健脾祛湿方对脾虚湿盛型高脂血症大鼠血脂、胃肠功能、水液代谢的影响及作用机制

赵凡　姜砚馨　蔡祥焜　郑婷　张惠　田世民　张朋朋　王林元　王淳　郑立新　张建军

摘要 目的：觀察健脾祛湿方对脾虚湿盛型高脂血症大鼠血脂、胃肠功能、水液代谢的影响及作用机制。方法：将56只SD大鼠随机分为空白组（n=8）和造模组（n=48），采用“劳倦过度+饮食不节+高脂饲料喂养”复制脾虚湿盛型高脂血症大鼠模型。造模4周后，根据总胆固醇（TC）水平将造模组随机分成6组：即模型组，血脂康组，参苓白术颗粒组，健脾祛湿方低、中、高剂量组，每组8只。分组后开始给药，灌胃剂量为1 mL/100 g，空白组、模型组给予生理盐水，其余组给予相应的受试物，连续给药6周。测定血脂四项TC、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-Ch）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-Ch），胃肠激素，即胃动素（MTL）、促胃液素（GAS）和血管活性肠肽（VIP），水液调节激素醛固酮（ALD）、抗利尿激素（ADH）和心房利尿钠肽（ANP），以及白蛋白（ALB）和总蛋白（TP），采用苏木精-伊红（HE）染色法观察胃、结肠组织形态，免疫荧光法检测结肠水孔蛋白（AQP）3、胃AQP4的表达位置及水平，采用蛋白质印迹法（Western Blotting）检测结肠、胃组织中闭合蛋白（Occludin）的表达量。结果：与正常组比较，模型组大鼠血清TC、TG、LDL-Ch水平升高（P<0.001），HDL-Ch水平降低（P<0.05），血清MTL、GAS水平降低（P<0.001，P<0.01），VIP升高（P<0.001），ALD、ADH升高（P<0.05，P<0.001），ANP水平显著降低（P<0.001），TP、ALB水平降低（P<0.001，P<0.05）。结肠绒毛、胃黏膜出现大量脱落情况，结肠AQP3荧光强度降低，胃AQP4荧光表达增强，结肠、胃组织Occludin表达水平降低。与模型组比较，血脂康组、参苓白术颗粒组、健脾祛湿方低、中、高剂量组大鼠血清TC、TG、LDL-Ch水平呈下降趋势，HDL-C水平升高，MTL、GAS显著升高，VIP水平显著降低，ALD、ADH水平降低，ANP显著升高，结肠、胃组织形态结构有所改善。结肠AQP3荧光表达增强，胃AQP4荧光强度减弱，结肠、胃组织Occludin表达水平增强。结论：健脾祛湿方可降低脾虚湿盛型高脂血症大鼠血脂，有健脾祛湿之功，其作用机制可能是通过调节Occludin、AQP3、AQP4的表达，保护紧密连接结构的完整性达到促进胃肠消化吸收功能，改善水液代谢障碍的作用。

关键词 健脾祛湿方；脾虚湿盛证；胃肠功能；水液代谢；高脂血症；水孔蛋白；紧密连接；肠黏膜屏障

Effect and Mechanism of Jianpi Qushi Prescription on Blood Lipids，Gastrointestinal Function and Water Metabolism of Hyperlipidemic Rats with Spleen Deficiency and Dampness

ZHAO Fan1，JIANG Yanxin1，CAI Xiangkun2，3，ZHENG Ting1，ZHANG Hui1，TIAN Shimin2，3，ZHANG Pengpeng2，3，WANG Linyuan1，WANG Chun1，ZHENG Lixin2，3，ZHANG Jianjun1

（1 Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 2 Chinese Academy of Inspection and Quarantine Comprehensive Test Center，Beijing 100123，China; 3 CAIQTEST（Beijing） Co.，Ltd.，Beijing 100175，China）

