云南山橙果实中的生物碱类成分研究*

刘家欢，吴 静，郁 阳，，蔡祥海△

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012；2.中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，云南 昆明 650201)

山橙属（Melodinus）是夹竹桃科（Apocynaceae）的一个大属，全球约53 种，分布于亚洲热带、亚热带和大洋洲至太平洋沿岸。我国产11 种，主要分布于西南、华南及台湾等省区[1]。山橙属植物在民间药用广泛，例如，山橙（M.suaveolens）的果实用于治疗腹痛、疝气、消化不良、小儿疳积、睾丸炎等症[1]；茶藤（M.magnificus）的叶经揉制作茶饮料，有兴奋作用[1]；尖山橙（M.fusiformis）全株供药用，具有活血、补肺、祛风、通乳和治风湿性心脏病等功效[1]。

山橙属植物丰富的化合物类型和广泛的生物活性使得国内外学者对其开展系统而深入的研究。该属植物中的生物碱成分种类及结构丰富多样，已知报道的生物碱约300 个[2]，其中以单萜吲哚生物碱最为主要。本课题组前期从该属植物山橙（M.suaveolens）、思茅山橙（M.henryi）、薄叶山橙（M.tenuicaudatus）、龙州山橙（M.morsei）、尖山橙（M.fusiformis）以及云南山橙（M.ynnanensis）的茎叶部位中鉴定了一系列骨架新颖或细胞毒活性显著的单萜吲哚生物碱[3-7]。为了挖掘更多结构新颖或活性显著的化合物分子，同时对比同一植物不同部位次生代谢产物的差异，我们对云南山橙的果实进行系统的生物碱成分分离，从中鉴定21 个单体化合物，包括1 个新的单萜喹啉生物碱melloyunnanine D（1）。20 个已知化合物依次鉴定为：scandine（2），scandine N-oxide（3），10-hydroxyscandine（4），tabersonine（5），11-methoxytabersonine（6），11 -hydroxytabersonine （7），lochnericine（8），pachysi-phine（9），11-hydroxylochnericine（10），19Rhydrox ytabersonine （11），19R -acetoxytabersonine（12），voaphylline（13），19S-vindolinine（14），19Rvindolinine（15），venalstonidine（16），17α -hydroxyvenalstonine （17），19R -methoxytubotaiwine（18），kopsiyunnanines F1 （19），stemmadenine -N -oxide（20），16-epi-stemmadenine（21）。

1 仪器与材料

比旋光用Jasco P-1020 数字式旋光仪测定。ESIMS 在UPLC-IT-TOF 或Agilent G6230 TOF 质谱仪上测定。HRESIMS 在Agilent G230 质谱仪上测定。1D 和2D-NMR 在Bruker AM-400、DRX-500 或AV-600 核磁共振仪上测定，以TMS 为内标，化学位移δ以ppm 为单位，耦合常数J 以Hz 为单位。分析或半制备型Waters 1525 HPLC 系统，色谱柱为Waters Xbridge 系列或Waters Sunfire 系列（4.6 mm × 150 mm；19 mm×250 mm）。反相填充材料RP-18 硅胶（20～45 μm）日本Fuji 公司生产。中压色谱MPLC 为Buchi 系统，色谱柱为RP-18 填充柱（15 × 230 and 26×460 mm）。柱层析用硅胶（200～300 目）为安徽良臣硅源材料有限公司生产，薄层层析硅胶板为青岛海洋硅胶试剂厂生产。凝胶材料Sephadex LH-20 为Pharmacia 公司生产。生物碱显色剂为改良碘化铋钾。所用试剂石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇均为工业级溶剂，经过重蒸后使用。

云南山橙（Melodinus yunnanensis Tsiang & P.T.Li）的果实于2020年1月采自云南省耿马县，经由刘成工程师鉴定，样品标本存放于中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，标本号为Cai20200107。

