鸡树条果多糖的抗氧化活性研究*

高长久 梁启超 王春辉 张朝立 孟令锴 吴兆华 吴宜艳 王晶华 李文超

（牡丹江医学院药学院，黑龙江 牡丹江 157011）

鸡树条果（Fruit of Sargent Viburnum），又名荚蒾果，始载于《吉林中草药》，为忍冬科荚蒾属植物鸡树条荚蒾Viburnumopulus的果实[1]。鸡树条荚蒾的嫩枝、叶及果实均可入药，果实具有止咳等功效，主治急性气管炎、慢性气管炎、咳嗽等呼吸道疾病。现代研究[2，3]发现，其化学成分主要有黄酮类、多糖、酚类、挥发油、氨基酸等，具有抗炎、祛痰、镇咳等药理作用。本研究采用3 种常用的体外抗氧化方法对鸡树条果多糖的抗氧化活性进行评价，为其开发利用提供科学依据。

1 材料与仪器

1.1 药品与试剂 鸡树条果多糖，采用超声法从鸡树条果中提取而得。邻苯三酚，批号20180327；邻二氮菲，批号20180717；丙三醇，批号20180227，由天津博迪化工股份有限公司提供。三氯甲烷，批号20180305，由天津市富宇精细化工有限公司提供；维生素C，批号20190122，由合肥巴斯夫生物科技有限公司提供。硫酸亚铁，批号20181202；磷酸二氢钠，批号20181018；磷酸氢二钠，批号20180521，均由天津恒兴化学试剂制造有限公司提供。DPPH·，批号20190318，由合肥巴斯夫生物科技有限公司提供。盐酸，批号20181218，由山东明兴化学股份有限公司提供。

1.2 实验仪器 电子天平，型号T1000，由常熟市双杰测试仪器厂提供；紫外可见分光光度计，型号723，由上海光谱仪器有限公司提供；恒温超声波提取机，型号HN-1000CT，由上海汉诺仪器有限公司提供；离心机，型号LO3RH，由盐城凯特实验仪器有限公司提供；水浴锅，型号SB-1300，由上海爱朗仪器有限公司提供；微型漩涡混合仪，型号WH-3，由金坛市盛蓝仪器制造有限公司提供。

1.3 实验方法

1.3.1 鸡树条果总多糖预处理 超声提取的鸡树条果总多糖旋蒸浓缩，将浓缩后的糖液合并，用Sevage 法除去蛋白。加入Sevage 试剂（正丁醇∶氯仿=1∶3）并剧烈搅拌，搅拌后置于分液漏斗中静置12 h，将底层蛋白溶液倒掉，直至不再出现蛋白层。将除蛋白后的多糖溶液浓缩到200 mL，装于透析袋中透析，透析后的多糖溶液置于5000 mL 的大烧杯中，加满无水乙醇醇沉12 h，待多糖沉于烧杯底层后离心（4000 r/min，5 min，离心半径13.5 cm），留沉淀晾干称重。配置浓度范围为0.2～1.2 mg/mL 的多糖溶液，浓度梯度为0.2 mg/mL。

1.3.2 鸡树条果多糖对DPPH·清除能力测定 DPPH·清除实验参照齐佳慧、林瑶、滕浩等[4-6]的方法并稍作改动。取6 支试管，分别加入2 mL 已配制好的0.04 mg/mL DPPH 溶液，再依次加入2 mL 不同浓度梯度的鸡树条果多糖溶液为样品组（A1），空白组、阴性对照组（A0）、糖管组（A2）、阳性对照组（Am）加样量，见表1。加样完成后混匀，在室温下避光放置30 min 后，紫外517 nm 波长下分别测定各支试管内混合溶液的吸光度值。每组做3 次平行试验，通过公式计算清除率。DPPH·清除率=[A0-（A1-A2）]/A0×100%（A0为阴性对照组吸光度值，A1为样品组吸光度值，A2为糖管组吸光度值）。

表1 DPPH·清除能力测定加样表

1.3.3 鸡树条果多糖对·OH 清除能力测定·OH清除实验根据许洪波、XIEJH、李煦等[7，9]的方法并略作改动。取6 支试管，分别加入0.3 mL 邻苯三酚溶液（45 mmol/L），再依次加入4.5 mL Tris-HCl 缓冲液（pH=8.2），放入25 ℃恒温水浴中10 min，而后分别加入0.3 mL 同温度的不同浓度梯度的鸡树条果多糖溶液，加蒸馏水3.9 mL 并混匀，20 min 后取0.5 mL 浓HCl 使反应停止，在紫外319 nm 处测定样品管（A）的吸光度。空白组、阴性对照组（A0）、阳性对照组（Am）加样量，见表2。每组做3 次平行试验，通过公式计算清除率。·OH 清除率=[（A0﹣A）/A0]×100%（A0为阴性对照组吸光度值，A 为样品组吸光度值）。