Abstract Objective：To observe the effect and mechanism of Jianpi Qushi Prescription（JPQS） on blood lipids，gastrointestinal function and water metabolism of hyperlipidemic rats with spleen deficiency and dampness.Methods：A total of 56 SD rats were randomly divided into blank group（n=8） and modeling group（n=48）.A hyperlipidemic rat model with spleen deficiency and dampness was replicated by overfatigue+irregular diet+high-fat feeding.After 4 weeks of modeling，the modeling group was randomly divided into 6 groups according to total cholesterol（TC） level：model group，Xuezhikang group，Shenling Baizhu Granules group，and JPQS low-，medium-and high-dose groups，with 8 in each group.After grouping，drugs were administered by gavage at a dose of 1 mL/100 g.The blank group and the model group were given normal saline，while the other groups were given corresponding drugs for 6 consecutive weeks.Four blood lipid indexes［TC，triglycerides（TG），low-density lipoprotein cholesterol（LDL-Ch），high-density lipoprotein cholesterol（HDL-Ch）］，gastrointestinal hormones［motilin（MTL），gastrin（GAS），vasoactive intestinal peptide（VIP）］，water regulation hormones［aldosterone（ALD），anti-diuretic hormone（ADH），atrial natriuretic hormone（ANP）］，albumin（ALB） and total protein（TP） were detected.Hematoxylin-eosin（HE） staining was used to observe the morphology of gastric and colonic tissues.Immunofluorescence assay was performed to detect the expression position and level of aquaporin 3（AQP3） in colon and AQP4 in stomach，and Western blot was performed to detect the expression level of Occludin in colonic and gastric tissues.Results：Compared with the blank group，the model group had increased serum levels of TC，TG，and LDL-Ch（P<0.001），VIP（P<0.001） and ALD and ADH（P<0.05，P<0.001），and decreased serum levels of HDL-Ch（P<0.05），MTL and GAS（P<0.001，P<0.01），ANP（P<0.001） and TP and ALB（P<0.001，P<0.05）.Additionally，colon villi and gastric mucosa were shed in large amounts in the model group，with reduced fluorescence intensity of AQP3 in colon，enhanced fluorescence expression of AQP4 in stomach，and down-regulated expression of Occludin in colon and gastric tissues.Compared with the conditions in the model group，the serum levels of TC，TG and LDL-Ch of rats in administration groups presented a downward trend，while the HDL-C level was elevated; MTL and GAS were significantly up-regulated，while VIP was significantly reduced; a decrease was found in ALD and ADH，while a remarkable increase was found in ANP; the morphological structure of colonic and gastric tissues was improved，with enhanced fluorescence expression of AQP3 in colon，weakened fluorescence intensity of AQP4 in stomach and elevated expression of Occludin in colonic and gastric tissues.Conclusion：JPQS reduces the blood lipids of hyperlipidemic rats with spleen deficiency and dampness and shows the effect of invigorating spleen and removing dampness.The mechanism may be regulating the expressions of Occludin，AQP3 and AQP4 to protect the structural integrity of tight junctions and promote gastrointestinal digestion and absorption，thereby improving the water metabolism disorders.

Keywords Jianpi Qushi Prescription; Syndrome of spleen deficiency and dampness; Gastrointestinal function; Water metabolism; Hyperlipidemia; Aquaporin; Tight junction; Intestinal mucosal barrier

中图分类号：R289.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2023.01.002

《素问·经脉别论篇》言：“饮入于胃，游溢精气，上输于脾，脾气散精，上归于肺，通调水道，下輸膀胱，水津四布，五经并行。”［1］中焦脾胃在水谷精微运输代谢过程发挥重要作用。有学者认为脾主运化是全身组织能量代谢的中心环节，生理结构是精微、水湿运化的枢纽，负责机体整个饮食物的代谢；解剖结构为现代医学中最大的消化器官肝脏；物质交换系统负责消化、吸收、排泄的消化系统和新陈代谢［2］。脾居中土，运化水湿，脾健则水含土中，津液四布，脾虚则土不固水、湿浊泛滥。“诸湿肿满，皆属于脾”，脾虚与湿浊常互为因果，相伴而生［3］。