2 提取与分离

云南山橙（M.yunnanensis）的新鲜果实5 kg，切碎后用氯仿常温浸提3 次（3×10 L），每次间隔2 d，提取液减压回收，得到总浸膏。总浸膏用0.5%的HCl溶液溶解完全，调pH 到2～3，用等体积乙酸乙酯萃取3 次，除去非生物碱杂质；酸水部位用20%的氨水调节pH 到8～9，用等体积乙酸乙酯萃取3 次，合并浓缩乙酸乙酯层得到生物碱总碱（28.6 g）。用30 g RP-18反相硅胶拌样，经C18MPLC 中压柱10%～90%甲醇水溶液梯度洗脱，用TLC 薄层色谱法和碘化铋钾显色剂检测，合并为6 个组分（Fr.A-F）。

Fr.B（1.2 g），经Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶柱用80%甲醇-水溶液等度洗脱，分为2 个组分，B-1～B-2。B-1 利用正相硅胶柱层析，石油醚-丙酮（4 ∶1 v/v）洗脱，进一步采用HPLC（乙腈-水：30 ∶70～45 ∶55，v/v）制备得到化合物14（12.9 mg）和17（9.2 mg）。B-2 经HPLC（乙腈-水：40 ∶60～55 ∶45，v/v）制备得到化合物1（8.1 mg）。

Fr.C（3.1 g）经C18MPLC 反相中压（甲醇-水：20∶80～60 ∶40，v/v）梯度洗脱划为7 段（C-1～C-7）。C-3经HPLC（乙腈-水：30 ∶70～40 ∶60，v/v）制备得到化合物4（100 mg）；C-5 经HPLC（乙腈-水：35 ∶65～50 ∶50，v/v）制备得到化合物15（43.9 mg）；C-6 经HPLC（乙腈-水：40 ∶60～55 ∶45，v/v）制备得到化合物18（12 mg）；C-7 经HPLC（乙腈-水：45 ∶55～60 ∶40，v/v）制备得到化合物16（17.5 mg）和19（3.2 mg）。

Fr.D（1.4 g），经Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶柱用80%甲醇-水溶液等度洗脱，分为6 个组分（D-1～D-6）。D-2 先经正相硅胶柱层析，氯仿-丙酮（4 ∶1，v/v）洗脱，再采用HPLC（乙腈-水：40 ∶60～55 ∶45，v/v）分离纯化得到化合物20（15 mg）和21（30.4 mg）。

Fr.E（5.5 g），先经C18MPLC 反相中压（甲醇-水：30 ∶70～60 ∶40，v/v） 梯度洗脱划段得到3 个组分（E-1～E-3），E-2（3.9 g）经过正相硅胶柱层析，石油醚-丙酮（9 ∶1，v/v）洗脱，得到化合物5（95 mg）、2（约1 g）和3（29.7 mg）。Ⅴ-3 经过正相硅胶柱层析，石油醚-丙酮（10 ∶1，v/v）洗脱，得到的组分再进一步用HPLC 纯化（乙腈-水：50 ∶50～65 ∶35，v/v）得到化合物9（7.7 mg）、11（6.5 mg）和7（188 mg）。

Fr.F（1.6 g），先经C18MPLC 反相中压（甲醇-水：30 ∶70～70 ∶30，v/v） 梯度洗脱划段得到2 个组分（F-1～F-2），F-2 经HPLC（乙腈-水：60 ∶40～75：25，v/v）分离得到化合物6（3 mg）、8（13.3 mg）、10（90 mg）、12（13.4 mg）和13（12 mg）。

