红雾水葛根茎化学成分研究

胡粉青 赵家福* 马丽娟 吴 昊 盘龙脉 马跃新 邵曰凤*

1.德宏职业学院，云南 芒市 678400;2.德宏州食品药品检验所，云南 芒市 678400;3.昆明市食品药品检验所，云南 昆明 650032

红雾水葛[Pouzolziasanguinea(Bl.) Merr.]为荨麻科(Urticaceae)雾水葛属(Pouzolzia)植物，别名水麻、红水麻等，在我国该植物主要分布于广东、广西、云南等地，生长在低山山谷或山坡林边或林中、灌丛中、沟边，其干燥根和叶称为大粘药，收载于《中药大辞典》等著作中，为民间常用中草药[1]，该药具有祛风除湿、舒筋活络、清热解毒的功效，在民间主要用于治疗风湿痹痛、跌打损伤、乳痈、疮疖、脓肿、热淋、湿热泄泻[2]。现代药理及化学成分研究[3]表明，该属植物具有抗炎、镇痛、抗菌等活性，含有甾体、木质素、黄酮等化学成分，研究主要集中在同属植物雾水葛、多枝雾水葛，对红雾水葛药理及化学成分研究未见报到，为了阐明其治疗作用的基础，本研究利用无水乙醇冷浸渍提取红雾水葛根茎，反复应用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等方法分离纯化其乙酸乙酯萃取物，利用紫外灯等理化检识，最终从该种植物中分离鉴定了11个化合物，这11个化合物分别为：木栓酮(Friedelan-3-one)(1)、(24R)-24-豆甾-4,22-二烯-3-酮((24R)-24-ethylcholesta-4,22-dien-3-one)(2)、豆甾醇(stigmasterol)(3)、表木栓醇(epifriedelanol))(4)、海棠果醛(canophyllal)(5)、(24R)-24-豆甾-4-烯-3-酮(3-oxo-4-en-sitoserone)(6)、7-羟基香豆素(7-Hydroxycoumarin)(7)、槲皮素(quercetin)(8)、十七烷酸-1-甘油酯(2, 3-dihydroxypropyl heptadecoate)(9)和γ-菠甾醇(γ-Spinasterol)(10)、β-谷甾醇(β-stigmasterol)(11)。均为首次从红雾水葛植物中分离得到，其中化合物(2)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)为首次从该属植物中得到。

1 仪器与材料

1.1 仪器 EYELA N-1300自动旋转蒸发仪、EYELA NVP-1000隔膜真空泵和EYELA OSB-2200油浴锅(上海爱朗仪器有限公司)；SK7210HP超声清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)；DRX-600型核磁共振仪(Bruker,瑞士)；FA2004N型精密电子分析天平(上海舜宇横平科学仪器公司)；减压真空泵(巩义市予华仪器有限公司)；ZF7-C三用紫外分析仪(上海康华生化仪器制造有限公司)。

1.2 材料 石油醚、乙酸乙酯等化学试剂均为分析纯(科仪化玻有限公司)；薄层硅胶板和柱色谱用硅胶(80～100目，200～300目)(青岛海洋化工厂)；Sephadex LH-20葡聚糖凝胶(青岛海洋化工有限公司)。红雾水葛根茎样品采集于云南芒市，样品经中科院昆明植物研究所方伟副研究员鉴定为红雾水葛Pouzolziasanguinea(Bl.)Merr.)的地下部分。

2 提取与分离

取干燥红雾水葛根茎1.5 kg粉碎后，用无水乙醇冷浸提取3次，每次72 h，过滤合并提取液，经减压浓缩后得浸膏150 g。将浸膏混悬于水溶液中，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3次，各提取液合并浓缩，得石油醚萃取物组分1(Fr.1)5 g,乙酸乙酯萃取物组分2(Fr.2)4 g,其余成分回收得组分3(Fr.3)45 g。组分2(Fr.2)乙酸乙酯部分采用硅胶(80～100目)、(200～300目)柱色谱法多次分离，薄层色谱法跟踪鉴别。用石油醚：乙酸乙酯(30∶1～1∶2)梯度洗脱，得到组分2a(Fr.2a)150 mg、组分2b(Fr.2b)100 mg、组分2c(Fr.2c)120 mg和组分2 d～2 g(Fr.2d～2g)200 mg。