健脾祛湿方具有健脾祛湿、化浊降脂功效，本实验通过饥饱交替喂养大鼠高脂饲料结合劳倦过度的方法建立脾虚湿盛型高脂血症大鼠模型，通过观察大鼠胃肠激素、水液调节激素及相关蛋白水平，探究健脾祛湿方对血脂、胃肠功能及水液代谢的调节作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 无特定病原体（Specific Pathogen-Free，SPF）级健康雄性SD大鼠，6～7周龄，体质量（180±20）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司［批号：SCXK（京）2016-0011］。饲养于中国检验检疫科学研究院综合检测中心SPF级动物实验室［批号：SYXK（京）2018-0007］，实验过程中大鼠自由饮水，饲养室温度为20～26 ℃，相对湿度为40%～70%，灯照周期为12 h，7：00～19：00灯照，19：00～7：00黑暗。实验符合相关伦理学要求（伦理审批号：2021-FD-019）。

1.1.2 药物 健脾祛湿方（红曲、白术、葛根、茯苓、山楂的比例为3∶12∶16∶16∶12），血脂康（北京北大维信生物科技有限公司，批号：20210340），参苓白术颗粒（北京同仁堂，批号：21111016）。

1.1.3 试剂与仪器 总胆固醇（Total Cholesterol，TC）试剂盒（批号：211771）、三酰甘油（Triglyceride，TG）试剂盒（批号：211101）、高密度脂蛋白胆固醇（High Density Lipoprotein-Colesterol，HDL-C）试剂盒（批号：211481）、低密度脂蛋白胆固醇（Low Density Lipoprotein-Colesterol，LDL-C）试剂盒（批号：211581）、血清总蛋白（Serum Total Protein，STP）试剂盒（批号：210911）、白蛋白（Albumin，ALB）试剂盒（批号：210961），以上检测试剂盒购自中生北控生物科技有限公司；胃动素（Motilin，MTL）试剂盒（货号：ml003079）、促胃液素（Gastrin，GAS）试剂盒（货号：ml975012）、血管活性肠肽（Vasoactive Intestinal Peptide，VIP）试剂盒（货号：ml936589）、醛固酮（Aldosterone，ALD）试剂盒（货号：ml002876）、心房利尿钠肽（Atrial Natriuretic Peptide，ANP）试剂盒（货号：ml154710）、抗利尿激素（Antidiuretic Hormone，ADH）试剂盒（货号：ml059245），以上检测试剂盒购自上海酶联生物有限公司；RIPA裂解液（货号：P0013C）、PMSF（货号：ST506）、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物（货号：P1045）、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG（H+L）（货号：A0208）、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（H+L）（货号：A0216），购自碧云天生物科技有限公司。水孔蛋白4（Aquaporin 4，AQP4）抗体（货号：16473-1-AP）、Occludin抗体（货号：13409-1-AP）、β-actin（货号：66009-1-lg），购自美国proteintech公司；水孔蛋白3（Aquaporin 3，AQP3）抗体（abcam公司，英国，批号：ab125219）；全自动生化分析仪（东芝，日本，型号：TBA-120FR），小动物麻醉机（北京众实迪创科技发展有限责任公司，型号：ZS-MV），离心机（湖南恒诺仪器设备有限公司，型号：4-5R），多功能酶标仪（伯腾仪器有限公司，美国，型号：Epoch2C），电泳仪、蛋白电转印槽（Bio-Rad，美国，型号：PowerPac Basic），凝胶成像系统（上海勤翔科学仪器有限公司，型号：620013-9Q）。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备 除空白组外，其余各组均采用高脂饲料喂养，单日饱食，双日禁食，同时每日下午以10%体质量铅块尾部负重，放入水温（20±2）℃，水深50 cm的圆筒中游泳，游泳至力竭，鼻尖没入水中10 s停止。连续造模10周。SD大鼠动物适应性饲养7 d，造模前随机分为2组，空白组8只，造模组48只。每周称重1次。实验第8天，除空白组给予普通饲料饲养外，造模组（48只）均采用“劳倦过度+饮食不节+高脂饲料饲养”复制脾虚湿盛型高脂血症大鼠模型。造模4周后，空白组和造模组大鼠不禁食采血（眼内眦），采血后尽快分离血清，测定血清TC、TG、LDL-Ch、HDL-Ch水平。根据TC水平将造模组随机分6组：模型组、血脂康组、参苓白术颗粒组、健脾祛湿方低、中、高剂量组，每组8只。