图1 生物碱1～21 的化学结构

图2 化合物1 主要的1H-1H COSY，HMBC 和ROESY 相关

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色粉末。[α]24.6D+ 73.5（c，0.11，MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）297（2.87），247（3.28），205（3.80）nm。高分辨质谱（HREISMS）给出其分子离子峰m/z 367.1661（[M-H]-，计算值为367.1663）推断其分子式为C21H24N2O4，不饱和度为11。1H NMR 谱（表1）显示一组芳环质子信号[δH7.07（1H，d，J=7.8 Hz），6.62（1H，t，J=7.8 Hz），6.91（1H，t，J=7.8 Hz），6.58（1H，d，J=7.8 Hz）]，一个羟基信号[δH4.38（1H，br.s）]，一个甲氧基信号[δH3.49（3H，s）]，一个单峰的次甲基信号[δH1.87（1H，s）]以及一个二重峰的甲基信号[δH1.17（3H，d，J=7.4 Hz）]。13C NMR 和DEPT 谱（表1）图显示出21 个碳信号，包括1 个甲基信号，1个甲氧基信号、4 个亚甲基信号、8 个次甲基信号和7个季碳信号。低场区的碳谱信号能指认出一个酯羰基（δC171.6），一个未被取代的四氢喹啉环（δC142.2，128.1，127.2×2，118.5，115.8）。通过1D NMR 图谱分析，发现化合物1 与已知化合物meloyunnanine A 相似，主要区别在于化合物1 的高场区出现两个次甲基信号（δC53.4，53.2），而低场区未见碳碳双键信号。1H-1H COSY 谱显示H2-3/H-14/H-15 的自旋耦合片段，HMBC 谱给出H-15（δH3.05）与C-20（δC47.2）、C-21（δC79.7）的相关信号，再结合分子式，推测化合物1 的C-14、C-15 位为环氧取代。

表1 化合物1 的1H 和13C NMR 数据（500/125 MHz，acetone-d6）

化合物1 的相对构型由ROESY 谱图分析推定。其中主要的ROESY 相关信号H-19/H-21 表明这两个氢质子取向一致，为α 取向；相应地，H3-18/H-15之间以及Hb-17/H-15 之间的NOE 相关，表明18-CH3、Hb-17 和H-15 同处于平面的另一侧，为β 取向。此外，C-2 位的-OH 以及C-16 位的-COOCH3没有可靠的NOE 相关信号，但鉴于分子骨架的刚性，它们的构型可判定为β。另外，其构型的确定也可以通过CH3-18 的化学位移判定，由于受到OH 的γ-steric效应。鉴于meloyunnanines A-C 也是从同一植物中发现且已经发表，由此确定化合物1 结构并命名为meloyunnanine D。

化合物2：白色粉末。使用400 MHz 氢谱和500 MHz 碳谱分别测定，下同。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.80 （1H，s，NH），7.42（1H，d，J=7.7 Hz，H-9），7.03 （1H，t，J=7.7 Hz，H-10），7.16 （1H，t，J=7.8 Hz，H-11），6.90 （1H，d，J=7.8 Hz，H-12），5.72（1H，m，H-14），5.68（1H，d，J=12.8 Hz，H-15），5.60（1H，d，J=10.8 Hz，H-19），4.88（1H，d，J=17.5 Hz，H-18），4.78 （1H，d，J=10.8 Hz，H-18），3.56（3H，s，-OCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 168.6（s，C-2），48.7（t，C-3），54.1（t，C-5），41.8（t，C-6），58.5（s，C-7），129.8（s，C-8），128.1（d，C-9），124.2（d，C-10），128.3（d，C-11），115.8 （d，C-12），136.3（s，C-13），123.6（d，C-14），132.1（d，C-15），64.9（s，C-16），45.3（t，C -17），114.6（t，C -18），143.3（d，C -19），48.1 （s，C -20），85.2 （d，C -21），171.3 （s，COOCH3），52.4（q，-OCH3）。以上数据与文献对比[8-9]，鉴定化合物2 为scandine。

化合物3：白色粉末。1H NMR（400 MHz，methanol-d4）δ 8.10（1H，d，J=7.8 Hz，H-9），7.08（1H，t，J=7.7 Hz，H-10），7.22（1H，t，J=7.8 Hz，H-11），6.87（1H，d，J=7.8 Hz，H-12），5.90（1H，dd，J=2.3，10.3 Hz，H-14），5.90（1H，overlap，H-15），5.86（1H，overlap，H-19），5.10（1H，d，J=17.4 Hz，H-18），5.06（1H，d，J=10.8 Hz，H-18），3.55（3H，s，-OCH3）；13C NMR（125 MHz，methanol-d4）δ 170.6（s，C-2），62.8（t，C-3），66.6（t，C-5），34.6（t，C-6），60.4（s，C-7），126.8（s，C-8），131.0（d，C-9），117.7（d，C-10），129.5（d，C-11），116.7（d，C-12），137.3（s，C-13），124.4（d，C-14），132.5（d，C-15），63.7（s，C-16），43.3（t，C-17），115.6（t，C-18），142.5（d，C-19），50.5 （s，C-20），93.1（d，C-21），170.6（s，COOCH3），53.5（q，-OCH3）。以上数据与文献对比[10]，鉴定化合物3 为scandine N-oxide。

