血清miR-144、CEA、CA724及CA125联合检测对早期胃癌的诊断价值

杜后英

胃癌是临床上最常见的消化系统恶性肿瘤，早期胃癌的诊断手段丰富，包括肿瘤标记物、影像学技术等，尽管如此，胃癌诊断的“金标准”依旧是病理组织活检，存在创伤性[1-2]。各类肿瘤标记物，包括癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、糖链抗原724(carbohydrate antigen 724,CA724)、糖量抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)等是肿瘤生长代谢过程中所产生的活性物质，在提示恶性病变中具有较好的灵敏度，但在诊断早期胃癌中缺乏特异性，应用价值有限[3-4]。微小核糖核酸(miR)是一类长度在21～25nt之间的非编码小分子RNA，有研究证实，miR-144可通过多种信号通路参与胃癌的发生与发展[5-6]。为丰富早期胃癌诊断手段，提高早期胃癌的诊断效果，本研究分析血清miR-144、CEA、CA724及CA125联合检测在诊断早期胃癌中的具体价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

将医院消化内科2019年2月至2021年2月年间门诊及住院部收治的108例胃部病变患者纳为研究对象，经胃镜或手术病理活检证实其中59例为良性病变(44例为慢性非萎缩性胃炎、15例为慢性萎缩性胃炎)，49例为早期胃癌(包括重度不典型增生)。(1)纳入标准：均为首次入院检查，接受治疗；经胃镜、病理组织活检确定病变类型；患者知情并同意参与本研究。(2)排除标准：长期服用质子泵抑制剂、H2受体阻断剂相关药物者；合并其他原发性恶性肿瘤者；合并其他急慢性炎症疾病者。(3)分组及病例资料：将59例良性病变患者纳为良性组，49例早期胃癌者纳为恶性组，其中良性组中男性33例、女性26例，年龄43～76岁，平均(58.45±11.15)岁，恶性组中男性29例、女性20例，年龄40～80岁，平均年龄(59.85±12.36)岁，两组性别比例及年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

于患者进行胃镜检查、药物及手术治疗前，采集清晨外周静脉血6 mL，3000 r/min离心15 min，分离上层血清，置于-70 ℃冰箱待用。罗氏Cobase411电化学发光仪及其配套试剂检测血清CA724、CA125水平。

血清微小核糖核酸-144(miR-144)检测方法：miRNA提取试剂盒(新海基因检测有限公司)提取血清miR，提取逆转录试剂盒(美国赛默飞世珥生物科技有限公司)将提取的miRNA逆转录生成cDNA，RT-PCR检测血清miR-144水平，检测仪器为ABI 7500型荧光定量PCR仪。反应体系共20 μL，包括TaqMan MicroRNA Assay 1.00 μL，cDNA 1.33 μL，TaqMan 2×Universal PCR Master Mix 10 μL，ddH2O 7.67 μL。扩增条件：95 ℃预变性10 min，95 ℃变性15 s，60 ℃复性60 s，45个循环。以U6为内参，采用2-△△Ct法计算miR-144相对表达量。miR-144正向引物(5'→3')：ATCCAGTGCGTGTCGTCGTG，反向引物(5'→3')：TGCTTATACAGTATAGATG，U6正向引物(5'→3')：GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT，反向引物(5'→3')：CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT。

1.3 观察指标

(1)比较良性组与恶性组患者血清miR-144、CEA、CA724、CA125水平。(2)比较恶性组不同病理特征患者血清miR-144、CEA、CA724、CA125水平。(3)绘制受试者工作特征曲线(receiver operatingchara cteristic,ROC)，分析血清miR-144、CEA、CA724、CA125单独及联合应用在诊断早期胃癌中的价值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 良性组及恶性组血清miR-144、CEA、CA724、CA125水平比较

恶性组患者血清miR-144水平低于良性组，血清CEA、CA724以及CA125水平高于良性组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 良性组及恶性组血清miR-144、CEA、CA724、CA125水平比较