1.2.2 给药方法 给药的灌胃剂量为1 mL/100 g，空白组、模型组给予生理盐水，血脂康组［0.12 g/kg，相当于人体0.02 g/（kg·d）］、健脾祛湿方低、中、高剂量组（1.2 g/kg、2.4 g/kg、3.6 g/kg生药量，分别相当于人体推荐量的5倍、10倍、15倍）给予相应的药物，连续给药6周。

1.2.3 观察指标与方法

1.2.3.1 生化分析指标 取材前禁食不禁水12 h，于取材前2 h称体质量后腹腔麻醉，腹主动脉取血，室温静置1～2 h，3 500 r/min，离心半径6 cm，离心15 min，分离血清，取上清液。采用全自动生化分析仪检测TC、TG、LDL-Ch、HDL-Ch、ALB和TP含量。

1.2.3.2 酶联免疫吸附试验检测指标 使用腹主动脉取血，得到血清。根据酶联免疫吸附试验试剂盒说明书步骤，检测MTL、GAS、VIP、ALD、ANP和ADH含量。

1.2.3.3 结肠、胃组织病理形态 将大鼠胃、结肠置于4%多聚甲醛48 h以上，梯度脱水，石蜡包埋，将蜡块放入冰水中，随后切片（片厚约5 μm），载玻片捞出烘干表面水分。用HE染色，洗涤10 min，95%乙醇脱水2 min重复洗2次，二甲苯透明5 min重复洗2次，中性树胶封片，用光学显微镜观察。

1.2.3.4 结肠组织AQP3、胃组织AQP4免疫荧光表达 石蜡切片脱蜡恢复，进行抗原修复处理。滴加一抗，4 ℃孵育过夜，磷酸盐缓冲液（Phosphate-Buffered Saline，PBS）洗涤3次，5 min/次。滴加二抗，室温避光孵育1 h，PBS洗涤3次，5 min/次。滴加4′，6-二脒基-2-苯基吲哚4′（4′，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）復染细胞核后，使用抗荧光猝灭剂封片，荧光显微镜拍照。

1.2.3.5 结肠、胃Occludin表达 采用放射免疫沉淀法裂解液按比例加入苯甲基磺酰氟（Phenylmethylsulfonyl Fluoride，PMSF）、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂，冰上匀浆，4 ℃，12 000×g，离心10 min，取上清，BCA法进行组织浓度测定，计算上样量，加入5×上样缓冲液和定量放射免疫沉淀法裂解液，制备成等浓度等体积的样品，涡旋混匀，100 ℃变性5 min。配置SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳胶（8%分离胶＋5%浓缩胶），上样后先恒压80 V跑30 min，随后恒压120 V跑90 min，至marker跑到底部停止电泳。随后进行转膜，恒压120 V 90 min，5%脱脂奶粉封闭1 h，1×洗涤缓冲液（Tris Buffered Saline Tween，TBST）洗涤5次，5 min/次，一抗4 ℃孵育过夜，回收一抗。1×TBST洗涤5次，5 min/次，二抗孵育1 h，1×TBST洗涤5次，5 min/次。制备显影液，利用暗室显影技术采集化学发光图像、分析灰度值。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行数据处理，计量资料以均值±标准差（±s）表示，多组间比较用方差分析，组间两两比较用最小显著性差异法（LSD）检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对脾虚湿盛型高脂血症大鼠血脂四项的影响与空白组比较，模型组大鼠血清TC、TG、LDL-Ch含量显著升高（均P<0.001），HDL-Ch含量显著降低（P<0.05）。与模型组比较，血脂康、参苓白术颗粒、健脾祛湿方低剂量组TC含量降低（P<0.01，P<0.05，P<0.01）；血脂康、参苓白术颗粒、健脾祛湿方低、高剂量组TG含量显著降低（P<0.01，P<0.001，P<0.001，P<0.001）；血脂康、健脾祛湿方低、中、高剂量组LDL-Ch含量显著降低（P<0.01，P<0.01，P<0.05，P<0.01）；血脂康、健脾祛湿方中、高剂量组HDL-Ch含量显著升高（P<0.01，P<0.05，P<0.05）。见表1。