化合物4：白色粉末。1H NMR（400 MHz，methanol-d4）δ 6.86（1H，d，J=2.3 Hz，H-9），6.61（1H，dd，J=8.5，2.3 Hz，H-11），6.67（1H，d，J=8.5 Hz，H-12），5.73（1H，m，H-14），5.66（1H，overlap，H-15），5.62（1H，overlap，H-19），4.92（1H，d，J=17.5 Hz，H-18a），4.84（1H，d，J=10.8 Hz，H-18b），3.59（3H，s，-OCH3）；13C NMR（125 MHz，methanol-d4）δ 171.5（s，C-2），48.5（t，C-3），54.3（t，C-5），45.5（t，C-6），59.3（s，C-7），128.6（s，C-8），115.5（d，C-9），154.9（s，C-10），117.5（d，C-11），114.7（d，C-12），131.0（s，C-13），124.1（d，C-14），132.7（d，C-15），64.7（s，C-16），40.8（t，C-17），114.9（t，C-18），143.7 （d，C-19），48.8 （s，C -20），85.0 （d，C -21），170.0（s，COOCH3），53.0（q，-OCH3）。以上数据与文献对比[11]，鉴定化合物4 为10-hydroxyscandine。

化合物5：白色粉末。1H NMR（600 MHz，acetoned6）δ 9.33（1H，s，NH），7.31（1H，d，J=7.4 Hz，H-9），6.87（1H，t，J=7.4 Hz，H-10），7.15（1H，t，J=7.4 Hz，H-11），7.04（1H，d，J=7.4 Hz，H-12），5.79（1H，m，H-14），5.70（1H，d，J=9.9 Hz，H-15），0.64（3H，d，J=7.3 Hz，H-18），3.70 （3H，s，COOCH3）；13C NMR（150 MHz，acetone-d6）δ 167.2（s，C-2），51.2（t，C-3），51.4（t，C-5），45.8（t，C-6），56.2（s，C-7），139.0（s，C-8），122.3（d，C -9），121.3（d，C -10），128.6（d，C -11），110.6（d，C-12），144.7（s，C-13），126.2（d，C-14），133.6（d，C-15），92.5（s，C-16），29.4（t，C-17），7.8（q，C-18），27.6（t，C-19），42.3（s，C-20），70.7（d，C-21），168.8（s，COOCH3），51.1（q，-OCH3）。以上数据与文献对比[12]，鉴定化合物5 为tabersonine。

化合物6：白色粉末。1H NMR（600 MHz，acetoned6）δ 9.30（1H，s，NH），7.15（1H，d，J=8.2 Hz，H-9），6.39（1H，dd，J=7.3，8.2 Hz，H-10），6.66（1H，d，J=2.2 Hz，H-12），5.77 （1H，m，H-14），5.67 （1H，d，J=9.9 Hz，H-15），0.62（3H，t，J=7.5 Hz，H-18），3.29（1H，s，H -21），3.68 （3H，s，COOCH3），3.73 （3H，s，11 -OCH3）；13C NMR（150 MHz，acetone-d6）δ 167.8（s，C-2），51.2（t，C-3），51.4（t，C-5），45.8（t，C-6），55.6（s，C-7），131.2（s，C-8），122.6（d，C-9），106.0（d，C-10），161.2（s，C-11），97.8（d，C-12），145.9（s，C-13），126.2 （d，C-14），133.6 （d，C-15），92.7（s，C-16），23.0（t，C-17），7.8（q，C-18），27.5 （t，C-19），42.4（s，C-20），70.8（d，C-21），168.8（s，COOCH3），51.1（q，COOCH3），55.5（q，11-OCH3）。以上数据与文献对比[13]，鉴定化合物6 为11-methoxytabersonine。

