miRNA-323-3p 联合miRNA-873 在异位妊娠早期诊断中的价值研究

叶瑛瑛，王金辉，谢灵平

（玉环市人民医院妇科，浙江 玉环 317600）

受精卵在子宫体腔以外着床称为异位妊娠（ectopic pregnancy，EP），习惯称宫外孕[1]。EP 是妇产科常见的急腹症，是妊娠期出血相关死亡的主要原因，近年来其发病率有上升趋势[2-4]。输卵管妊娠未发生流产或破裂时，症状与体征往往不典型，很难早期诊断。目前诊断EP 的方法主要有经阴道超声、血清人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）及孕酮等检查，但仍难以实现早期快速诊断[5-7]。因此，开发一种能够早期快速诊断EP的标志物具有重要临床意义。本研究以我院收治的EP、自然流产及正常宫内妊娠的90 例妇女为研究对象，通过检测血清miR-323-3p、miR-873 的表达水平，分析其在不同妊娠结局中的表达差异，并与β-HCG、孕酮等传统检测方法进行比较，以期为寻找一种能快速有效诊断EP 的新指标提供科学依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020 年1 月-2022 年2 月玉环市人民医院妇科住院的EP 患者30 例为异位妊娠组，同期在我院妇科住院或门诊就诊的自然流产患者30 例为自然流产组，以及在我院妇科门诊体检的正常宫内妊娠者30 例为对照组。异位妊娠组年龄24～35 岁，平均年龄（27.53±2.79）岁；停经天数35～54 d，平均停经天数（44.20±4.94）d；既往孕次0～4 次，平均孕次（1.33±0.96）次。自然流产组年龄20～35岁，平均年龄（27.47±3.10）岁；停经天数39～54 d，平均停经天数（46.17±4.20）d；既往孕次0～2 次，平均孕次（0.97±0.67）次。对照组年龄22～35 岁，平均年龄（27.53±3.06）岁；停经天数39～56 d，平均停经天数（45.77±3.77）d；既往孕次0～3 次，平均孕次（1.13±0.73）次。三组年龄、停经天数、既往孕次比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。所有研究对象均知晓研究内容，并签署知情同意书。

1.2 纳入及排除标 纳入标准：异位妊娠组患者均为输卵管妊娠，自然流产组均为早期流产，对照组为所有正常宫内妊娠者，且为早期妊娠；年龄20～35 岁。排除标准：有体外受精胚胎移植术史、有EP 史、复发性流产史、双胎妊娠史者。

1.3 方法

1.3.1 标本采集 所有研究对象于清晨空腹采集外周静脉血5 ml，立即送至实验室离心，经3600 r/min离心10 min，离心半径12.5 cm，离心后，取上层血清2 ml 放置在-80 ℃冰箱保存待检测,剩余血液进行β-HCG 和孕酮检测。

1.3.2 β-HCG 和孕酮检测 采用罗氏全自动电化学发光免疫分析仪β-HCG 和孕酮，试剂盒为罗氏公司生产的配套试剂。

1.3.3 miRNA-323-3p、miRNA-873 检测 采用RTPCR 法，实验分为以下3 个步骤：①RNA 提取及浓度和纯度测定；②RNA 逆转录；③荧光定量检测。核酸提取试剂盒由天根生物科技有限公司提供（DP503），逆转录试剂盒由东洋纺生物科技有限公司提供（FSQ-201），由杭州艾迪康医学检验中心负责检测。

1.4 统计学方法 采用SPSS 23.0 软件进行统计学分析。计量资料以（±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。对不符合正态分布或者方差不齐的计量资料，以中位数（M）和四分位数间距（P25，P75）表示，两组间比较采用Mann-WhientyU检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis 检验。计数资料以（n）表示，比较采用χ2检验。绘制受试者工作特征曲线（ROC）分析不同指标的诊断价值。以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组miRNA-323-3p、miRNA-873、β-HCG 和孕酮比较 异位妊娠组、自然流产组及对照组miRNA-323-3p 水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其中异位妊娠组miRNA-323-3p 水平高于对照组（P＜0.05），而自然流产组与异位妊娠组及对照组miRNA-323-3p 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。异位妊娠组、自然流产组及对照组miRNA-873 水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其中异位妊娠组miRNA-873 水平低于自然流产组及对照组（P＜0.05），而自然流产组与对照组miRNA-873 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。异位妊娠组β-HCG 水平低于自然流产组及对照组（P＜0.05），自然流产组β-HCG 水平低于对照组（P＜0.05）。异位妊娠组、自然流产组及对照组孕酮水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其中异位妊娠组及自然流产组孕酮水平低于对照组（P＜0.05），而异位妊娠组与自然流产组之间孕酮水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 三组miRNA-323-3p、miRNA-873、β-HCG 和孕酮比较[M（P25，P75）]