2.2 对脾虚湿盛型高脂血症大鼠MTL、GAS、VIP的影响 与空白组比较，模型组大鼠MTL、GAS水平显著降低（P<0.001、P<0.01），VIP水平显著升高（P<0.001）。与模型组比较，血脂康、参苓白术颗粒、健脾祛湿方低、中剂量组MTL含量升高（P<0.001）；参苓白术颗粒、健脾祛湿方低、中、高剂量组GAS含量升高（P<0.01，P<0.01，P<0.001，P<0.05）；血脂康、参苓白术颗粒、健脾祛湿方低、中、高剂量组VIP含量降低，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.001，P<0.01，P<0.001，P<0.001）。见表2。

2.3 对脾虚湿盛型高脂血症大鼠ALD、ANP、ADH的影响 与空白组比较，模型组大鼠ALD、ADH水平显著升高（P<0.05，P<0.001），ANP水平显著降低（P<0.001）。与模型组比较，健脾祛湿方中、高剂量组ALD水平显著降低（均P<0.001）；各给药组ANP含量升高，ADH水平降低，差异有统计学意义（P<0.001）。见表3。

2.4 对脾虚湿盛型高脂血症复合模型大鼠TP、ALB的影响 与空白组比较，模型组大鼠TP、ALB水平显著降低（P<0.001，P<0.05）。与模型组比较，血脂康、参苓白术颗粒、健脾祛湿方低、中、高剂量组TP水平显著升高（P<0.001、P<0.01，P<0.001，P<0.01，P<0.01）；血脂康、健脾祛湿方低、中、高剂量组ALB水平显著升高（P<0.001，P<0.05，P<0.001，P<0.01）。见表4。

2.5 对脾虚湿盛高脂血症大鼠结肠、胃组织病理形态的影响 空白组大鼠结肠结构完整，肠绒毛排列整齐，无炎症细胞浸润。模型组结肠结构模糊，肠绒毛存在大量脱落现象，存在炎症细胞浸润现象。血脂康组、参苓白术颗粒组、健脾祛湿方低、中、高剂量组大鼠结肠结构、肠绒毛损伤程度均较模型组有所缓解。见图1。

空白组大鼠胃黏膜结构较完整，腺体排列整齐，大小均一。模型组胃黏膜出现大量脱落情况，腺体分散，排列紊乱。各给药组胃组织病理形态均较模型组有所改善。见图1。

2.6 对脾虚湿盛型高脂血症大鼠结肠AQP3、胃AQP4蛋白表达的影响 与空白组比较，模型组大鼠结肠AQP3荧光强度降低，胃AQP4荧光表达增强；给药处理后，各给药组结肠AQP3荧光强度增强，胃AQP4荧光表达减弱。见图2。

2.7 对脾虚湿盛型高脂血症大鼠结肠、胃Occludin表达的影响 与空白组比较，模型组结肠、胃Occludin表达降低，其中结肠Occludin表达显著降低（P<0.05）。与模型组比较，各给药组结肠、胃Occludin表达增强，差异无统计学意义（P>0.05）。见图3。

3 讨论

东汉医家张仲景在《伤寒论》中有云：“脾助胃气消磨水谷，脾气不转，则胃中水谷不得磨消。”脾失健运，常伴有胃肠消化、吸收功能减弱。MTL、GAS、VIP对胃肠功能具有显著的调节作用，其中MTL、GAS属于兴奋性胃肠激素，VIP属于抑制性胃肠激素。MTL可促进和影响胃肠运动及胃肠道水、电解质的运输；GAS能调节胃肠动力，在调节消化道的功能和维持消化道结构的完整性发挥着重要作用，二者含量降低表明了胃肠消化功能低下或紊乱。VIP是肠道主要抑制性神经递质之一，能抑制胃肠运动，是胃肠道疾病研究的重要指标［4］。实验结果显示，模型组大鼠MTL、GAS水平降低，VIP水平升高，提示模型大鼠胃肠消化功能减弱。健脾祛湿方干预后，大鼠体内血清MTL、GAS水平显著提高，VIP含量降低，表明健脾祛湿方可改善胃肠消化功能，具有一定的健脾功效。

