在肺结核细菌检测中运用荧光定量PCR检测法的临床价值

温晓萍

【摘要】目的：分析在肺结核细菌检测中运用荧光定量PCR检测法的临床价值。方法：本文总共纳入88例观察对象，均是我院2016年5月—2021年5月收治的疑似尘肺合并肺结核患者，对88例患者开展荧光定量PCR与痰涂片抗酸染色检测。将临床诊断作为参照依据，比较两种方法的检测结果。结果：在检出率、敏感度、特异度、阳性预测值以及阴性预测值上，荧光定量PCR明显高于痰涂片抗酸染色检测（P<0.05）。结论：荧光定量PCR检测法用于肺结核细菌检测的效果显著，临床可进一步推广运用。

【关键词】肺结核；细菌检测；荧光定量PCR检测法；临床价值

Clinical value of fluorescence quantitative PCR detection method in the detection of pulmonary tuberculosis bacteria

WEN Xiaoping

Department of Laboratory， Huizhou Occupational Disease Prevention and Control Hospital， Huizhou， Guangdong 516001， China

【Abstract】Objective： To analyze the clinical value of fluorescent quantitative PCR detection method in the detection of pulmonary tuberculosis bacteria. Methods： A total of 88 observation objects were included in this study， all of whom were patients with suspected pneumoconiosis complicated with pulmonary tuberculosis admitted to our hospital from May 2016 to May 2021. Fluorescence quantitative PCR and sputum smear acid-fast staining were performed on 88 patients. The clinical diagnosis was used as a reference to compare the test results of the two methods. Results： The detection rate， sensitivity， specificity， positive predictive value and negative predictive value of fluorescence quantitative PCR were significantly higher than those of sputum smear acid-fast staining（P<0.05）. Conclusion： Fluorescence quantitative PCR detection method has a remarkable effect in the detection of pulmonarytuberculosis bacteria， and it can be further promoted and applied in clinical practice.

【Key？Words】Pulmonary tuberculosis； Bacterial detection； Fluorescence quantitative PCR detection method； Clinical value

肺结核在临床上比较常见，是一种慢性的传染病，患者在感染结核杆菌后不一定及时出现症状，当患者的抵抗力降低情况下才会引起疾病[1]。肺结核好发于5～35岁群体，该疾病可以侵及人体许多脏器，其中以肺部受累形成多发肺结核最为常见。近些年来，肺结核的患病人数不断增加，达到了500万，在全球各国的排名中位居第二，且呈逐年升高的趋势[2]。因此，早期诊断和治疗肺结核是非常重要的，可有效改善患者的预后。由于肺结核缺乏特异性，在临床诊断过程中容易与其他肺部疾病相混淆，出现漏诊和误诊的概率比较高，帮助患者选择合适的检测方法是临床关注的重点。有学者在研究提出，荧光定量PCR用于肺结核检测后，具有较高的检出率[3]。鉴于此，本文将88例疑似肺结核患者为例进行分析，试探讨荧光定量PCR检测法的效果，以期为后续治疗提供依据，具体报告内容请看下文。

1 资料与方法

1.1 一般资料

观察例数有88例，观察时间在2016年5月—2021年5月，观察对象是我院收治的疑似尘肺合并肺结核患者，其中男患者49例，女患者39例，年龄20～62岁，平均年龄（41.52±3.46）岁。

納入标准：①患者年龄在20岁及以上，职业性尘肺病；②患者的精神正常，可以与医护人员进行简单交流；③患者的病历资料齐全；④患者年龄>18岁；⑤本次研究得到伦理委员会的批准，且患者及家属知情并配合研究。