2.2 miRNA-323-3p、miRNA-873、β-HCG 和孕酮及联合检测预测EP 的价值 miRNA-323-3p 和miRNA-873 两者联合检测及miRNA-323-3p、miRNA-873、β-HCG 和孕酮四者联合检测均具有较高的敏感度和特异度，见表2、图1。

表2 miRNA-323-3p、miRNA-873、β-HCG 和孕酮及联合检测预测EP 的效能评价

图1 miRNA-323-3p、miRNA-873、β-HCG 和孕酮及联合检测的ROC 曲线图

3 讨论

EP 部位复杂多元化，不同部位的EP 其临床表现有较大差异，特别是特殊部位EP，发病率较低，临床症状及体征不典型，早期诊断困难，易出现误诊、漏诊而延误治疗，其一旦破裂容易引起腹腔大出血，严重者可导致失血性休克危及患者生命[8，9]。有研究显示[10，11]，EP 是妊娠早期导致孕妇死亡的重要原因，且死亡占比有所上升。因此，早期诊断EP 对指导临床治疗具有重要意义。

Lu Q 等[12]对36 例正常宫内妊娠、30 例自然流产和34 例EP 患者进行了21 种miRNAs 分析，在21 种miRNAs 中，EP 中miRNA-873 和miRNA-223显著低于自然流产和正常宫内妊娠，而miRNA-323在EP 中显著升高；miRNA-873 作为单项指标诊断EP 的敏感性最高，为61.76%，miRNA-873 联合hCG 和孕酮的敏感性为79.41%（90%固定特异性区间）。本研究结果发现，miRNA-323-3p 诊断EP 的敏感度为83.30%，特异度为51.70%，其诊断EP 的价值明显较miRNA-873 高；此外，异位妊娠组miRNA-323-3p 水平高于对照组（P＜0.05），而miRNA-873 水平低于自然流产组及对照组（P＜0.05），提示不同的miRNAs 在EP 的作用机制各不相同，可能存在相互抑制的情况。目前临床诊断EP 主要通过经阴道超声检查，但难以实现早期快速诊断的目的，且部分少见部位如卵巢EP、腹腔妊娠超声常难以诊断[13，14]。未来或许可以通过miRNAs 检测实现早期诊断EP，同时可以弥补超声诊断的不足，这需要更多大样本的早期前瞻性研究予以证实。

陈国强等[15]对48 例早期先兆流产、32 例EP、30例正常妊娠孕妇血清β-HCG、雌二醇、孕酮及CAl25 水平进行分析，4 项血清标志物单独预测EP准确性低，4 项联合检测对EP 的诊断灵敏度、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值分别为90.9%、98.4%、96.9%、93.8%和97.7%。孙秋瑾等[16]研究发现，在EP 诊断价值由高到低的顺序依次为孕酮、E2、INHA、β-HCG、F-β-HCG、PAPP-A、CA125 及AFP，其中效能较高的前4 项血清标志物联合检测AUC 为0.970，灵敏度为86.8%，特异度为98.0%，可见β-HCG 和孕酮单独预测EP 准确性低，联合检测能够弥补单项指标存在的诊断敏感性或特异性不足的问题，使诊断效能提高[17，18]。本研究经ROC 曲线分析显示，miRNA-323-3p、miRNA-323-3p 和miRNA-873 两者联合及miRNA-323-3p、miRNA-873、β-HCG 和孕酮四者联合检测对诊断EP 准确性较高，曲线下面积分别为0.673（95%CI：0.558～0.789）、0.772（95%CI：0.665～0.880）、0.908（95%CI：0.849～0.968），敏感度分别为83.30%、76.70%及83.30%，特异度分别为51.70%、78.30%及88.30%。可见，miRNA-323-3p、miRNA-873、β-HCG 和孕酮联合检测对诊断EP 价值较高。目前关于miRNAs 在EP 发生发展中的作用机制研究少见，LIN28B/Let-7 和KISS1/kisspeptins 通路已被证实参与EP 的病理生理过程[19，20]。未来需寻找调控EP 相关基因如VEGFA、EGFR、ESR1 和免疫应答相关基因表达的miRNAs，对其在EP 患者的组织样本和血清中的表达进行分析，可为了解miRNAs 在EP 发病机制中的作用提供新的见解。

综上所述，EP 患者miRNA-323-3p 表达水平升高，miRNA-873 表达水平下降，miRNA-323-3p、miRNA-873、β-HCG 和孕酮四者联合检测对诊断EP 准确性较高。本研究样本量偏少，今后还需多中心、大样本量进一步研究。