一般认为湿证的病理基础是机体的水液代谢障碍，而机体水液代谢也受体内多种体液因素调节。ALD是肾上腺球状带合成和分泌的类固醇激素，可促进肾小管和集合管主动吸收Na+，排出K+，具有保钠保水作用，影响调节细胞外液容量和电解质，对机体内环境的稳定起着重要作用［5］。ADH可提高肾远曲小管与集合管上皮细胞对水的通透性，促进水的重吸收，从而减少尿量。正常状态下，机体ADH的分泌量与血浆渗透压成反比［6］。ANP由心房合成、贮存和分泌，具有利钠、利尿、舒张血管、降低血压作用，可抑制集合管对NaCl和水的重吸收，增加排尿量，为体内肾素-血管紧张素系统及抗利尿激素作用的对抗激素［7］。研究显示，模型组大鼠ALD、ADH水平显著升高，ANP水平显著降低，说明体内水、钠电解质大量积聚，出现湿邪内停的症状。健脾祛湿方组大鼠体内ALD、ADH水平下降，ANP含量上升，表明大鼠体内水液积聚的现象有所改善。血脂水平在反映机体脂代谢状态的同时，也表明了体内湿浊的情况。研究发现，给药组大鼠TC、TG、LDL-C水平降低，HDL-C含量增高，提示健脾祛湿方在改善机体湿邪内停的同时，对脂代谢紊乱也具有一定的调节作用。

渗透压是判断水、电解质代谢紊乱的重要标志之一，也是维持人体内环境稳态的重要因素［8］。TP、ALB是评定机体水液代谢的常见指标，TP反映了机体对营养物质的吸收功能，机体蛋白质吸收不良，血浆胶体渗透压降低，可导致体液平衡失调［9］。ALB占血浆胶体渗透压80%，负责调节组织和血管内外水分的动态交换，对维持内环境稳定具有重要意义。临床中也常用ALB含量降低来判断水肿的发生。本研究表明，模型组大鼠体内TP、ALB水平显著降低，健脾祛湿方干预后，TP、ALB水平显著升高，可见健脾祛湿方能使机体内环境保持稳定，水液及能量代谢正常。

AQP是一类特异性跨膜转运水的蛋白，是胃肠道水液运输的主要跨细胞蛋白，其在胃肠道的生理作用除了水转运外，还具有胃液分泌及屏障功能等作用［10-11］。AQP3具有相对选择性，主要分布在结肠黏膜腔面细胞质和细胞基底侧，是结肠中水运输最重要的功能分子之一，可将肠腔的水转运至细胞间隙［12］。AQP4为经典AQP，除在中枢神经系统表达丰富外，也广泛分布于哺乳动物胃肠道，参与胃肠道水液代谢及营养物质的消化吸收，对水具有选择透过性作用［13］。机体发生肠炎或腹泻过程中，AQP家族中如AQP1、AQP3、AQP4、AQP7、AQP8、AQP10、AQP11等在小肠和大肠中的表达会下调［11］。同时研究表明AQP4在黏膜渗透调节和维持黏膜完整性中起着重要的代偿作用，SD大鼠经乙醇诱导后引起水肿及胃损伤时，其胃部AQP4表达会增强［14］。实验结果显示，模型组大鼠结肠AQP3水平下降，胃AQP4水平上升，健脾祛湿方干预后，大鼠结肠AQP3、胃AQP4表达水平均有所改善。机体的肠黏膜屏障功能受损时，肠道的消化功能受到影响，也会造成胃肠功能紊乱［15］。紧密连接是肠黏膜机械屏障的核心结构，其中Occludin是第一个被确认的完整的膜紧密连接蛋白，与各种连接功能有关，在维持肠道结构稳定及功能方面发挥重要作用［16-17］。本研究在检测大鼠结肠组织Occludin表达的同时，对胃组织中的结构蛋白也进行了检测。研究发现，模型组大鼠结肠、胃组织中的Occludin表达降低，结合病理切片观察，认为模型组大鼠结肠、胃黏膜受损，紧密连接结构的完整性被破坏。给药处理后，Occludin表达增强，提示大鼠结肠、胃组织受损的紧密连接结构恢复。

本实验模型大鼠胃肠激素、水調节激素及相关蛋白与文献报道一致，健脾祛湿方干预后，综合研究中的指标表现，认为其作用机制可能是通过调节Occludin、AQP3、AQP4的表达，保护紧密连接结构的完整性，达到促进胃肠消化吸收功能，改善水液代谢障碍的作用，发挥了健脾祛湿的功效。本研究在一定程度上揭示健脾祛湿方辨证论治脾虚湿盛型高脂血症的科学内涵，为临床应用提供了实验依据。

利益冲突声明：无。

参考文献

［1］张灿玾，徐国仟，宗全和.黄帝内经素问校释［M］.北京：中国医药科技出版社，2016：192.