排除标准：①患者在入组前确诊为肺结核；②患者的精神异常或存在认知障碍，不能配合完成检测；③女性患者处于妊娠期或哺乳期；④患者不愿意参加研究或中途退出研究。

1.2 方法

88例患者均开展荧光定量RCP与痰涂片抗酸染色法检查，详细方法为：（1）荧光定量PCR检测：①标本收集：收集患者晨起时的痰液作为检测标本，首先利用双氧水清洁口腔，防止干扰检测结果；随后叮嘱患者用力深咳后，取第二次咳嗽的痰液，将痰液放入无菌器皿中送检。②荧光定量PCR检查过程：利用无菌吸管抽取1mL痰液中的脓性或黏稠标本，根据2：1的比例向试管中加入痰标本处理液，封闭试管后连续震荡5min，随后在室温环境下静置15min，确保痰标本能够完全液化。完成标本处理工作后，利用厦门至善生物科技股份有限公司提供的荧光定量PCR仪（型号：SLAN？-96S）及配套试剂盒进行检测。（2）痰涂片抗酸染色法：①标本采集：需要连续3d以上采集患者的痰液，痰液必须是患者清晨晨起深呼吸后咳出的痰液。患者在清晨起床后，立即采用清水漱口，随后深呼吸后进行咳痰，咳出的痰液即为标本；夜间痰应该是送痰前一天晚上咳出的痰液，随后利用痰涂片法抗酸染色法检验痰液中的结核分枝杆菌。②痰涂片抗酸染色法的操作过程：固定好患者的痰标本后进行酒精灯加热处理，之后将样本放置到玻片上，并将抗酸染色剂滴注在玻片上进行染色，染色时间控制在30min，随后利用流动的自来水冲洗标本，之后再次滴入染色剂，染色1min后再次利用流动自来水冲洗，并在室温环境下自然风干。将风干的标本放入显微镜下方进行观察，首先利用低倍显微镜进行筛查，然后利用高倍显微镜确认结果。

1.3 观察指标

将临床诊断作为参照标准，88例患者经临床诊断发现阳性有69例，阴性有19例，比较荧光定量PCR与痰涂片抗酸染色法的检测结果，仔细记录检出率、敏感度、特异度、阳性预测值以及阴性预测值。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析。计数资料采用（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（χ±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 分析痰涂片抗酸染色法的检测结果

经痰涂片抗酸染色法检测后，发现真阳57例，真阴12例，总共检查出69例，诊断检出率为78.41%（69/88），见表1。

2.2 观察荧光定量PCR的检测结果

经荧光定量PCR检测后，发现真阳64例，真阴17例，总共检查出81例，诊断检出率为92.05%（81/88），见表2。

2.3 比较两种方法检测结果的差异

在检出率、敏感度、特异度、阳性预测值以及阴性预测值上，荧光定量PCR明显高于痰涂片抗酸染色法（P<0.05），见表3。

3 讨论

肺结核是临床常见的结核病，具有较高的发病率与死亡率，给患者的身体健康构成极大的威胁。据世界卫生组织统计发现，全球每年发生肺结核的人数达到800～1000万，同时也是死亡率最高的单一传染病；我国结核杆菌感染患者占了总人数的1/3，其中肺结核患者有500万，在全球各国的排名中居于第二；在我国每年因肺结核死亡的人数有300万，占非自然死亡的70.0%，占传染疾病患者总数的10.0%。患者感染结核杆菌后，容易出现咳嗽、气短、胸闷等症状，若是没有及时进行有效处理，一旦扩散会给公共安全、患者身心健康带来不良影响。因此，尽早筛查和积极治疗肺结核是非常有必要的，对于早期确诊和治疗肺结核、改善患者的预后具有重要意义。