组分2a(Fr.2a)继续用硅胶柱(200～300目)分离，石油醚：乙酸乙酯(20∶1～ 1∶1)梯度洗脱，用薄层色谱跟踪，得化合物(1)12 mg、化合物(4)5 mg和混合物组分2 h(Fr.2h)50 mg,组分2h经Sephadex LH-20甲醇纯化洗脱，薄层色谱检识，得化合物(10)6 mg、组分2h(a)和2h(b),2h(a)和2h(b)分别经硅胶柱(200～300目)分离，再经石油醚：乙酸乙酯(10∶1～1∶1)再梯度洗脱，得到化合物(7)3 mg和化合物(11)2 mg;组分2b(Fr.2b)经Sephadex LH-20甲醇纯化得到化合物(2)2 mg和2b(a),2b(a)经硅胶柱色谱(80～100目)分离，石油醚：二氯甲烷(10∶1～1∶3)梯度洗脱，得化合物(3)1 mg；组分2c(Fr.2c)经硅胶柱色谱(80～100目、200～300目)分离，石油醚：乙酸乙酯(1∶1～1∶3)洗脱，得到化合物(6)2 mg，组分2d～2g(Fr.2d～2g)分别经Sephadex LH-20柱色谱甲醇洗脱，得化合物(9)2 mg、化合物(8)4 mg和混合物22 mg，将混合物继续用硅胶柱(200～300目)分离，石油醚：乙酸乙酯(2∶1～1∶4)梯度洗脱，得化合物(2)2 mg和化合物(6)1 mg。

3 结构鉴定

化合物(1)：分子式为C30H50O,白色结晶。mp：231～233 ℃，易溶于氯仿，说明化合物极性比较小,Liebermann-Burchard 反应阳性,薄层色谱硫酸乙醇溶液显黄色。置紫外灯下观察无荧光。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 0.72(3H,s,H-24), 0.87(3H,s,H-25),0.88(3H,s,J=6.8Hz,H-23),0.93(3H,s,H-30),0.99(3H,s,H-29),1.00(3H,s,H-26),1.05(3H,s,H-27),1.18(3H,s,H-28),2.39(1H,ddd,J=3.0,7.8,21.0Hz,H-2a),2.29(1H,m,H-2b),2.24(1H,m,H-4)。13C-NMR(CDCl3):δ22.27(C-1), 41.52(C-2), 213.27(C-3), 58.21(C-4),42.14(C-5), 41.27(C-6),18.22(C-7), 53.09(C-8),37.43(C-9), 59.45(C-10), 35.61(C-11), 30.49(C-12),39.72(C-13),38.34(C-14),32.40(C-15),35.99(C-16), 30.03(C-17), 42.76(C-18), 35.33(C-19),28.14(C-20),32.75(C-21),39.24(C-22), 6.82(C-23),14.65(C-24),17.94(C-25),20.25(C-26),18.66(C-27), 32.08(C-28), 35.02(C-29), 31.77(C-30)。根据波普数据和理化检识，与文献[4-7]对照，化合物(1)与木栓酮(Friedelan-3-one)为同一化合物。

化合物(2)：分子式为C29H46O, 醋酐-浓硫酸反应阳性。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ：5.72(1H,s,H-3),5.21(1H,dd,J=18.0,9.0Hz,H-22),5.14(1H,dd,J=18.0,9.0Hz,H-23),1.18(3H,s,H-19),1.02(3H,d,J=6.6Hz,H-21),0.85(3H,d,J=7.8Hz,H-27), 0.81(3H,d,J=7.8Hz,H-29),0.80(3H,d,J=7.8Hz,H-26),0.73(3H,s,H-18)。13C-NMR(600 MHz,CDCl3) δ：35.68(C-1),33.98(C-2),199.74(C-3),123.73(C-4),171.73(C-5), 32.95(C-6),32.04(C-7),38.64(C-8), 53.80(C-9),39.51(C-10),21.23(C-11),40.53(C-12),42.28(C-13),55.86(C-14),25.42(C-15),28.90(C-16),56.0.1(C-17),17.37(C-18),12.13(C-19),35.61(C-20),19.00(C-21),138.13(C-22),129.42(C-23),51.22(C-24),31.92(C25),21.11(C26),21.01(C-27),24.18(C-28),12.20(C-29)。与文献[8]对照，化合物(2)碳、氢谱数据与(24R)-24-豆甾-4,22-二烯-3-酮一致。

化合物(3)：分子式为C29H48O,10%H2SO4溶液显紫红色。1H-NMR(600 MHz,CDCl3):δ5.35(1H,m,H-6),5.18(1H,dd,J=10.1,18Hz,H-22),5.01(1H,dd,J=10.1,18Hz,H-23),1.02(3H,s,H-18),0.84(3H,s,H-19), 0.86(3H,s,H-21), 0.95(3H,s,H-26), 0.89(3H,s,H-28),0.88(3H,s,H-28);13C-NMR(600 MHz,CDCl3) :δ31.62(C-1),31.90(C-2), 71.80(C-3), 39.72(C-4),140.74(C-5), 121.72(C-6), 31.90(C-7),31.90(C-8), 50.11(C-9), 36.53(C-10), 21.07(C-11),39.62(C-12),42.28(C-13),56.08(C-14),24.29(C-15),28.24(C-16),56.93(C-17),12.06(C-18),19.39 (C-19),40.52(C-20),21.08(C-21),138.32(C-22),129.25(C-23),51.23(C-24),31.90(C-25),18.92(C-26),25.13(C-27),25.42(C-28),12.31(C-29)。与文献[9-11]对照，化合物(3)核磁波普数据与豆甾醇(stigmasterol)一致。

