连翘茶提取物对大肠杆菌感染小鼠肠道的试验研究

杨雨彤，李晓丹，武晁宁，鱼瀛瀛，柴晓林，李丽娟

（晋中信息学院，山西 太谷 030801）

0 引言

大肠杆菌造成的腹泻是常见疾病和高致死率病症之一，是多种动物感染性腹泻的重要病原，并发现细菌性感染腹泻多见于机体的肠道内。大肠杆菌的持续性危害在全球范围内都有许多报道。研究发现肠道受到外界入侵屏障受损时，肠道可以积极抵御进一步的损害。山西特产连翘茶（Forsythia suspensa），主治清热、解毒、散结、消肿[1-3]。连翘的抗菌谱极广，对常见的链球菌、沙门氏菌等都包含肉眼可见的抑菌效果[4]。利用连翘茶干预大肠杆菌感染的小鼠，对比健康小鼠，探讨连翘茶改善肠道腹泻效果。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

健康雄性SPF级小鼠35只，体重22～32 g，购自太原康宝瑞实验动物技术有限公司；连翘茶，购自山西省晋城市陵川县乡土人家农业综合开发有限公司；大肠杆菌购自上海赫澎生物科技有限公司；石蜡、玻璃片、耐高温塑料染色架、二甲苯溶液、各种浓度酒精、苏木精溶液等购自上海化邦生物科技有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 连翘茶提取物制备

称取茶叶20 g，加蒸馏水300 mL，煮沸后过滤，茶叶放回锅中再加蒸馏水300 mL，煮沸过滤，滤液倒入培养皿中，放置烘干箱100 ℃，待液体浓缩至膏状不流动。取膏体加入定量的蒸馏水中，测得其饱和水溶液为50 mg/ mL，配制50 mL连翘茶饱和水溶液以备灌胃使用。

1.2.2 试验动物模型建立

取健康SPF级雄性小鼠30只，随机分配3组，空白对照组（A组），连翘茶提取物组（B组），连翘茶加大肠杆菌组（C组），剩余的小鼠为试验备用鼠；试验总共进行14 d，A组每天定点灌胃0.2 mL生理盐水；B组每天定点灌胃0.2 mL连翘茶提取物饱和溶液；C组每天定点灌胃0.2 mL连翘茶提取物饱和溶液，第14天灌胃完毕后，腹腔注射0.2 mL大肠杆菌，见表1。

表1 试验动物组别灌胃情况

1.2.3 试验动物处置、标本采集

小鼠称重并眼内眦静脉取血，分别在注射时、2、4、8 h后，测定其血常规。小鼠采取颈椎脱臼法将其处死。打开腹腔，取出小鼠的完整肠道及肝脏；截取结肠、回肠中段约1 cm，用生理盐水漂洗肠道内容物后迅速将样本浸泡至固定液中。

1.2.4 肠道标本检测方法

各小鼠截取结肠、回肠中段约1 cm，通过HE染色技术，观察肠道染色情况，观察连翘茶改善肠道腹泻效果。

2 结果

2.1 体重

小鼠随机分3组，组间无明显差异，经14 d灌胃，AB组体重平稳上升，C组体重明显下降，见表2。

表2 不同天数各组别小鼠体重及存活率

2.2 精神状态

大体观察可见A组小鼠精神状态较试验前无明显变化，良好，活泼、被毛有光泽，活泼好动；B组小鼠精神轻微低沉，被毛轻微毛躁发干、有少许光泽，稍有活动、饮食欲较好；C组小鼠可见精神差、饮食减少、基本不活动、被毛蓬乱、无光泽。

2.3 肠道外观情况

A组，小鼠肠道组织无明显异常，组织红润，肠壁完整而富有弹性，如图1a；C组肠壁肠管壁充血、部分有肠管坏死，明显瘫软，肠壁有明显溶解、透明，有腹水，腹腔有少量暗红色积液，如图1c；B组肠壁亦有瘫软现象，较C组程度较轻，如图1b。连翘茶明显有抑菌作用。

图1 各组小鼠肠道解剖展开图对比

2.4 肠道切片情况

光学显微镜下，A组小鼠肠道组织腺体结构，排列整齐完整，粘膜及粘膜下层组织完好，C组，小鼠肠道可见细胞间隙增大，粘膜及粘膜下有部分充血有肿胀，细胞排列杂乱，无规则，血管稍有扩张，有发炎症状，如图5；B组症状比C组程度轻，见图2。

图2 各组小鼠肠道结肠HE切片图对比（HE染色，40×）

2.5 小鼠血常规情况

AB组无明显差异，白细胞数、淋巴细胞均在正常范围内；C组出现白细胞数目骤然升高，淋巴细胞及比例也相应地升高连翘起到一定的缓解作用，见表3。

表3 各组小鼠血常规

3 结论

试验结果与预期结果一致，连翘茶对于大肠杆菌的肠黏膜有一定的保护作用，尽管本次果没有十分显著，但可直观看到连翘茶对肠道起到一定保护作用。连翘茶对于大肠杆菌的肠黏膜有一定的保护作用，作用明显，可减轻肠道损伤。致病性大肠杆菌导致腹泻在畜牧饲养中频繁发生，为连翘制成新型中兽药提供思路。