化合物7：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetoned6）δ 9.23（1H，s，NH），8.26（1H，s，OH），7.08（1H，d，J=8.0 Hz，H-9），6.33 （1H，dd，J=8.0，2.1 Hz，H-10），6.58（1H，d，J=2.1 Hz，H-12），0.62（3H，t，J=7.4 Hz，H -18），3.68 （3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 167.8（s，C-2），51.0（t，C-3），51.2（t，C-5），45.7（t，C-6），55.4（s，C-7），129.9（s，C-8），122.2（d，C -9），107.5（d，C -10），158.5（s，C -11），98.8（d，C-12），145.6 （s，C-13），126.0 （d，C-14），133.4（d，C-15），92.2（s，C-16），29.2（t，C-17），7.6（q，C-18），27.3（t，C-19），42.2（s，C-20），70.7（d，C-21），168.7（s，COOCH3），51.0（q，COOCH3）。以上数据与文献对比[14]，鉴定化合物7 为11-hydroxytabersonine。

化合物8：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.32（1H，s，NH），7.24（1H，d，J=7.4 Hz，H-9），6.87（1H，t，J=7.4 Hz，H-10），7.13（1H，t，J=7.4 Hz，H-11），7.03 （1H，d，J=7.4 Hz，H-12），0.73（3H，t，J =7.2 Hz，H -18），3.73（3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 168.0（s，C-2），50.7（t，C-3），51.1（t，C-5），45.9 （t，C-6），56.0 （s，C-7），138.6（s，C -8），122.2（d，C -9），121.4 （d，C -10），128.6（d，C-11），110.7（d，C-12），144.5（s，C-13），54.3（d，C-14），57.3（d，C-15），91.1（s，C-16），24.2（t，C-17），7.5（q，C-18），25.6（t，C-19），41.9（s，C-20），68.7 （d，C -21），168.0 （s，COOCH3），51.1（q，COOCH3）。以上数据与文献对比[15]，鉴定化合物8 为lochnericine。

化合物9：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.32（1H，s，NH），7.27（1H，d，J=7.4 Hz，H-9），6.86（1H，t，J=7.4 Hz，H-10），7.13（1H，t，J=7.4 Hz，H-11），7.03 （1H，d，J=7.4 Hz，H-12），0.70（3H，t，J =7.3 Hz，H -18），3.72（3H，s，COOCH3）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ 166.1（s，C-2），50.3（t，C-3），51.9（t，C-5），45.6 （t，C-6），56.1 （s，C-7），139.1 （s，C -8），122.7（d，C -9），121.6（d，C -10），128.9（d，C-11），110.8（d，C-12），144.9（s，C-13），52.7（d，C-14），56.5（d，C-15），91.7（s，C-16），24.9（t，C-17），7.8（q，C-18），27.5（t，C-19），38.1（s，C-20），71.8 （d，C -21），169.0 （s，COOCH3），51.3（q，COOCH3）。以上数据与文献对比[16]，鉴定化合物9 为pachysiphine。

化合物10：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone -d6）δ 9.23 （1H，s，NH），8.26（1H，s，OH），7.01（1H，d，J=8.0 Hz，H-9），6.33（1H，dd，J=8.0，2.1 Hz，H-10），6.58（1H，d，J=2.1 Hz，H-12），0.72（3H，t，J=7.4 Hz，H-18），3.71 （3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 166.6（s，C-2），51.0（t，C-3），52.0（t，C-5），45.4（t，C-6），55.6（s，C-7），129.9（s，C-8），122.8（d，C -9），107.6（d，C -10），158.6（s，C -11），98.8（d，C -12），145.7（s，C -13），52.4（d，C -14），56.2（d，C-15），91.3（s，C-16），24.5（t，C-17），7.5（q，C-18），27.1（t，C-19），38.0（s，C-20），71.7（d，C-21），168.7（s，COOCH3），51.5（q，COOCH3）。以上数据与文献对比[10]，鉴定化合物10 为11-hydroxylochnericine。