2.2 恶性组不同病理特征患者血清miR-144、CEA、CA724、CA125水平比较

恶性组中，肿瘤不同位置患者血清miR-144、CEA、CA724、CA125水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；未分化型患者血清miR-144水平低于分化型者，血清CEA、CA724及CA125水平高于分化型者；黏膜下层浸润患者miR-144水平低于黏膜内浸润者，血清CEA、CA724及CA125水平高于黏膜内浸润者；淋巴结转移患者血清miR-144水平低于无淋巴结转移者，血清CEA、CA724及CA125水平高于无淋巴结转移者，差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 恶性组不同病理特征患者血清miR-144、CEA、CA724、CA125水平比较

2.3 血清miR-144、CEA、CA724、CA125在诊断早期胃癌中的价值分析

绘制ROC曲线发现，血清miR-144、CEA、CA724、CA125在诊断早期胃癌中的效能相似，但四者联合应用可有效提高各指标单独应用时的效能，联合预测因子在诊断早期胃癌中的AUC=0.894，95%CI为(0.837～0.951)，灵敏度及特异度分别为83.7%与84.1%，见表3、图1。

3 讨论

我国是胃癌的高发地区，胃癌的早期诊断是进行及时有效治疗、改善患者预后的关键前提。寻找经济、便捷、有效的胃癌筛查手段，是目前临床研究的重点。肿瘤标志物是肿瘤生长代谢过程中所产生的特异性因子，血清肿瘤标志物检测具有取材方便、检测简单、价格低廉等优势。CEA、CA724以及CA125已成为包括胃癌在内的多种恶性肿瘤筛查的常见指标。

表3 血清miR-144、CEA、CA724、CA125在诊断早期胃癌中的价值分析

图1 血清miR-144、CEA、CA724、CA125在早期胃癌诊断中的价值分析

有研究表示，胃癌、乳腺癌、甲状腺癌等多种恶性肿瘤患者血清CEA水平异常升高，提示CEA可作为筛查恶性肿瘤的标记物[7-8]。但后续有研究表示[9-10]，妊娠、合并糖尿病以及心血管疾病患者的血清CEA水平依旧会升高，提示CEA在筛查恶性肿瘤中的特异性有限，可能会造成误诊。本文研究发现，早期胃癌患者血清CEA水平高于萎缩性或非萎缩性胃炎患者，且未分化癌、黏膜下层浸润以及淋巴转移者血清CEA水平更高，但绘制ROC曲线发现，血清CEA水平在诊断早期胃癌中的特异性较低，可能与其他疾病也可能导致血清CEA水平升高有关，与上述研究结论相似。

CA125是一种大分子聚糖蛋白，在胚胎发育时期负责控制体腔上皮细胞表达，而在胎儿娩出后逐渐消失[11]。后来有学者发现，卵巢癌、输卵管癌、子宫内膜癌等患者血清CA125水平异常升高，目前，CA125已被应用于多种恶性肿瘤的筛查[12]。我院研究发现，早期胃癌患血清CA125水平高于胃良性病变者，且未分化癌、黏膜下层浸润以及淋巴转移者血清CA125水平更高，但其在诊断早期胃癌中的灵敏度及特异度均较低，应用价值有限。

CA724是一种广谱肿瘤标记物，90%左右的胃癌患者血清CA724水平呈升高状态[13-14]。CA724在正常组织及胃良性病变组织内的表达量较低，本研究发现，血清CA724在诊断早期胃癌中的灵敏度及特异性均较高，其在诊断早期胃癌中的AUC为0.75，95%CI为(0.646～0.835)，灵敏度特异度分别为81.6%与67.8%。

miRNA参与细胞增殖、分化、凋亡等多种生理进程，是调节生命活动的重要物质。Mushtaq F等[15]研究发现，miR-144表达能抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭，而胃癌细胞内miR-144表达下调，证实miR-144在胃癌进展中发挥着重要作用。我院研究发现，早期胃癌患者血清miR-144水平较胃良性病变者明显降低，且在未分化癌、黏膜下浸润及淋巴转移者中的表达水平更低。绘制ROC曲线发现，血清miR-144在诊断早期胃癌中的AUC与血清CEA、CA125以及CA724等指标相似。而四个指标联合应用在诊断早期胃癌中的价值均高于各指标单独应用。

综上所述，各指标单独应用时，血清miR-144在诊断早期胃癌中的应用价值最高，而联合血清miR-144、CEA、CA724、CA125能有效提高各指标单独应用时的效能。