表2 ·O H 清除能力测定的加样表

1.3.4 鸡树条果多糖对O2-·清除能力测定 O2-·清除实验依照许洪波、Jian-Hua Xie 等[7，8]方法并稍作改动。取6 支试管依次加入2.0 mL 磷酸盐缓冲溶液（0.05 mol/L，pH=7.4），1.5 mL 邻二氮菲溶液（5 mmol/L），1.0 mL 的FeSO4溶液（7.5 mmol/L），再分别加入1.0 mL 0.1%的双氧水溶液，然后加入1.0 mL 不同浓度梯度的多糖溶液，每次加样均充分混匀，为样品组（A2）。空白组（A0）、阴性对照组（A1）、阳性对照组（Am）加样量，见表3。加样完成后，将其放入37 ℃恒温水浴中1 h，之后用紫外分光光度计在536 nm 处测其吸光度。每组做3 次平行试验，通过公式计算清除率。O2-·清除率=[（A2-A1）/（A0-A1）]×100%（A0为空白组吸光度值，A1为阴性对照组吸光度值，A2为样品组吸光度值）。

表3 O2-·清除能力测定加样表

2 结果

2.1 鸡树条果多糖对DPPH·清除率 鸡树条果多糖溶液和维生素C 溶液在0.2～1.2 mg/mL 浓度范围内分别对DPPH·清除能力的百分比，见表4。鸡树条果多糖和维生素C 对DPPH·均有较好的清除能力，且存在量效关系。在1.2 mg/mL 时，鸡树条果多糖和维生素C的清除率达到该浓度范围内的最大值，分别为82.8%和95.8%。

表4 鸡树条果多糖及维生素C 对DPPH·的清除能力百分比(%)

2.2 鸡树条果多糖对·OH 清除率 鸡树条果多糖溶液和维生素C 溶液在0.2～1.2 mg/mL 浓度范围内分别对·OH 清除能力的百分比，见表5。鸡树条果多糖和维生素C 对·OH 均有清除作用，且存在量效关系。在1.2 mg/mL 时，鸡树条果多糖和维生素C 的清除率达到该浓度范围内的最大值，分别为76.7%和93.4%。

表5 鸡树条果多糖及维生素C 对·OH 的清除能力百分比(%)

2.3 鸡树条果多糖对O2-·清除率 鸡树条果多糖溶液和维生素C 溶液在0.2～1.2 mg/mL 浓度范围内分别对O2-·清除能力的百分比，见表6。鸡树条果多糖和维生素C 对O2-·均有清除效果，并具有一定的量效关系。达到最高浓度1.2 mg/mL 时，鸡树条果多糖和维生素C对O2-·的清除率分别为73.2%和96.9%。

表6 鸡树条果多糖及维生素C 对O2-·的清除能力百分比(%)

3 讨论

总多糖除蛋白过程中，大多文献[4-7]的Sevage 试剂配制是氯仿与正丁醇的配制比为5∶1（或4∶1），搅拌时间20 min。但本实验中应用上述方法除蛋白效果不理想，最后本实验所找到的最佳配制比为3∶1，搅拌时间延长为1 h。

在多糖抗氧化实验[8-10]中，配制DPPH 溶液时大多采用无水乙醇作溶剂，但在本实验过程中配制溶液时会产生沉淀，影响吸光度的测定。查阅相关资料后，考虑到多糖极性较大，故将无水乙醇更改为50%的乙醇作为替代。

实验结果表明，鸡树条果多糖具有一定的抗氧化活性，对DPPH·、·OH 和O2-·3 种自由基均有不同程度的清除作用，在多糖浓度达到1.2 mg/mL 时，对以上3种自由基的清除率分别达到了82.8%、76.7%和73.2%。综上所述，鸡树条果多糖可作为价格低廉、方便有效的天然抗氧化剂应用于多个领域，为鸡术条果药物的利用提供了理论依据，为鸡树条荚蒾的资源开发积累了宝贵经验。