化合物11：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.29（1H，s，NH），7.33（1H，d，J=7.4 Hz，H-9），6.86（1H，t，J=7.4 Hz，H-10），7.14（1H，t，J=7.4 Hz，H-11），7.03 （1H，d，J=7.4 Hz，H-12），5.85（1H，overlap，H-14），5.84 （1H，overlap，H-15），0.82（3H，d，J =6.3 Hz，H -18），3.67（3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 166.6（s，C-2），51.2（t，C-3），51.4（t，C-5），45.8 （t，C-6），56.0 （s，C-7），138.5（s，C -8），122.0（d，C -9），121.2 （d，C -10），128.5（s，C-11），110.4（d，C-12），144.7（s，C-13），126.8（d，C-14），130.8（d，C-15），92.7 （s，C-16），28.3（t，C-17），18.8（q，C-18），65.8（d，C-19），47.6（s，C-20），67.3 （d，C-21），168.9（s，COOCH3），50.9（q，COOCH3）。以上数据与文献对比[17]，鉴定化合物11 为19R-hydroxytabersonine。

化合物12：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.34（1H，s，NH），7.35（1H，d，J=7.3 Hz，H-9），6.87（1H，t，J=7.3 Hz，H-10），7.17（1H，t，J=7.3 Hz，H-11），7.07 （1H，d，J=7.3 Hz，H-12），5.96（1H，m，H-14），5.77 （1H，d，J=10 Hz，H-15），0.85（3H，d，J =6.4 Hz，H -18），3.67（3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 166.4（s，C-2），50.8（t，C-3），51.2（t，C-5），45.5（t，C-6），56.2（s，C-7），138.3 （s，C-8），122.1 （d，C-9），121.3（d，C-10），128.7（s，C-11），110.7（d，C-12），144.7（s，C-13），128.1 （d，C-14），138.3（d，C-15），92.3（s，C-16），28.3（t，C-17），15.5（q，C-18），66.9（d，C-19），46.8（s，C-20），69.2 （d，C-21），168.3（s，COOCH3），50.9（q，COOCH3），169.8 （s，OCOCH3），20.8（q，OCOCH3）。以上数据与文献对比[18]，鉴定化合物12 为19R-acetoxytabersonine。

化合物13：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.82（1H，s，NH），7.38（1H，d，J=7.6 Hz，H-9），6.93（1H，t，J=7.6 Hz，H-10），6.97（1H，t，J=7.6 Hz，H -11），7.25（1H，d，J =7.6 Hz，H -9），0.74（3H，t，J=7.4 Hz，H-18）.13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 140.4（s，C-2），54.3（t，C-3），54.6（t，C-5），23.7（t，C-6），109.4（s，C-7），129.3 （s，C-8），118.0（d，C-9），118.9（d，C-10），120.8（d，C-11），110.9（d，C-12），136.9（s，C-13），52.4 （d，C-14），59.5（d，C-15），26.6（t，C-16），36.9（t，C-17），7.6（q，C-18），32.9（t，C-19），34.3（s，C-20），59.0（t，C-21）。以上数据与文献对比[19]，鉴定化合物13 为voaphylline。

化合物14：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 7.02（1H，d，J=7.3 Hz，H-9），6.67（1H，t，J=7.3 Hz，H-10），6.93 （1H，t，J=7.3 Hz，H-11），6.63（1H，d，J=7.3 Hz，H-12），0.56（1H，d，J=7.3 Hz，H-18），3.64（3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 81.8（s，C-2），50.9（t，C-3），58.1（t，C-5），38.1（t，C-6），58，7（s，C-7），139.2（s，C-8），122.5（d，C -9），119.9（d，C -10），128.0（d，C -11），110.4（d，C-12），151.7 （s，C-13），130.2（d，C-14），132.5（d，C-15），43.6（d，C-16），32.5 （t，C-17），10.7（q，C-18），59.6（d，C-19），45.6（s，C-20），76.5 （t，C-21），174.2（s，COOCH3），51.7（q，COOCH3）。以上数据与文献对比[20]，鉴定化合物14 为19S-vindolinine。

