桑树病原茄科雷尔氏菌的IMSA-LAMP检测方法获得新进展

桑树青枯病作为茄科雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)感染引发的一种毁灭性细菌性病害，严重影响到桑叶的产量和质量，被国家列为植物重点的检疫性病害。建立一种能对茄科雷尔氏菌进行快速有效检测的方法，对预防桑树青枯病的发生和扩散具有重要意义。国家蚕桑产业技术体系桑树柞树细菌病毒病防控岗位专家、华南农业大学刘吉平教授团队以茄科雷尔氏菌果胶裂解酶基因(Pectate lyase gene，PL)为靶标，首次尝试融合新型核酸扩增技术IMSA的引物设计策略和LAMP扩增反应的技术体系，并对其反应体系和实用性操作等进行优化，成功建立了一种快速高效的茄科雷尔氏菌IMSA-LAMP检测技术，研发成果发表于《华南农业大学学报》。

岗位团队采集了广东、广西、海南等4个省份桑树种植区的24份疑似桑树青枯病病样，通过传统的形态学方法观察病状，将分离的病原菌通过全基因组测序分析鉴定获得茄科雷尔氏菌的果胶裂解酶基因，并以该基因为靶标，融合IMSA引物设计策略和LAMP扩增反应的技术体系建立快速高效的茄科雷尔氏菌IMSA-LAMP检测方法。应用该技术在64.5 ℃条件下，45 min内即可完成对阳性样品的特异检测，比常规PCR方法快60 min以上，反应结果可通过荧光扩增曲线出现的先后进行快速判定；对茄科雷尔氏菌的模板DNA检测灵敏度达200 fg/L，对应的菌液浓度为1×102CFU/mL，比LAMP检测方法的灵敏度高10倍左右，比常规PCR检测法的灵敏度高100倍。应用该技术对生产上收集桑树青枯病病样的检出率为87.75%。

本团队成功建立的茄科雷尔氏菌IMSA-LAMP检测方法具有准确可靠、实用性强的特点，可用于大批量桑树青枯病样品的快速分子诊断，为桑树细菌病检测和防疫提供了新技术支持，对各种作物青枯病的快速检测也具有重要的参考价值。