［2］伍早霞，张启明，王义国.基于高脂血症探讨脾主运化的生理机制［J］.中国医药导报，2021，18（25）：128-131.

［3］张潇潇，刘浩，朱广辉，等.肿瘤脾虛湿浊病机探讨及康莱特注射液作用特点［J］.山东中医药大学学报，2021，45（4）：449-453.

［4］王梅，武英茹，王越欣，等.不同米炒党参对脾虚大鼠胃肠道功能、免疫功能、水液代谢的影响［J］.中药材，2021，44（11）：2566-2570.

［5］王彦芳，崔宁，韩晓春，等.从激素水平探讨参苓白术散渗湿机制［J］.中华中医药学刊，2018，36（9）：2113-2115.

［6］许晨曦，刘玉强，刘阳芷，等.生、麸炒苍术对痰湿困脾模型大鼠治疗效果［J］.中成药，2016，38（5）：978-983.

［7］李聪，谢鸣，赵荣华，等.肝郁-脾虚-肝郁脾虚不同证候模型大鼠水盐及血管调节变化及与疏肝健脾方的作用［J］.中华中医药杂志，2016，31（3）：1009-1012.

［8］吕琴，赵文晓，孔祥琳，等.黄芪利水功效药理机制研究进展［J］.中成药，2021，43（3）：729-732.

［9］李伟，陈冉，欧美凤，等.基于生物电阻抗评价大鼠脾虚水湿内停模型［J］.中国实验方剂学杂志，2019，25（22）：49-54.

［10］梁瑞峰，李兵杰，葛文静，等.防风不同提取部位的燥性差异及其对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜水通道蛋白的影响［J］.中草药，2021，52（11）：3312-3320.

［11］ZHU C，CHEN Z，JIANG Z.Expression，Distribution and Role of Aquaporin Water Channels in Human and Animal Stomach and Intestines［J］.Int J Mol Sci，2016，17（9）：1399.

［12］潘姣，张晓雨，孙光军，等.缩泉润肠方对便秘模型大鼠结肠组织中水通道蛋白的影响［J］.中医学报，2022，37（2）：360-364.

［13］范晓艳，何峰，韩昭，等.温针灸对消化不良性腹泻大鼠结肠黏膜水通道蛋白3、4表达的影响研究［J］.针灸临床杂志，2021，37（11）：63-68.

［14］BDIS B，NAGY G，NMETH P，et al.Active water selective channels in the stomach：investigation of aquaporins after ethanol and capsaicin treatment in rats［J］.J Physiol Paris，2001，95（1-6）：271-275.

［15］王淼蕾，刘俊宏，汪龙德，等.疏肝健脾法对肝郁脾虚型IBS-D大鼠肠黏膜屏障功能的影响［J］.时珍国医国药，2022，33（1）：29-33.

［16］李超然，王雪，冯楚文，等.艾灸对慢性疲劳综合征大鼠肠黏膜屏障修复及疲劳改善作用的研究［J］.中国中医药科技，2022，29（4）：523-527.

［17］马秀兰，王佳林，张兴艳，等.复方蜥蜴散凝胶对溃疡性结肠炎模型大鼠Cingulin、Occludin、ZO-1蛋白的表达影响［J］.实用中医内科杂志，2022，36（8）：7-10，146-147.

（2022-11-15收稿 本文编辑：吴珊）

基金项目：国家重点研发计划（2018YFC1706803）作者简介：赵凡（1995.10—），女，硕士，研究方向：中药基本理论与临床应用，E-mail：zhaofanfan121@163.com通信作者：张建军（1965.08—），女，博士，教授，博士研究生导师，研究方向：基于中药药性与临床应用的药效机制及物质基础研究，E-mail：zhangjianjun@bucm.edu.cn；郑立新（1980.08—），女，硕士，副高级工程师，研究方向：毒理与保健食品功能，E-mail：594782086@qq.com