化合物15：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 7.08（1H，d，J=7.3 Hz，H-9），6.68（1H，t，J=7.3 Hz，H-10），6.96 （1H，t，J=7.3 Hz，H-11），6.64（1H，d，J=7.3 Hz，H-12），0.99（1H，d，J=6.8 Hz，H-18），3.65（3H，s，COOCH3）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ 82.5（s，C-2），50.9（t，C-3），58.3（t，C-5），36.9（t，C-6），60.0（s，C-7），139.5（s，C-8），123.9（d，C-9），120.2（d，C-10），129.6（d，C-11），111.4（d，C-12），151.0（s，C-13），127.8（d，C-14），131.9（d，C-15），39.8（d，C-16），29.2（t，C-17），7.5（q，C-18），49.4（d，C-19），46.7（s，C-20），79.7（t，C-21），175.0（s，COOCH3），51.8（q，COOCH3）。以上数据与文献对比[21]，鉴定化合物15 为19R-vindolinine。

化合物16：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 7.04（1H，d，J=7.2 Hz，H-9），6.64（1H，t，J=7.2 Hz，H-10），6.93 （1H，t，J=7.2 Hz，H-11），6.63（1H，d，J=7.2 Hz，H-12），5.70 （1H，m，H-14），5.49（1H，d，J =9.9 Hz，H -15），3.65（3H，s，COOCH3）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ 65.7（s，C-2），59.9（t，C-3），50.3（t，C-5），37.4 （t，C-6），56.8 （s，C-7），140.4（s，C -8），121.8（d，C -9），119.1 （d，C -10），127.5（d，C-11），111.1（d，C-12），151.1（s，C-13），127.8（d，C-14），133.9（d，C-15），44.4 （d，C-16），30.4（t，C-17），34.2（t，C-18），32.3（t，C-19），36.1（s，C -20），68.1（t，C -21），174.9（s，COOCH3），51.8（q，COOCH3）。以上数据与文献对比[22]，鉴定化合物16 为venalstonidine。

化合物17：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 7.03（1H，d，J=7.2 Hz，H-9），6.61（1H，t，J=7.2 Hz，H-10），6.94 （1H，t，J=7.2 Hz，H-11），6.63（1H，d，J=7.2 Hz，H-12），5.77 （1H，m，H-14），5.93（1H，dd，J =9.9，1.9 Hz，H -15），3.67 （3H，s，COOCH3）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ 66.5（s，C-2），49.1（t，C-3），50.0（t，C-5），45.5（t，C-6），56.0（s，C-7），139.7（s，C-8），121.6（d，C-9），119.6（d，C-10），127.0（d，C-11），111.4（d，C-12），148.8（s，C-13），127.9 （d，C-14），129.4（d，C-15），42.8（d，C-16），71.2（t，C-17），25.8（t，C-18），35.9（t，C-19），40.2（s，C-20），65.2（t，C-21），174.0（s，COOCH3），51.9（q，COOCH3）。以上数据与文献对比[23]，鉴定化合物17 为17α-hydroxyvenalstonine。

化合物18：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.15（1H，s，NH），7.25（1H，d，J=7.3 Hz，H-9），6.89（1H，t，J=7.3 Hz，H-10），7.09（1H，t，J=7.3 Hz，H-11），7.00 （1H，d，J=7.3 Hz，H-12），4.18（1H，s，H-21），3.08（1H，br s，H-15），0.85（3H，d，J=6.0 Hz，H-18），3.71 （3H，s，COOCH3），2.65（3H，s，19-OCH3）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ 168.3（s，C-2），45.7（t，C-3），54.6（t，C-5），45.0（t，C-6），56.2（s，C-7），138.1（s，C-8），121.4（d，C-9），121.0（d，C-10），127.7（d，C-11），110.6（d，C-12），145.0（s，C-13），29.2（t，C-14），30.0（d，C-15），95.8（s，C-16），16.2（q，C-18），76.6（d，C-19），46.9（s，C-20），63.0（d，C-21），172.0（s，COOCH3），51.2（q，COOCH3），55.7（q，19-OCH3）。以上数据与文献对比[24]，鉴定化合物18 为19R-me-thoxytubotaiwine。

