山西省姑射山野生毛木耳菌株菌丝生长条件优化

徐全飞 牛 宇 聂建军 蒙秋霞 冯婉君 李彩萍 潘保华

（1 山西农业大学农业经济管理学院，山西太原 030006；2山西农业大学资源环境学院，山西太原 030031）

毛木耳Auricularia polytricha，属木耳科Auriculariaceac，木耳属Auricularia[1-2]，俗称构耳、黄背木耳、白背木耳。毛木耳质地脆滑，清新爽口，具有很高的食用及药用价值[3-5]，也是我国栽培的主要食用菌品种之一[6-8]。

野生毛木耳在夏、秋季生长在栎、柳、槐等多种阔叶树倒木或树桩上，单生、群生或丛生[2，9-10]。笔者于2020 年6 月中旬在山西省汾西县姑射山栎树的倒木上采集到一株野生毛木耳菌株，该菌株子实体较大，初期呈碗状，后耳片伸展为耳状，腹面红褐色，背面灰白色，绒毛较长且密集，干后棕褐色至黑色，强烈收缩呈硬而脆的角质至近革质（图1）。笔者通过考察该菌株菌丝生长速度、菌丝长势，筛选母种培养基最佳碳源、氮源、pH 及菌丝最适宜生长温度，旨在为该菌株驯化栽培提供数据支撑。

图1 野生毛木耳子实体

1 材料与方法

1.1 试验材料

（1）供试菌株

供试毛木耳菌株采自山西省汾西县姑射山，采用耳（菇）木分离法[2，11-12]，取生长健壮，无病虫害、腐朽程度较轻的子实体，锯成1～3 cm 厚的木块，在超净工作台上，将耳木在酒精灯外焰灼烧几次，杀灭耳木表面部分杂菌，再用手术刀将木块划开，取中间长有菌丝长0.3～0.5 cm 的木芯，移接至PDA 试管培养基上，接种后将试管放入25 ℃恒温培养箱内，暗光培养5～7 d 后，挑取色泽洁白、长势强的菌丝转接到PDA 培养基上纯化培养[13-15]，将纯化菌种作为供试菌株。

（2）供试培养基

耳木分离培养基采用马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂粉2%，pH自然。

菌种活化培养基采用马铃薯综合培养基（CPDA）：马铃薯20%，葡萄糖2%，KH2PO40.3%，MgSO4·7H2O 0.15%，琼脂2%。

碳源试验培养基：供试碳源分别为葡萄糖、可溶性淀粉、麦芽糖、乳糖、甘露醇、蔗糖、空白（对照），质量分数均为2%，培养基其他成分均为蛋白胨0.5%，KH2PO40.3%，MgSO4·7 H2O 0.15%，琼脂2%。

氮源试验培养基：供试氮源分别为蛋白胨、麸皮、硝酸铵、酵母粉、尿素、空白（对照），质量分数均为0.5%，培养基其他成分均为葡萄糖2%，KH2PO40.3%，MgSO4·7H2O 0.15%，琼脂2%。

最佳pH 筛选试验培养基：以PDA 为基础培养基，用1.0 mol/L NaOH 溶液或1.0 mol/L HCl 溶液调整培养基pH为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0。

1.2 试验方法

1.2.1 菌种活化

将试验毛木耳菌株试管种从菌种保藏箱中取出，25 ℃恒温放置24 h，将活化后的菌种接于CPDA平皿培养基上，25 ℃恒温暗光培养至平皿表面接近长满菌丝[6，16]备用。

1.2.2 最佳碳源、氮源及pH筛选试验

无菌操作，用直径为5 mm 已灭菌打孔器，从菌种培养皿中截取菌丝长势一致活化的毛木耳菌种，分别接种于不同碳源、氮源及pH 供试培养基平皿中心。置25 ℃恒温培养箱内暗光培养，3 d 后菌丝已经萌发生长，采用十字划线法测量菌落直径[17]，记录菌丝形态和长势，连续观察记录，测定8 d。每个处理重复3次，取平均值。

菌丝日均生长速度（mm/d）=[（菌落直径-5）/2]/培养天数

1.2.3 最适生长温度试验

将活化毛木耳菌种接于PDA 培养基内，分别置5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃暗光培养。菌丝观察测定方法同1.2.2，每个处理重复3次，取平均值。

