间为24h，然后冲洗。⑥待营养琼脂培养基融化，并且经过冷却处理达到56℃ 后，注入，含量为15毫升，等到其凝固后，放置于培养箱中，温度为36℃，过48h后，将其取出，确保无菌。展开空白对照，选取空气稀释液1毫升，将其注入营养琼脂培养基中，对器皿发挥出的消毒功效展开评价，判断无菌环境以及存储方式是否符合要求，同时空白对照，能够对无菌技术实施方式提供参考。

1.3观察指标

评价两组菌落总数检出情况：观察两组检出猪肉和牛肉的菌落总数，展开组间对比。

1.4统计学分析

录入SPSS23.0统计学软件中处理。

2 结果

观察组的猪肉、牛肉菌落总数均明显低于对照组，P<0.05。详见表1。

3 讨论

在无菌环境下，对取得的食品样本展开微生物检验，采取无菌设备，分析食品中微生物情况，落实细胞接种技术，促使检验水平提高，避免检验环境或者食品样本中涌入外界微生物。

针对环境，需要确保操作环境洁净且无菌，定时对实验室展开消杀处理，确保无菌防尘，避免样本受到污染。检验员进入室内后，需要少说话、少走动，严格遵循相关标准，执行无菌操作。针对检验员，其需要先将无菌鞋服穿戴好，然后进入室内，对手部展开消毒处理，不能将未经过消毒处理的任何事物带到室内。在对食品进行采集时，需要和样本保持距离，预防自身携带的微生物会对样本产生污染。另外，检验员需要确保动作准确、快速，预防样本在空气中长久暴露，避免杂菌感染。在进行检验前，需要应用高压灭菌、乙醇擦拭等方法，消毒灭菌平板、样本瓶、无菌检验设备、试管和玻片等。将物品摆放好，按照要求将各种物品摆放好，做好维护工作，每次应用前，消毒，引入无菌操作技术。

综上所述，在食品微生物检验中执行无菌操作，能够显著提升检验效果，具有推广价值。

参考文献：

[1]任泓燕. 食品微生物检验样品的采集保存和检验技术[J]. 微量元素与健康研究，2021，38（2）：38-39.

[2]司福龙. 食品微生物快速检验和无菌操作技术[J]. 科技创新导报，2019，16（4）：125+128.

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