化合物19：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.12（1H，s，NH），7.40（1H，d，J=7.3 Hz，H-9），6.86（1H，t，J=7.3 Hz，H-10），7.11（1H，t，J=7.3 Hz，H-11），7.00 （1H，d，J=7.3 Hz，H-12），3.56（1H，s，H -21），0.90 （3H，d，J =5.5 Hz，H -18），3.67（3H，s，COOCH3）；13C NMR （100 MHz，acetone-d6）δ 168.3（s，C-2），46.1（t，C-3），51.2（t，C-5），45.6（t，C-6），59.2（s，C-7），135.6（s，C-8），121.0（d，C-9），121.2（d，C-10），128.3（d，C-11），110.9（d，C-12），144.5（s，C-13），25.0（t，C-14），36.8（d，C-15），95.6（s，C-16），14.5（q，C-18），59.2（d，C-19），64.4（s，C-20），62.1（d，C-21），172.0（s，COOCH3），51.2（q，COOCH3）。以上数据与文献对比[25]，鉴定化合物19 为kopsiyunnanines F1。

化合物20：白色粉末。1H NMR（400 MHz，methanol -d4）δ 7.52 （1H，d，J =7.8 Hz，H -9），7.09（1H，t，J=7.8 Hz，H-10），7.14 （1H，t，J=7.8 Hz，H-11），7.39（1H，t，J=7.8 Hz，H-12），5.60（1H，q，J=6.8 Hz，H -19），4.33 （2H，m，H -17），3.78 （3H，s，COOCH3），1.79（3H，d，J=6.8 Hz，H-18）；13C NMR（125 MHz，methanol-d4）δ 135.2 （s，C-2），75.7（t，C-3），64.9（t，C-5），25.1（t，C-6），109.6（s，C-7），128.2（s，C-8），118.6（d，C-9），120.4（d，C-10），123.2（d，C-11），112.5（d，C-12），136.9（s，C-13），26.9 （t，C-14），34.9（d，C-15），61.4（s，C-16），69.4（t，C-17），14.4（q，C-18），132.0（d，C-19），129.7 （s，C-20），75.7（d，C-21），174.2（s，COOCH3），53.1（q，-OCH3）。以上数据与文献对比[26]，鉴定化合物20 为stemmadenine N-oxide。

化合物21：白色粉末。1H NMR（400 MHz，methanol-d4）δ 10.0（1H，s，N-H），7.44（1H，d，J=7.8 Hz，H-9），6.95（1H，t，J=7.8 Hz，H-10），7.03（1H，t，J=7.8 Hz，H-11），7.39（1H，t，J=7.8 Hz，H-12），5.21（1H，q，J=6.8 Hz，H-19），4.18 （2H，m，H-17），3.68（3H，s，COOCH3），3.53（1H，dd，J=12.2，3.1 Hz，），3.11（1H，d，J=15.4 Hz，H-21a），2.44（1H，d，J=15.4 Hz，H-21b），3.02（1H，m，H-6a），2.88 （1H，m，H-6b），2.99（1H，m，H-5a），2.92（1H，m，H-5b），2.71（2H，m，H-3），2.22（1H，m，H-14a），1.95 （1H，m，H-14b），1.63（3H，d，J=6.8 Hz，H-18）；13C NMR（125 MHz，methanol-d4）δ 133.8（s，C-2），55.6（t，C-3），56.0（t，C-5），27.9（t，C-6），112.9（s，C-7），127.4（s，C-8），117.6（d，C-9），118.2（d，C-10），120.6（d，C-11），111.4（d，C-12），134.9（s，C -13），29.9（t，C -14），37.3（d，C-15），60.9（s，C-16），68.0（t，C-17），13.9（q，C -18），121.8（d，C -19），136.6（s，C -20），55.6（d，C-21），172.7（s，COOCH3），51.9（q，-OCH3）。以上数据与文献对比[26]，鉴定化合物21 为16-epi-stemmadenine。