1.3 数据分析

试验数据统计及分析采用WPS 和SPSS，采用Duncan 新复极差法多重比较。

2 结果与分析

2.1 培养基最适碳源筛选结果

以碳源空白为对照，供试碳源对野生毛木耳菌丝生长的影响见表1。由表1可知，野生毛木耳菌株在供试碳源培养基上，菌丝形态、色泽、生长势、菌落边缘形态及生长速度都有所不同，以葡萄糖为碳源时野生毛木耳菌丝洁白、生长势强，菌落边缘整齐，平均生长速度最快，为5.53 mm/d，与其他供试碳源差异极显著；以乳糖或甘露醇为碳源时，菌丝生长速度较快，同时乳糖为碳源时菌丝生长势强，有气生菌丝；以可溶性淀粉、麦芽糖、蔗糖为碳源时，菌丝生长速度一般，以可溶性淀粉为碳源时，菌丝致密、洁白、生长势强。综合比较，葡萄糖为野生毛木耳母种培养基的最佳碳源。

表1 供试碳源培养基中野生毛木耳菌丝生长状态比较

2.2 培养基最适氮源筛选结果

以氮源空白为对照，供试氮源对野生毛木耳菌丝生长的影响见表2。由表2可知，野生毛木耳菌株在供试氮源培养基上，菌丝形态、色泽、生长势、菌落边缘形态及生长速度都有所不同。以蛋白胨、酵母粉为氮源时，菌丝洁白、生长势强，菌落边缘整齐，平均生长速度最快，分别为4.97 mm/d、5.03 mm/d，且两者差异不显著，但与其他氮源差异极显著；以硝酸铵、尿素为氮源或氮源空白时，菌丝灰白、稀疏、生长势弱，其中以尿素为氮源时，只有少量菌丝萌发。综合比较，蛋白胨或酵母粉为野生毛木耳母种培养基的最佳氮源。

表2 供试氮源培养基中野生毛木耳菌丝生长状态比较

图2 6种碳源、碳源空白（对照）培养基上野生毛木耳菌株菌丝生长状态

图3 5种氮源、氮源空白（对照）培养基上野生毛木耳菌丝生长状态

2.3 培养基最适pH筛选结果

由图4 可知，培养基pH 为4、6、8 时，野生毛木耳菌丝生长速度较快，pH≤3 或pH≥9 不适宜该菌株生长，pH 为5、6、7 时，该菌株菌丝生长速度最快，且三者间差异不显著，但与其他pH 差异显著，因此培养基pH 5～7最适宜该菌株生长。

图4 试验（培养基）pH野生毛木耳菌丝生长速度比较

2.4 最适培养温度筛选结果

由图5可知，培养温度对野生毛木耳菌株的菌丝生长速度影响较大，当培养温度为5 ℃时，菌丝几乎不生长；温度15 ℃以下，菌丝生长缓慢；温度25 ℃，菌丝洁白、生长势强，生长速度较快；温度30 ℃菌丝生长速度最快，但菌丝较稀疏；温度35 ℃，菌丝生长速度变慢，且菌丝生长势弱，稀疏。综合比较，该野生毛木耳菌株菌丝生长的适宜温度为25～30 ℃。

图5 试验培养温度下野生毛木耳菌丝生长速度比较

3 小结与讨论

试验野生毛木耳菌株在供试碳源培养基中均能较快生长，综合评价最佳碳源是葡萄糖，与王庆武等[18]研究结果不同，这可能与所用毛木耳菌株有关。培养基氮源试验表明，最佳氮源为蛋白胨或酵母粉，尿素明显地抑制该菌株菌丝生长势和生长速度，原因可能是尿素在高温灭菌的过程中，产生了氨气，影响了菌丝的生长。

供试毛木耳菌株的最适生长温度为25～30 ℃，菌丝生长势强，生长速度快，属于偏高温型菌株；供试毛木耳菌株生长的培养基最适宜pH为5～7，pH为4～8时，菌丝都能够较快的生长，pH为9时，该菌株的菌丝也能生长，说明该菌株耐酸和耐碱的能力较强。

综合得出，适宜该野生毛木耳菌株菌丝生长的培养基最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为蛋白胨或酵母粉，培养基最适宜pH 为5～7，最适宜培养温度为25～30 ℃。