随着生化技术的发展与完善，实验室检测手段引起了临床的关注与重视，已成为各类疾病诊断的常用手段。痰涂片抗酸染色法是临床检测肺结核的常用手段，具有操作简单、价格低廉等优点，其操作过程的稳定性与均一性较好，在密封仪器内完成切片、脱蜡、烘烤以及染色等步骤，减少了外界环境杂质的污染，提高了检出率。但是，痰涂片抗酸染色法对于已经渗出的病变类型、典型结核结节的检测存在一定的难度，再加上该方法的敏感度与特异度较低，提高了疾病漏诊和误诊的概率，限制了临床应用范围。此外，由于肺外结核病患者痰液中的结核分枝杆菌的含量比较少，利用痰涂片抗酸染色法检测后的效果也不理想，容易发生漏诊和误诊情况。荧光定量PCR是近些年来新兴的检测手段，其在DNA扩增反应中，通过荧光化学物质来测定每次聚合酶链式反应循环后形成产物的总量，提高疾病诊断的准确度。荧光定量PCR是在PCR技术的基础上发展而来的，其在PCR反应系统中加入一个荧光标记探针，激发的荧光信号值与所扩增的目标基因数量呈正比，通过对试管内荧光值的实时监测，来实现木板的定量检测。当荧光定量PCR用于结核病检测时，其主要利用结核分枝杆菌的特异性和结核分枝杆菌特异性的荧光反应来判定结核杆菌的性质，具有较高的检测灵敏度；同时，荧光定量PCR通过PCR反应液与耐热DNA聚合酶的变化，结合4种核苷酸单体来诊断疾病。本次研究结果发现，在检出率、敏感度、特異度、阳性预测值以及阴性预测值上，荧光定量PCR明显高于痰涂片抗酸染色法（P<0.05），表明相较于痰涂片抗酸染色法，荧光定量PCR的检测效果更佳，敏感度以及特异度更高，有利于提高疾病诊断的准确率。追其原因是：相较于痰涂片抗酸染色法，荧光定量PCR技术的操作比较简单，检测速度比较快，具有很高的敏感度和特异度，有效提高了疾病检测的检出率，为肺结核的诊断和治疗提供了科学依据。

综上所述，荧光定量PCR用于肺结核的检测效果理想，具有较高的检出率、敏感度和特异度，可作为肺结核的辅助检测手段，有利于临床医师了解患者的病情，为后续治疗方案的制定提供依据，具有较高的临床推广价值。

参考文献

[1] 时广利，马尚，尹颜军，等.肺结核患者血清中miRNA-16和miRNA-155检测的临床意义[J].临床肺科杂志，2019， 24（8）：1450-1454.

[2] 李艳红，李春艳，陈天芳，等.实时荧光定量PCR与痰涂片抗酸染色法诊断结核病的灵敏度，特异度比较[J].临床医学研究与实践，2019，4（30）：134-136.

[3] 孙林雍，严嘉琦，陈昶，等.荧光定量PCR与抗酸特殊染色对疑似骨关节结核中结核分枝杆菌的检测对比[J].临床与实验病理学杂志，2020，36（9）：101-103.

[4] 郝颖华，罗森源，汤显斌.即时荧光定量PCR法对石蜡包埋组织中结核杆菌的检测价值探究[J].中华病理学杂志，2020，49（10）：1068-1070.

[5] 张睿.荧光定量PCR法检测肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的诊断价值分析[J].中国保健营养，2019，29（32）：325-326.

[6] 李观华，方筱，邓蕾，等.荧光定量PCR法联合传统方法在结核杆菌检测中的应用[J].当代医学，2020， 26（21）：59-61.

[7] 袁瑛，明湘虹，郑宏，等.SAT技术与荧光定量PCR在痰涂片阴性肺结核诊断中的价值研究[J].临床肺科杂志，2019，24（3）：160-162.

[8] 宋华峰，赵静，胥萍.荧光定量PCR在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用价值[J].中国热带医学，2019，19（11）：20-23.

[9] 谢景齐，周娇红.荧光定量PCR法用于诊断肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的临床价值[J].中国当代医药，2019，26（12）：150-152，155.

[10] 步晓琳，李宝华，连爱琼，等.抗酸染色与实时荧光定量PCR法检测在肺结核辅助诊断中的应用效果对比[J].中国医疗器械信息，2020，26（22）：25-26，94.