化合物(4)：分子式C30H52O,白色粉末，紫外灯，无荧光。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)：δ:0.88(3H,s,H-25),0.95(3H,s,J=8Hz,H-23),0.96(3H,s,H-24),0.99(3H,s,H-30),1.00(3H,s,H-26),1.07(3H,s, H-27),1.20(3H,s,H-28),3.73(1H,m,3α-H)。13C-NMR(CDCl3): δ15.77(C-1),29.70(C-2),72.75(C-3),49.14(C-4),37.94(C-5),41.69(C-6),17.53(C-7),53.17(C-8),37.23(C-9),61.32(C-10),35.53(C-11),30.62(C-12),39.73(C-13),38.42(C-14),32.31(C-15),36.06(C-16),30.02(C-17),42.79(C-18),35.32(C-19),28.14(C-20),32.78(C-21),39.26(C-22),11.62(C-23),16.38(C-24),18.23(C-25),18.65(C-26),2011(C-27),32.07(C-28),35.02(C-29),31.78(C-30)。对照文献[9-11]数据，化合物(4)波普数据与表木栓醇相一致，确定为表木栓醇(epifriedelanol)。

化合物(5)：分子式为C30H48O2,白色针晶，(CH3O)2CO-H2SO4反应阳性,波长254或365 nm照射紫外灯，无荧光。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)：δ0.67(3H,s,H-24),0.72(3H,s,H-25),0.84(3H,s,H-26),0.87(3H,d,J=6.7Hz,H-23),0.95(3H,s,J=8Hz,H-27),0.98(3H,s,H-29),1.07(3H,s,H-30),9.48(1H,s,28-CHO)。13C-NMR(CDCl3): δ22.24(C-1),41.56(C-2),213.05(C-3),58.22(C-4),42.07(C-5),41.10(C-6),18.06(C-7),52.76(C-8),37.16(C-9),59.24 (C-10),35.44(C-11),30.01(C-12),37.63(C-13),38.68(C-14),28.05(C-15),36.04(C-16),47.67(C-17),36.41(C-18),34.78(C-19),28.34(C-20),33.43(C-21),32.36(C-22),6.8(C-23),14.62(C-24),17.23(C-25),18.81(C-26),20.04(C-27),209.14(C-28),34.52(C-29),29.27(C-30)。对照文献[9-11]数据，化合物(5)碳谱、氢谱数据与海棠果醛相一致，鉴定为海棠果醛(canophyllal)。

化合物(6)： 分子式为C29H48O,白色粉末。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ：5.72(1H,s,H-4),1.18(3H,s,H-19),1.25(3H,t,J=8.4Hz,H-21), 0.84(3H,d,J=7.8Hz,H-26), 0.81(3H,d,J=7.8Hz,H-27),0.92(3H,t,J=7.8Hz,H-29),0.71(3H,s,H-18)。13C-NMR(75.4 MHz,CDCl3) δ:35.61(C-1),33.98(C-2),199.74(C-3),123.73(C-4),171.73(C-5), 32.94(C-6),32.04(C-7),35.68(C-8),53.80(C-9),39.60(C-10),21.01(C-11),38.60(C-12),42.28(C-13),55.86(C-14),24.29(C-15),28.08(C-16),55.98(C-17),11.86(C-18),17.37 (C-19),36.11(C-20),18.69(C-21),33.86(C-22),26.03(C-23),45.80(C-24),29.06(C-25),19.81(C-26),19.01(C-27),23.04(C-28),11.86(C-29)。与文献[8,12]对照，化合物(6)碳谱和氢谱数据与(24R)-24-豆甾-4-烯-3-酮一致，鉴定为(24R)-24-豆甾-4-烯-3-酮(3-oxo-4-en-sitoserone)。

化合物(7)：分子式为C9H6O3，无色针晶，紫外灯(365 nm)下显蓝色荧光,异羟肟酸铁显红色。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6) δ：7.96(1H,d,J=19Hz,H-4),6.22(1H,d,J=19Hz,H-3),7.54(1H,d,J=17Hz,H-5),6.81(1H,dd,J=17Hz,H-6),6.72(1H,d,J=4.0Hz,H-8)，与文献[13]对照,结合氢谱数据和理化检识，化合物(7)确定为：7-羟基香豆素(7-Hydroxycoumarin)。

化合物(8)：分子式为C15H10O7,淡黄色粉末,FeCl3显紫褐色;1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6),δ：7.66(1H,s,H-2’),6.86(1H,d,J=13.2Hz,H-5’),7.52(1H,d,J=13.2Hz,H-6’),6.39(1H,s,H-8),6.17(1H,s,H-6),12.47(1H,s,5-OH),10.76(1H,s,7-OH),9.57,9.35,9.29(3,3’,4’-OH)。经薄层色谱(TLC)与对照品混合点样，以(甲醇液)以甲苯：乙酸乙酯：甲酸(10∶8∶1)上行展开,碘显色, 对照品和样品重合，Rf相等。对照文献[14],结合氢谱数据和Rf值，化合物(8)鉴定为槲皮素(quercetin)。

化合物(9)：分子式为C20H40O4，白色粉末。1H-NMR(600 MHz,CDCl3) δ：4.22(1H,dd,J=13.8,7.3Hz,H-1’a)、4.15(1H,dd,J=13.8,7.3Hz,H1’b)、3.93(1H,m,H-2’)、3.70(1H,dd,J=13.8,7.2Hz,3’b)及在2.48和2.35处出现多重峰，分别标识为2’-OH和3’-OH,1.30处出现多重峰，示多个-CH2-单元，0.90处有三重峰，3个氢，提示有1个-CH3取代。根据氢谱数据，对照文献[15]，化合物(9)鉴定为：十七烷酸-1-甘油酯(2, 3-dihydroxypropyl heptadecoate)。

化合物(10)：分子式为C30H52O,无色针晶mp:136～140 ℃。波长254或365 nm处紫外灯，无荧光。1H-NMR(600 MHz,CDCl3):δ5.35(1H,d,J=6Hz,H-6),3.52(1H,m,H-3) 1.00(3H,s,H-18), 0.67(3H,s,H-19);13C-NMR(600 MHz,CDCl3) :δ37.24(C-1),31.62(C-2), 71.80(C-3), 42.26(C-4),140.74(C-5),121.72(C-6),31.90(C-7),31.89(C-8),50.11(C-9),36.53(C-10),21.07(C-11),39.76(C-12),42.28(C-13),56.75(C-14),24.29(C-15),28.26(C-16),56.86(C-17),11.85(C-18),19.36(C-19),36.14(C-20),18.77(C-21),33.92(C-22),26.04(C-23),45.81(C-24),29.12(C-25),19.81(C-26),19.02(C-27),23.05(C-28),12.16(C-29),12.01(C-30)。与文献[16]对照，化合物(10)碳谱和氢谱数据与β-谷甾醇一致，鉴定为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物(11)：分子式为C29H48O，白色结晶，10%硫酸乙醇溶液显红色。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ：5.13(1H,dd,J=12,22.5Hz,H-22),5.34(1H,d,J=7.5Hz,H-7),5.00(1H,dd,J=12,17.5Hz,H-23),3.52(1H,m,H-3),0.68(3H,s,H-19),0.92(3H,s,J=10.5Hz,H-26),1.01(3H,s,H-18),0.80～0.86(9H,m,H21,28,29)。根据理化性质和波普数据，与文献[16]对照，化和物(11)鉴定为γ-菠甾醇(γ-Spinasterol)。

4 讨论

本研究从民间红雾水葛中首次分离得到11个化学成分，其中木栓酮(Friedelan-3-one)(1)、表木栓醇(epifriedelanol)(4)、海棠果醛(canophyllal)(5)3个成分属于木栓烷型五环三萜， (24R)-24-豆甾-4,22-二烯-3-酮((24R)-24-ethylcholesta-4,22-dien-3-one)(2)、豆甾醇(stigmasterol)(3)、(24R)-24-豆甾-4-烯-3-酮(3-oxo-4-en-sitoserone)(6)、γ-菠甾醇(γ-Spinasterol)(10)、β-谷甾醇(β-stigmasterol)(11)5个成分属于甾体类，其他3个成分7-羟基香豆素(7-Hydroxycoumarin)(7)、槲皮素(quercetin)(8)和十七烷酸-1-甘油酯(2, 3-dihydroxypropyl heptadecoate)(9)分别属于香豆素、黄酮和脂肪酸酯，丰富了其根茎化学成分。现代药理体外研究表明木栓酮、槲皮素、β-谷甾醇具有抗炎、镇痛、抗氧化作用[16-18]，槲皮素、β-谷甾醇还具有抗肿瘤作用[18-19]，木栓酮、豆甾醇、7-羟基香豆素、β-谷甾醇具有抗菌、抗病毒等作用[17-21]，这些都为红雾水葛治疗风湿痹痛、疮疖、脓肿和乳痈提供了一定的理论基础。